Что такое ячейка в банке: Как с помощью банковской ячейки купить квартиру и сохранить ценные вещи — Российская газета

Сейфовые ячейки — Банк Акцепт

Банк Акцепт предоставляет в аренду индивидуальные сейфовые ячейки для хранения денежных и материальных ценностей. Договор заключается на срок не менее 15 дней и может быть оформлен по трем схемам:

• особые условия;
• для одного партнера;
• для двоих партнеров.

При заключении договора на двух арендаторов банк обеспечивает доступ к сейфовой ячейке только в присутствии двоих партнеров одновременно.

При заключении договора на особых условиях подробно расписывается схема режима доступа к банковской сейфовой ячейке на различных этапах сделки (такой договор, как правило, используется при совершении крупных сделок, в которых принимают участие несколько сторон).

Со своей стороны банк гарантирует доступ к сейфовой ячейке и возможность помещения/изъятия и хранения ценностей без чьего-либо вмешательства и контроля.

К пользованию сейфовыми ячейками допускаются третьи лица на основании доверенности. Для оформления доступа необходимы паспортные данные доверенного лица.

Стоимость услуг аренды сейфовых ячеек определяется согласно действующим банковским тарифам в соответствии с оговоренным с клиентом сроком аренды.

Список документов Клиента для заключения договора пользования Сейфом

1. Для физических лиц:

• Для юридических лиц, не имеющих расчетный счет в Банке:►▼

  • Документ, удостоверяющий личность лица, заключающего Договор
  • Протокол общего собрания / Решение единственного участника/Приказ о назначении руководителя
  • Устав,
  • Выписка из ЕГРЮЛ с датой выдачи не ранее, чем за 30 дней до заключения Договора,
  В случае заключения Договора лицом, действующим на основании Доверенности:
  • Копия карточки с образцами подписей Клиента, заверенная обслуживающим Клиента банком или нотариально
  • Доверенность, выданная уполномоченному лицу.

«Акцепт» гарантирует клиентам безопасность и конфиденциальность содержимого сейфовых ячеек, расположенных в специально оборудованной зоне Банка с ограниченным доступом.

Тарифы на предоставление индивидуальных банковских сейф-ячеек на 01.03.2020

Главный и рабочий сотовые банки

Клетки из MCB расширяются, чтобы сформировать WCB, который характеризуется жизнеспособностью клеток перед использованием в производственном процессе. Банки производственных клеток рекомендуется хранить в двух или более удаленных друг от друга областях в пределах производственного объекта, а также на удаленном участке, чтобы избежать потери клеточной линии. Двухсайтовое хранение всех ячеек осуществляется как на месте, так и за его пределами. Как только ваш проект будет завершен, любые неиспользуемые ячейки могут быть возвращены вам или уничтожены по вашему выбору.

Для основных банков клеток MDS определяет целостность плазмиды экспрессии генов для основной массы клеток и для статистически значимого числа клонов. Этот метод анализа продиктован способностью определенных клеток разрастаться по большей части культуры во время процесса амплификации, который происходит, когда основной банк клеток расширяется до рабочего банка клеток и процессов в масштабе производства.

Процесс анализа начинается с выделения достаточного количества клонов для адекватного отбора проб популяции клеток в культуре.Характеристика изолятов отдельных клонов гарантирует, что в банке клеток нет значительного количества клеток с отсутствующими или мутировавшими генетическими элементами. Для основного банка клеток, рабочего банка клеток и конечных продуцирующих клеток рестрикционное картирование, Саузерн-блот-анализ и секвенирование выполняются на ДНК, полученной из основной массы клеток.

MDS обеспечивает проверку последовательности путем прямого анализа фрагментов ОТ-ПЦР, нацеленных на соответствующую мРНК для основного банка клеток, а также рабочего банка клеток и конечных продуцирующих клеток.Саузерн-блот-анализ также выполняется для подтверждения стабильности кассет экспрессии со встроенными хромосомами.

