Дефектный акт на текущий ремонт образец рб: Дефектный акт на текущий ремонт: образец, бланк, скачать

Дефектный акт на текущий ремонт образец рб: Дефектный акт на текущий ремонт: образец, бланк, скачать

кто его оформляет и в каких случаях

В белорусском законодательстве отсутствует определение дефектного акта. Однако при осуществлении строительных работ предусмотрен ряд случаев, когда его нужно оформить. Рассмотрим наиболее распространенные из них.

Дефектный акт на гарантийный ремонт

В период гарантийного срока заказчик (собственник, владелец, пользователь) вправе требовать от подрядчика устранения результата строительных работ ненадлежащего качества <*>. В такой ситуации необходимо оформить дефектный акт на гарантийный ремонт <*>. Он в случае судебного спора будет являться доказательством ненадлежащего качества строительных работ <*>.

Судебная практика
При рассмотрении спора об исполнении договора строительного подряда судом установлено, что дефектный акт на гарантийный ремонт не составлялся. В таком случае суд, изучив материалы дела, заключил, что убедительных и достаточных доказательств ненадлежащего качества выполненных подрядчиком работ не представлено (решение экономического суда Минской области от 23.

05.2017 (дело N 46-6/2017)).

Кто должен оформить дефектный акт. Дефектный акт на гарантийный ремонт оформляет собственник (владелец) объекта. При необходимости он привлекает организации, которые в период выполнения строительных работ являлись заказчиком, генподрядчиком или субподрядчиком <*>.

Форма дефектного акта. Дефектный акт на гарантийный ремонт нужно составить по форме С-23. Форма и порядок ее заполнения определены в Инструкции о порядке заполнения и применения дефектного акта на гарантийный ремонт, утв. постановлением Минстройархитектуры от 17.10.2011 N 48. В дефектном акте на гарантийный ремонт указывают, какие выявлены дефекты строительных работ, период гарантийного срока, информацию об устранении выявленных дефектов и другие сведения.

Дефектный акт на текущий ремонт

Когда нужно устранить мелкие повреждения или улучшить эстетические качества объекта строительства, проводят текущий ремонт. До начала его осуществления следует оформить дефектный акт <*>. Он служит обоснованием для принятия решения о проведении текущего ремонта и исходным документом для составления сметы на проведение строительно-монтажных работ (далее — СМР) <*>.

Кто должен оформить дефектный акт. В законодательстве не определено, кто обязан оформлять дефектный акт в случае проведения текущего ремонта. Полагаем, его целесообразно оформить организации, на которую возложена обязанность по проведению текущего ремонта. Как правило, это собственник или пользователь объекта строительства <*>. В большинстве случаев именно он обосновывает необходимость текущего ремонта и составляет (заказывает) смету на его проведение.

Форма дефектного акта. Дефектный акт на текущий ремонт составляют по форме С-1. Форма и требования к ее заполнению определены в постановлении Минстройархитектуры от 29.04.2011 N 14. В дефектном акте указывают перечень видов СМР, условия их осуществления и другие сведения, в том числе необходимые для определения сметной стоимости работ.

Дефектный акт на капитальный ремонт

Перед проведением капитального ремонта нужно разработать проектную документацию <*>. Дефектный акт составляют, если выполнение работ <*>:

— не требует разработки чертежей. Решение о необходимости разработки чертежей, как правило, принимает генеральный проектировщик (проектировщик) по согласованию с заказчиком;

— не затрагивает несущей способности конструкций.

Кто должен оформить дефектный акт. Дефектный акт составляет заказчик и генеральный проектировщик (проектировщик) <*>.

Форма дефектного акта. Рекомендуемая форма дефектного акта приведена в приложении Д к ТКП 45-1.02-104-2008. В ней указывают место нахождения дефекта, его наименование и вид, рекомендации по его устранению и иную информацию.

Обратите внимание!
ТКП обязательны для соблюдения субъектами хозяйствования при ссылке на них в законодательных актах, технических регламентах, иных нормативных правовых актах Совмина, а также если сами субъекты хозяйствования в добровольном порядке заявили об обязательности их соблюдения <*>.

Дефектный акт. Словарь сметчика. Основы сметного дела. Электронный бератор.

Дефектный акт (форма С-1) – это документ, который служит обоснованием принятия решения о проведении текущего ремонта и является исходным документом для составления сметы на проведение ремонтных работ.

Форма С-1 подлежит применению организациями независимо от организационно-правовой формы и формы собственности и ИП.