Продукты для генной терапии: MDS обеспечивает анализ нуклеиновых кислот вирусных и невирусных генных терапевтических конструкций, включая Саузерн-блот-анализ / рестрикционное картирование; 100% точная проверка последовательности ДНК или РНК из вирусных или плазмидных конструкций; и количественная ПЦР ДНК или РНК.

Анализ растений: MDS предоставляет услуги по идентификации и характеристике генетически модифицированных культур и растений, включая Саузерн-блот-анализ; ПЦР-анализ и проверка последовательности экспрессионной кассеты.

Good Cell Banking Practices

Ампулы этого основного банка клеток (2-3) должны быть выделены для подтверждения контроля качества, что количество клеток и жизнеспособность банка являются приемлемыми и что банк свободен от бактерий, грибов и микоплазм. На этом этапе также важно аутентифицировать основной банк клеток с помощью STR-профилирования, штрих-кодирования ДНК или анализа SNP. Также необходимы дополнительные тесты, такие как вирусный скрининг. После успешного завершения этих тестов ампулу из основного банка клеток следует разморозить и культивировать для получения рабочего банка клеток.Размер этого банка снова будет зависеть от предполагаемого уровня спроса. Перед использованием культур для рутинных экспериментов или производства снова требуются тесты контроля качества (подсчет клеток, жизнеспособность, аутентификация и отсутствие микробных примесей).

Важное примечание: Аутентификация основного и рабочего банков клеток с помощью STR-профилирования, штрих-кодирования ДНК или анализа SNP.

Внедрение данной банковской системы обеспечивает:

• Материал стабильного качества
• Эксперименты проводятся с культурами из того же диапазона числа пассажей
• Клетки культивируются только при необходимости
• Сохраняются исходные характеристики клеточной линии

Банкноты

1. Количество ампул, приготовленных для основного и рабочего банков клеток, зависит от прогнозируемого спроса на их использование.
2. Количество ампул, отобранных для контроля качества, зависит от размера банка. В идеале перед использованием следует протестировать 5% банка.
3. Ампулы из рабочего банка клеток следует использовать последовательно, выдерживая клетки в культуре не более чем на заранее определенное количество удвоений клеток. Это число будет наименьшим в случае клеточных линий с конечной продолжительностью жизни (например, диплоидных линий).
4. Рабочий банк клеток необходимо пополнить из ампулы основного банка клеток. Это должно быть сделано заблаговременно, чтобы можно было завершить контроль качества.
5. Новый основной банк клеток должен быть подготовлен до того, как количество исходных основных клеток упадет ниже пяти ампул.
6. Набор выполняемых тестов контроля качества зависит от предполагаемого использования, например: регулирующие органы могут потребовать дополнительных тестов, таких как вирусный скрининг и кариотипические исследования.

Подготовка банка клеток — Eurofins Scientific

Eurofins BioPharma Product Testing предлагает экспертные возможности для подготовки и определения характеристик большого количества банков клеток млекопитающих (включая стволовые клетки человека) и насекомых.Мы предлагаем основные производственные и рабочие ячейки GMP, непроизводственные основные и рабочие банки GMP и банки ячеек для исследований и разработок, а также банкинг для конечных производственных ячеек по запросу. В соответствии с требованиями EMA и / FDA мы выполняем все производственные банки клеток GMP в наших чистых комнатах без животных (AOF) и без животных. происходит.

Почему выбирают Eurofins BioPharma для тестирования продуктов?

• Наши возможности банковского обслуживания клеток и комплексные услуги по определению характеристик предоставляют единое решение для всех потребностей вашей клеточной линии.
• Наши специалисты по сотовому банкингу обладают более чем 50-летним совместным опытом, предлагая постоянный надзор и мониторинг, а также постоянное устранение неполадок и обновление статуса во время расширения.
• Мы предлагаем варианты длительного хранения с достаточной емкостью для паровой фазы LN2.

Доступны услуги сотового банкинга

Характеристики банка клеток

• Идентификация
  • Определение размера CO1 / штрих-кодирование
  • Кариология
• Микробный
  • Стерильность
  • Микоплазма / спироплазма
• Приходящих вирусов
  • In vitro вирусное тестирование
  • In vivo Тестирование на вирус (субподряд с утвержденным поставщиком)
• Специфические вирусы
  • Вирусы крупного рогатого скота
  • Вирусы свиней
  • кПЦР (полная человеческая панель)
  • Вирусы грызунов (MAP, HAP, RAP)
• Ретровирусы
  • Анализ XC на экотропные ретровирусы
  • S + L- Анализ на ксенотропные ретровирусы
  • Электронная микроскопия для оценки банков клеток и культур
  • Совместное культивирование
  • PERT
• Стабильность
  • Номер копии по qPCR
  • Картирование переваривания рестрикционного фермента с использованием метода Саузерн-блоттинга
  • Секвенирование ДНК по GMP
Услуги по секвенированию нового поколения
• доступны в Eurofins BioPharma Product Testing в Мюнхене, Германия.

Подготовка банка клеток

• Приготовление основных и рабочих банков клеток cGMP млекопитающих и насекомых
• Подготовка непроизводственных и исследовательских банков

Хранилище сотового банка

В дополнение к криогенным морозильникам LN2, предназначенным для производства банков клеток и краткосрочного хранения, у нас также есть дополнительная емкость для хранения паровой фазы LN2 для долгосрочного хранения банков клеток, включая криогенные морозильники LN2, которые:

• Размещены на охраняемых территориях
• Постоянно контролируется нашими проверенными системами мониторинга
• С резервным управлением, круглосуточным мониторингом и резервными генераторами
• Поддерживается полностью проверенной компьютеризированной системой управления лабораторной информацией о стабильности (LIMS).

Оборудование и приборы

• Наборы сотового банкинга класса A / B (один — AOF)
• ISO5 / 7 Чистые помещения (оба без AOF)
• Лаборатория клеточных культур BSL2
• Квалифицированные морозильники с контролируемой скоростью
• Сертифицированные инкубаторы на CO2
• Автоматический подсчет клеток
• Карантинная лаборатория

CellBanking.

1.Что такое сотовый банкинг?

Определение:

2. Как работает сотовый банкинг?

Рисунок 1

3. Что такое клеточная культура?

Митоз: одна клетка становится двумя клетками.

4. Что такое митоз?

5. Что такое ксенотрансплантат?

Определение

Клеточная культура.

6. Что такое стабильная клеточная линия?

7. Что такое трансфекция?

8.Что означает in vivo / in vitro?

1. Клетки, полученные из многоклеточных организмов (культура клеток или культура ткани)
2. Субклеточные компоненты (например, митохондрии или рибосомы)
3. Клеточные или субклеточные экстракты (например, экстракты зародышей пшеницы или ретикулоцитов)
4. Очищенные молекулы в пробирке (часто белки, ДНК или РНК, по отдельности или в комбинации)

— Источник: Википедия

9.Что такое сервисы RNAi?

10. В чем разница между рабочим банком клеток (WCB) и основным банком клеток (MCB)?

11. Где я могу найти услуги мобильного банкинга?

Master Cell Bank | ATCC

Master Cell Bank (MCB) и Working Cell Bank (WCB) — важнейшие процессы в производстве биологических материалов. Поскольку качество вашего конечного продукта зависит от качества клеток, используемых для его производства, при разработке основных банков клеток следует проявлять большую осторожность. При разработке MCB многое может пойти не так. Использование неподходящих и не охарактеризованных клеточных линий, генетическая изменчивость и контаминация клеточных линий — это лишь несколько возможных источников проблем.Наши процессы, опыт и услуги по развитию, которые мы предлагаем, решают все эти проблемы.