Дефектный акт составляется комиссией, образованной в соответствии с приказом руководителя организации. В ее число включаются лица, занимающиеся наблюдением за эксплуатацией зданий и сооружений, при этом для осмотра и оценки состояния в состав комиссии дополнительно включаются:

• для общественных зданий – представители органов местного или отраслевого управления, ответственные за техническое состояние основных фондов;
• для производственных зданий – главные специалисты предприятия (механик, энергетик, технолог) и инженер по технике безопасности;
• для зданий, являющихся историко-культурными ценностями, – представители Департамента по охране историко-культурного наследия и реставрации.

По желанию собственника к работе комиссии могут привлекаться:

— специалисты-эксперты;

— представители ремонтно-строительных организаций.

Комиссия обследует предполагаемый объект ремонта и фиксирует в дефектном акте формы С-1 все установленные при визуальном обследовании недостатки состояния объекта.

Исходя из серьезности установленных дефектов комиссия принимает решение об объеме, сроках и видах предполагаемых работ, необходимых для устранения выявленных недостатков.

Наименование работ в перечне формы С-1 может быть изложено разговорным языком, если акт составляется предприятием, деятельность которого не связана со строительством. В случае когда дефектный акт составляется профильным предприятием или в состав комиссии входит представитель подрядчика, в графе «Примечание» указывается номер единичной расценки в соответствии со сборниками ресурсно-сметных норм.

В дефектном акте формы С-1 в произвольной форме указываются сведения о стесненных и усложненных условиях производства работ и особенностях технологии ведения работ с применением грузоподъемных механизмов, люлек электрических, автовышек и другие сведения, необходимые для определения сметной стоимости работ.

В графе «Примечание» дефектного акта формы С-1 указывается необходимая заказчику дополнительная информация.

Дефектный акт формы С-1 подписывается членами комиссии и утверждается собственником здания или уполномоченным им лицом.

Дефектный акт на текущий ремонт, списание основных средств, оборудования

Что такое дефектный акт?

На любом предприятии со временем появляется оборудование, которое приходит в негодность по тем или иным причинам. Для фиксирования подобных поломок существует специальная документация, которую заполняет ответственное лицо, устанавливая недочеты и фиксируя выполнение необходимых мероприятий для их исправления.

Какой документ составляется при обнаружении дефекта

Дефектный акт – это бумага фиксирующая поломки, неисправности и недочеты в любом оборудовании или объекте. Такой документ имеет отношение к первичной документации и основывается на составленном выводе комиссии.

Именно дефектный акт может явиться основанием для списания ОС или изделия, так как в него вносятся данные относительно выявленных недочетов в оборудовании, также в акте указывается вариант их исправления, если комиссия установила, что оборудование подлежит восстановлению.

Важно: дефектный акт необходимо составлять по всем требованиям, так как его неточное формирование зачастую служит отказом налоговой службы в признании расходов на ремонт, что повлечет начисление дополнительных налогов и штрафов.

Акт не содержит цены ремонтных работ или полученного ущерба, он является основанием для составления:

• Сметы для ремонта;
• Отчета о целесообразности проведения ремонта;
• Приказа на выполнение ремонтных работ;
• Списания изношенного объекта. Тут вы узнаете, как правильно составить приказ о списании основных средств.

Важно: документ в обязательном порядке формируется, если оборудование находится на гарантии или сервисном обслуживании.

Как правильно составить и отредактировать дефектную ведомость вы узнаете в этом видео:

Кто и когда составляет акт

При поломке техники для выяснения обстоятельств и размера ущерба собирается специальная комиссия по приказу руководителя организации, которая и занимается составлением подобной документации.

На документе в обязательном порядке должны стоять подписи всех участников осмотра оборудования.

Форма и реквизиты дефектного акта

Данный документ имеет унифицированную форму ОС-16 от 2011 года, однако организация вправе разработать внутренний бланк документа. Обычно это таблица или вариант перечня.

В любом случае документ должен содержать основные данные:

• Название предприятия и сведения о руководстве;
• Порядковый номер акта и дата формирования;
• Основание для составления;
• Перечень комиссии;
• Сведения об оборудовании;
• Данные о выявленных дефектах;
• Рекомендации уполномоченных лиц;
• Выводы;
• Подписи.

Пошаговая инструкция формирования

Формировать документ доступно посредством унифицированной формы или собственного разработанного на предприятии образца, для этого достаточно взять фирменный бланк предприятия с логотипом или лист формата А4.

Что представляет собой акт о браке товара и чем он отличается от дефектного акта вы узнаете по ссылке.

Заполнять документ проще в форме таблицы, в которую доступно отдельными графами внести:

• Наименование оборудования;
• Марку;
• Серийный номер;
• Даты изготовления и поступления оборудования;
• Наименование производителя;
• Виды обнаруженных дефектов.