Описание услуги разработки Custom Master Cell Bank (MCB):

Предварительная разработка

• Тестирование жизнеспособности клеточных линий
• Испытание на загрязнение
• Проверка идентификации (подлинности) клеток
• STR, CO1, тестирование маркеров экспрессии поверхности
• Разработка спецификации MCB (концентрация — общее количество клеток / флакон, объем на флакон, питательная среда, среда для замораживания, сыворотка, антибиотик, спецификации контроля качества)

Развитие

• Модификации клеточных линий (при необходимости)
• Расширение клеточной линии
  • Выбор идеальной питательной среды и компонентов
  • Культивирование и субкультивирование
• Оттаивание
  • Оценка и проверка методов консервации
  • Испытания токсичности криозащиты
    • Температура, концентрация, продолжительность и т. Д.
  • Исследование профиля охлаждения
• Документация по процедурам, культурам и используемым реагентам

Пост-разработка

• Контроль качества после разработки
• Хранение (паровая фаза жидкого азота)
• Документация хранимых материалов (записи о поступлении, записи банковского обслуживания клеток, записи контроля качества, записи о подготовке партии носителей, записи о стерилизации).

Служба банковского обслуживания сотовой связи: Master Cell Bank (MCB, WCB) поколения

Cell Banking и GLP-совместимый Master Cell Bank (MCB и WCB) Поколение

Создание банка клеток — жизненно важный элемент в производстве стабильных биологических продуктов. Системы банка клеток созданы, чтобы гарантировать сохранение однородной популяции клеток, поддержание их целостности и доступность достаточного количества материала в течение всего срока службы продукта. Тестирование биобезопасности проводится на клеточных линиях при нескольких пассажах.

Тестирование биобезопасности обеспечивает однородный банк клеток и проверяет наличие мутаций и заражений. Тестирование включает в себя следующее:
• Тестирование стерильности и ПЦР на вирусы
• Тестирование на заражение вирусом, грибами или микоплазмой
• Фингерпринтинг ДНК и проверка последовательности векторных конструкций

Во время разработки клеточных линий, экспрессирующих моноклональные антитела, экспрессирующие векторы или рекомбинантные белки, клон используется в качестве источника для получения основного банка клеток (MCB).MCB имеют решающее значение для ранней фазы терапевтических разработок и производства на клинической и коммерческой фазах. В Altogen Labs мы следуем стандартной двухуровневой банковской системе клеток, в которой MCB расширяется для производства рабочего банка клеток (WCB) для повседневного использования в лаборатории. Система MCB / WCB имеет решающее значение для расширения производства терапевтических продуцирующих клеток и используется на более поздних этапах терапевтических разработок.

Altogen Labs включают комплексную программу мониторинга окружающей среды, а также производство банков клеток, подходящих для исследований cGMP.Мы также предлагаем услуги сотового банкинга для производства товаров на рынке или изучения поздних стадий.

Загрузить презентацию PowerPoint по услугам сотового банкинга Altogen Labs: [Загрузить]

Master Cell Banking

Клетки, которые продуцируют терапевтические антитела или другие представляющие интерес молекулы, создаются путем введения экспрессионных конструкций и векторов в геномы клеточных линий различных видов, включая клетки человека, клетки других млекопитающих, клетки насекомых и бактерии.Эти клетки обычно модифицируют посредством трансфекции или трансформации генов с последующими процессами выборочного скрининга, в которых экспрессия или ингибирование биологических характеристик (экспрессия белка, транскрипция мРНК и т. Д.) Используются для идентификации потенциально экспрессирующих ген клеток. После идентификации эти клетки используются для создания MCB и подвергаются криоконсервации для устранения загрязнения, биологической деградации и генетической изменчивости. Клеточные линии также как можно реже пассируют перед криоконсервацией (в дублированных флаконах), чтобы свести к минимуму потенциальное загрязнение и генетические вариации, которые могут возникнуть во время обработки.

Рабочие сотовые банки

Рабочие банки клеток обычно необходимы на более поздних стадиях разработки и производства потенциально терапевтических клеток. Обычно WCB получают путем расширения одного флакона MCB, который был охарактеризован на предмет жизнеспособности и прошел несколько пассажей. В Altogen Labs уже имеется ряд MCB и WCB, в том числе:

• Клетки насекомых
• Клетки млекопитающих
• Клетки грызунов

Мониторинг и безопасность

Altogen Labs предлагает долгосрочное хранение клеток в безопасной, контролируемой и контролируемой среде. Банки клеток выполняются в сертифицированных ламинарных шкафах биобезопасности класса II с воздухом, отфильтрованным HEPA. Клетки выращивают только в предварительно откалиброванных инкубаторах с ультрафиолетовой (УФ) защитой воздуха и воды.

Банки ячеек разделены и хранятся в отдельных морозильных камерах для предотвращения потери из-за неисправности морозильной камеры. Система мониторинга круглосуточно подтверждает надлежащий уровень жидкого азота и температуру в морозильной камере. Полностью дублированная система резервного копирования обеспечивает безопасность хранилища. Мы подтверждаем, что клеточные линии не содержат микоплазм и бактериального загрязнения.

Банк клеток (или индивидуальные криопробирки) отгрузка

Altogen Labs использует материалы в соответствии с требованиями клиента.

Altogen Labs может отправить банки сотовых ячеек непосредственно клиенту или указанному третьему лицу, или в любое место по всему миру.

Чтобы узнать цену, свяжитесь с нами по адресу info@altogenlabs. com или позвоните в Altogen Labs по телефону 512-433-6177.

Получить расценки на услугу
Cell Banking:
Master Cell Bank (MCB, WCB), поколение

см. Также:
Служба криоконсервации и банкинга клеток (соответствует требованиям GLP)

банка клеток линии клеток HEK293T для производства лентивирусных частиц клинического качества | Translational Medicine Communications

Система качества

Система качества Creatio работает в соответствии с действующими правилами GMP и авторизована Испанским агентством лекарственных средств и медицинского оборудования (PE010-1570, AEMPS, Испания).В Creatio действует определенная организационная структура. Функции и обязанности каждого сотрудника предприятия четко определены и задокументированы. Кроме того, в Creatio внедрена специальная система управления документами, которая включает в себя: подходы к оценке рисков, документацию по контролю изменений, записи об инцидентах и ​​несоответствиях, годовую стратегию калибровки, валидации и квалификации, программы аудита, программы обучения персонала, системы профилактического обслуживания, реагенты и исходные материалы. запись и прослеживаемость, управление контролем качества, управление производством, сертификация партий и система выпуска.

Помещения и оборудование

Creatio — это академический центр Университета Барселоны, занимающийся проверкой и производством ATMP для их использования в клинических испытаниях фазы I / II. В учреждении есть 4 чистых помещения класса B, в которых все процедуры могут выполняться в кабинете с ламинарным потоком класса A. MCB и WCB клеточной линии HEK293T (CRL-11 268; ATCC, Мансасса, Вирджиния, США; получено в соответствии с лицензионным соглашением между Университетом Рокфеллера и Клинической больницей Барселоны; 17 октября 2016 г.) обрабатывались в чистом помещении, предназначенном для клеточной терапии. .Доступ в чистое помещение состоит из входа в комнату для предварительной уборки (класс D), в комнату для предварительной уборки (класс C), раздевалку (класс B) и дистрибьютора (класс B) (рис.1). . Смежные комнаты находятся под разным давлением (Δ10–15 Па между комнатами), достигающим 50 Па в чистом помещении класса B. На предприятии Creatio есть два складских помещения (уровень D) и помещение для кондиционирования продукта класса D. Давление, температура и влажность постоянно контролируются и регулируются специальным управляющим программным обеспечением (Controlli Delta Spain, Барселона, Испания).Объект проходит валидацию один раз в год в соответствии с конкретными процедурами управления валидацией. Оборудование проходит валидацию и калибровку в соответствии с заранее определенным годовым планом. Параметры инкубаторов, холодильников, морозильников, морозильников, резервуаров с азотом и инкубаторов клеток. Уровни CO ₂ постоянно контролируются специальным программным обеспечением (Sirius, Nirco, Rubí, Испания).