Важно: напротив каждой детали необходимо указывать размер фактического износа в процентах.

Образец заполнения дефектного акта на ремонт.

Акт в обязательном порядке подписывается всеми участниками осмотра и содержит необходимые рекомендации.

Также документ доступно сопровождать необходимой документацией:

• Чертежами;
• Исполнительными схемами;
• Фотоматериалами.

Нюансы заполнения

Документ должен содержать подробные сведения о выявленных дефектах, так как они будут служить основанием для определения размера текущих расходов на ремонтные работы.

Название предстоящих расходов и работ должны излагаться предельно ясно, так чтобы у специалиста, составляющего локальную смету не возникало проблем с документацией.

Мера измерения должна указываться согласно измерителю, принятому в нормативных документах.

В акте необходимо подробно указывать, какого именно рода работы необходимо провести, так чтобы у исполнителя не появлялось желания добавит самостоятельно какие-либо мероприятия.

Особенности составления акта в различных ситуациях

После детального изучения объекта комиссия может прийти к различным выводам, и в зависимости от ее решения составляется документ.

На ремонт

В таком документе необходимо подробно отобразить все предстоящие мероприятия:

• Прочистка;
• Шлифовка;
• Восстановление, каких именно деталей с указанием их серийного номера, размеров самих деталей и составляющих;
• Полная замена каких-либо деталей и прочее.

На замену

Если в процессе осмотра комиссия установила, что ремонт существующего оборудования будет стоить дороже, нежели установка нового, то необходимо в акте указать процентное соотношение износа такой детали, указать на полные ее выход из строя и необходимость в приобретение нового изделия.

Важно: в этом случае документ является основанием для списания определенной части механизма, но если он составляется в период гарантийного обслуживания, появляется необходимость в формировании претензии производителю.

Пример заполненного бланка дефектного акта.

Списание основных средств

Перед проведением подобного мероприятия в состав комиссии в обязательном порядке должен входить специалист, способный дать объективную оценку, если штат предприятия не располагает таким сотрудником необходимо пригласить его из вне.

Как оформить акт на списание основных средств по форме ОС-4 вы узнаете в этой статье.

В данном случае акт должен содержать кроме основных данных и реквизитов:

• Перечень дефектов, признанных неустранимыми;
• Технические параметры изъянов с указанием соответствующих нормативным стандартам замеров.

Списание оборудования

Для списания оборудования, которое считается имуществом организации необходимо составлять бумагу о выявленных недочетах в процессе инвентаризации, обычно данное мероприятие осуществляется перед сдачей годового бухгалтерского отчета.

При плановом осмотре выявляются поломки, признаки износа, которые не возможны к восстановлению, при этом для списания оборудования следует учитывать не первичную цену оборудования, а амортизационный износ.

Важно: акт должен содержать первоначальную цену объекта и сумму затраченную на амортизацию оборудования, и если затраты на ремонт превышают остаточную стоимость следует оборудование списывать.

Что представляет собой акт ввода в эксплуатацию оборудования и как его составить правильно – узнайте по ссылке.

Заключение

Дефектный акт в роли первичного документа является основанием для составления большого количества документов, а также списания расходов на ремонт при исчислении налога.

Это все указывает на то, что к его составлению необходимо подойти со всей ответственностью, включив в документ, как можно больше подробностей относительно степени износа, размеров, технического состояния и характеристик объекта, так чтобы комиссия смогла сделать объективное заключение по поводу целесообразности проведения ремонтных работ.

Как осуществляется расчет по дефектной ведомости стоимости работ вы узнаете тут:

Дефектная ведомость на ремонт (дефектный акт).

       При планировании проведения текущего и капитального ремонтов сметная документация составляется на основании дефектных ведомостей или дефектных актов, что является одним и тем же.
       Для каждого объекта, который нужно отремонтировать составляется отдельная дефектная ведомость (дефектный акт), в которой указывается инвентарный номер данного объекта (помещения). Затраты на ремонт затем будут отнесены на данный объект в соответствии с его инвентарным номером.

Составление дефектной ведомости.