Схема GMP-объекта Creatio. Объект управляется тремя независимыми системами отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха (ОВК) (оранжевый, синий и зеленый).В белых, не засекреченных областях. Оранжевым цветом — HVAC-1. Синим цветом — ОВК-2. Зеленым цветом — ОВК-3. Помещения, принадлежащие ОВК-3, имеют давление 10 Па и предназначены для хранения и кондиционирования продуктов. Продукция клеточной терапии производится в HVAC-1. Чистые помещения (класс B), принадлежащие HVAC-1, имеют давление 50 Па, в соседних помещениях перепад давления составляет 10-15 Па. HVAC-2 предназначен для продуктов генной терапии. Доступ к чистым помещениям для генной терапии (класс B) предоставляется через раздевалки с перепадом давления 10–15 Па.В этом случае чистая комната класса B находится под давлением (30 Па) по сравнению с соседней раздевалкой (40 Па) в качестве физического барьера для предотвращения распространения вируса

Источник HEK293T и спецификации линии клеток

Линия клеток HEK293T, которая экспрессирует большой антиген Т обезьяньего вируса 40 (SV40) был получен в Университете Рокфеллера из линии клеток HEK293. Согласно сертификату анализа продукт, полученный из ATCC, имел номер пассажа 17. Кроме того, в сертификате анализа клеточной линии HEK293T указаны результаты тестов микробиологического контроля качества, анализа коротких тандемных повторов (STR) и Анализ на основе ПЦР на патогенные вирусы человека: ВИЧ, HepB, HPV, EBV, CMV.Эта информация была задокументирована и использована в качестве отправной точки нашего процесса, и никаких дополнительных манипуляций между покупкой клеточной линии и ее использованием для банковского хранения клеток не производилось.

Идентификация клеточной линии

Был проанализирован следующий STR-профиль клеточной линии HEK293T: амелогенин: X, CSF1PO: 11, 12; D13S317: 12, 14; D16S539: 9, 13; D5S818: 8, 9; D7S820: 11; THO1: 7, 9,3; TPOX: 11; vWA: 16, 18, 19.

Культура клеток HEK293T

Клетки HEK293T инкубировали в течение 2 мин при 37 ° C в термоблоке и быстро переносили в пробирку, содержащую DMEM (Thermo Fisher Scientific, Walthman MA, США) с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Thermo Fisher Scientific).Затем клетки центрифугировали (1250 об / мин, 5 минут), супернатант удаляли и клетки ресуспендировали в свежей культуральной среде для подсчета клеток на основе трипанового синего. Клетки высевали в стерильную апирогенную колбу при плотности 1 × 10 ⁶ клеток x 25 см ² и инкубировали при 37 ° C / 5% CO ₂ в течение 3-4 дней, пока клетки не достигли 80 % слияния. Для пассирования клеток израсходованную культуральную среду удаляли и клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) (Thermo Fisher Scientific).Добавляли TrypLE ™ (Thermo Fisher Scientific) и инкубировали в течение 1 мин для отделения клеток от колбы. После отделения клетки переносили в пробирку, содержащую свежую среду, и центрифугировали (1250 об / мин, 5 мин). Клетки подсчитывали, снова центрифугировали (1250 об / мин, 5 мин) и высевали при плотности 1 · 10 ⁶ клеток · 25 см ² в необходимое количество колб размером 25 или 75 см ² . Проходы клеток были сделаны для достижения более 200 · 10 ⁶ клеток для MCB и 1000 · 10 ⁶ для WCB.

HEK293T криоконсервация

Как только необходимое количество клеток было достигнуто, клетки центрифугировали (1250 об / мин, 5 мин) и осадок ресуспендировали в среде криоконсервации для достижения плотности 10 · 10 ⁶ клеток / мл для MCB и 20 · 10 ⁶ клеток / мл для WCB. Среда для криоконсервации состояла из 95% среды для культивирования клеток (10% DMEM с добавлением FBS) и 5% ДМСО (Scharlab, Setmenat, Испания). Криопробирки были должным образом промаркированы и наполнены 1 мл необходимой концентрации.Криопробирки транспортировали из чистого помещения в зону криоконсервации, и во время транспортировки контролировали температуру. Криоконсервацию проводили в морозильной камере с контролируемой скоростью (Criomed ™, Thermo Fisher Scientific) по программе замораживания, которая понижает температуру на 1 ° C / мин. Затем полученные криопробирки были перенесены в резервуар с газовой фазой с азотом при -180 ° C ± 20 ° C.

Обучение и валидация персонала

Creatio принимает постоянную программу обучения персонала.Производственный персонал также проходит аттестацию и аттестацию каждые 6 месяцев с помощью имитационных испытаний текущих производственных процессов. Персонал, задействованный в производстве MCB и WCB, провел три последовательных имитационных испытания перед началом производственного процесса. Среду триптического соевого бульона (TSB; Becton Dickinson, Мадрид, Испания) использовали для проведения имитационных тестов. Имитационные испытания были разработаны с учетом всех этапов процесса и с упором на наихудшие сценарии и проводились с теми же материалами и оборудованием, которые использовались для производства MCB и WCB.Во время симуляционных испытаний постоянно контролировалось присутствие переносимых по воздуху микроорганизмов и частиц в соответствии со стандартами GMP. Чтобы проверить поддержание асептических условий в процессе моделирования, точки отбора проб были установлены в начале и в конце процесса (отрицательный контроль и моделирование конечного продукта, соответственно).

Мониторинг окружающей среды

Лазерный счетчик частиц (CLiMET, Редлендс, Калифорния, США) использовался для отслеживания взвешенных в воздухе частиц в шкафу (класс A) во время производственного процесса и во время испытаний моделирования.Согласно действующим правилам GMP, максимально допустимые концентрации частиц в воздухе в зонах класса A следующие: размер частиц равный или более 0,5 мкм, 3520 частиц на м ³ ; размер частиц 5 мкм или более, 20 частиц на м ³ [15].

Отстойные планшеты (Becton Dickinson) использовались для мониторинга присутствия переносимых по воздуху микроорганизмов (бактерий и грибков) в шкафу (класс A) во время производственного процесса, а также во время испытаний моделирования.Кроме того, в конце каждого рабочего дня отбирались отпечатки перчаток (мазки пальцев) сотрудников категории А для микробиологического анализа (Becton Dickinson). В соответствии с действующими правилами GMP были установлены критерии приемлемости менее 1 колониеобразующей единицы (> 1 КОЕ / перчатки и> 1 КОЕ / чашку) [15].

Оценка риска продуктов животного происхождения и случайных вирусов

В соответствии с правилами GMP следует избегать использования продуктов животного происхождения в производственном процессе.Кроме того, необходимо контролировать использование веществ животного происхождения, чтобы избежать передачи патогенов конечному продукту. В этом смысле единственным продуктом животного происхождения, использованным в данной работе, была фетальная бычья сыворотка (FBS) (Thermo Fisher Scientific) австралийского происхождения, сертификат анализа которой указывает на отсутствие вируса блютанга, аденовируса крупного рогатого скота, парвовируса крупного рогатого скота, респираторного вируса крупного рогатого скота. синцитиальный вирус, вирус вирусной диареи крупного рогатого скота, гемадсорбирующие агенты, вирус бешенства, реовирус и вирус губчатой ​​энцефалопатии.Учитывая, что FBS является единственным реагентом животного происхождения, используемым в процессе производства банка клеток, можно гарантировать, что производственный процесс не вводит вирусы животных в конечный продукт. Однако для большей безопасности конечный продукт проводится тест на случайные вирусы, как описано ниже.

Проверка процесса MCB и WCB

Одна криопробирка, содержащая клетки HEK293T, была разморожена и разделена на три популяции HEK293T, которые были независимо увеличены для получения трех запасов клеток для MCB.Каждую партию HEK293T увеличивали до концентрации 200 · 10 ⁶ клеток. Каждая партия состояла из не менее 20 криопробирок, всего ≥ 60 криопробирок для MCB. Тесты контроля качества проводились для каждой партии MCB. Из MCB были приготовлены три последовательные и независимые партии WCB. Клетки HEK293T из MCB оттаивали и размножали до концентрации 1000 · 10 ⁶ клеток. Каждая партия WCB состояла из не менее 50 криопробирок, всего ≥ 150 криопробирок для WCB.Тесты контроля качества проводились для каждой партии WCB.

Тест на стерильность и тест на стимуляцию роста

Клеточные культуры и среды TSB подвергали тесту на стимуляцию роста в соответствии с гл. 2.6.1 Европейской фармакопеи, чтобы гарантировать соответствие питательной среды надлежащим требованиям стерильности.

Испытания на стерильность образцов TSB, MCB и WCB были выполнены с использованием метода прямого посева, описанного в гл. 2.6.1 и 2.2.27 Европейской фармакопеи [16].

Тест на микоплазму

Набор Venor®GeM qOneStep (Minerva Biolabs®, Берлин, Германия) использовался для обнаружения и идентификации микоплазм в образцах TSB, MCB и WCB.Метод основан на амплификации кодирующей области рРНК Mycoplasma 16S в соответствии с методом, описанным в гл. 2.6.7 Европейской фармакопеи [16].

Тест кариотипа

Кариотип определяли окрашиванием G-полосы. HEK293T засевали и инкубировали до 80% слияния. 12 мкл KaryoMAX ™ Colcemid ™ (Thermo Fisher Scientific) разбавляли в 6 мл DMEM. Затем к культуре клеток добавляли 6 мл рабочего раствора KaryoMAX ™ Colcemid ™ и инкубировали при 37 ° C / 5% CO ₂ в течение часа.Среду для культивирования клеток удаляли и клетки промывали 3 мл PBS (Thermo Fisher Scientific). После удаления PBS добавляли 1 мл TrypLE ™ (Thermo Fisher Scientific) и клетки инкубировали в течение 1 минуты при 37 ° C. Затем добавляли 5 мл культуральной среды и клетки собирали центрифугированием в течение 5 минут при 1250 об / мин. После удаления супернатанта осадок промывали PBS и снова центрифугировали в течение 5 минут при 1250 об / мин. К клеткам осторожно добавляли 10 мл предварительно нагретого (37 ° C) 0,075 М раствора KaryoMAx ™ KCl и после 10 минут инкубации при 37 ° C клетки фиксировали фиксирующим раствором Карнуа.

Тестирование на случайные вирусы

Тестирование на случайные вирусы основано на анализе цитопатических эффектов в клетках-хозяевах. Образцы клеток HEK293T из MCB и WCB разрушали встряхиванием с шариками из нержавеющей стали диаметром 0,2 и 3 мм. Гомогенат клеток центрифугировали (1250 об / мин, 5 мин, 4 ° C), добавляли 0,9 мл супернатанта к культурам клеток MR5, VERO и RD (Vircell, Гранада, Испания) и инкубировали при 35–37 ° C. Культуры клеток анализировали через 14 дней после инокуляции. Положительный и отрицательный контроли были включены в анализ.ПЦР в реальном времени для идентификации энтеровируса проводили на образцах без цитопатических эффектов.

In-Process Controls (IPC): морфология клеток, слияние и жизнеспособность клеток

Морфология клеток, слияние клеток и жизнеспособность клеток использовались в качестве IPC в течение всего процесса генерации MCB и WCB. Морфологические исследования клеток HEK293T и слияния клеток проводили визуально под микроскопом. Тест исключения трипанового синего проводили на каждом этапе пассажа клеток для проверки жизнеспособности клеток.Образцы с жизнеспособностью <80% не использовались на следующих этапах производства.