       При производстве ремонтов помещений очень часто возникают неучтенные работы, поэтому от правильного и полного составления дефектной ведомости зависит качественное составление сметы в соответствии с которой будет производится оплата ремонтных работ.
       Для составления дефектной ведомости назначается комиссия, состоящая не менее чем из 3-х человек. Обычно первый представитель это руководитель структурного подразделения, которое эксплуатирует данное помещение, второй это заведующий хозяйством, а третий это специалист по строительству и ремонту. Необходимо чтобы люди, назначенные в комиссии были специалистами именно в той области, в которой выполняется ремонт например если ремонт подразумевает большой объем замены электропроводки, кабелей, светильников, то и в комиссии по возможности должен быть инженер-энергетик, если большой объем трубопроводов отопления и водоснабжения, то специалист разбирающийся в этой области и т.д.
       Первоначально составляем на черновике. Сначала демонтаж. Затем ремонтные работы общестрой (снизу вверх по порядку — пол, стены, потолок), потом электромонтажные работы, слаботочные сети, сантехнические работы и прочие работы.
       В ведомости учитывается только объем выполняемых работ, но для проверки правильности составления отдаем посмотреть сметчику или строителю разбирающемуся в сметах. Сметчик задает миллион вопросов. Например: какие размеры окон и дверей, ширина и длина подоконников, демонтаж окон в каменном здании или в деревянном, названия монтируемых радиаторов, окраска за два раза или один, монтируем плинтусы с кабель каналом или без, а может деревянные и т.д. и т.п. От всего этого зависит величина расценки выполняемых работ при составлении сметы.
       Дополняем ведомость с учетом уточнений и корректировок.
       Утверждает ведомость руководитель или главный инженер организации – собственника помещения.

Образец дефектной ведомости на ремонт помещения.

Cкачать бланк дефектной ведомости на ремонт в excel.

Cкачать дефектную ведомость на ремонт в excel.

Тематическая подборка «Текущий ремонт: готовимся к осенне-зимнему сезону»

Аналитические материалы:

• Текущий ремонт vs строительная деятельность
• Текущий ремонт и аттестация
• Закупка инженерных услуг при проведении текущего ремонта
• Выбор подрядной организации для проведения текущего ремонта
• Текущий ремонт: смета и/или дефектный акт?

Образцы документов:*

• Приказ о создании комиссии по общему осмотру зданий и сооружений
• Акт общего планового (весеннего) осмотра здания
• Акт общего планового (осеннего) осмотра здания (о готовности к зиме)
• Акт частичного планового осмотра технического состояния здания (сооружения)
• Акт внепланового осмотра технического состояния здания (сооружения)

* Обращаем внимание, что приведенные образцы документов являются примерными и должны быть доработаны с учетом специфики, для которых планируются к использованию.

+ БОНУС: видеозапись онлайн-семинара «Текущий ремонт: регулирование, закупки, договор, разрешение споров»

Спикеры:

• Наталья БОБРОВА, юрист-лицензиат, практикующий в сфере строительства, инвестиций и IPO, член Белорусской ассоциации инженеров-консультантов
• Антон БОГАТКО, юрист, юрист, экономист, бизнес-тренер, специалист по организации и проведению процедур закупок, разработчик бизнес-процессов закупочной деятельности

Вы узнаете:

• Как правильно оформить техническое обследование зданий и сооружений?
• Чем руководствоваться при составлении дефектного акта?
• Какие документы нужно иметь сторонам для заключения договора?
• Как оформляются выполнение текущего ремонта хозспособом?
• Вместо текущего ремонта модернизация: ответственность заказчика. Рекомендации по минимизации рисков.
• Как закупить товары (работы, услуги) для ремонта?
• В каких случаях проведение процедур закупок обязательно/рекомендовано?
• Выбор подрядчика: алгоритм действий заказчика (организатора).
• Дополнительные работы: правомерность оформления дополнительного соглашения к договору без организации и проведения процедуры закупки.
• Закупка товаров для выполнения работ: возможности и ограничения.
• Закупки в строительстве: злоупотребления заказчика (организатора)/участников.
• Обзор спорных ситуаций. Рекомендации по минимизации рисков.

Дефектная ведомость | Образец — бланк — форма

Дефектная ведомость или дефектовка, документ составляется при наличии изъянов, недостатков, брака в произведенных материальных ценностях в случае контроля качества как со стороны производителя, продавца, так и со стороны покупателя. Используется как документ регистрирующий расходы при ппроведении ремонтов. Унифицированной формы дефектной ведомости нет, поэтому при ее составлении необходимо руководствоваться требованиями статьи  9 Федерального закона от 21 ноября 1996 г. № 129-фз.

В частности:

1. Все хозяйственные операции, проводимые организацией, должны оформляться оправдательными документами. Эти документы служат первичными учетными документами, на основании которых ведется бухгалтерский учет.

2. Первичные учетные документы принимаются к учету, если они составлены по форме, содержащейся в альбомах унифицированных форм первичной учетной документации, а документы, форма которых не предусмотрена в этих альбомах, должны содержать следующие обязательные реквизиты:

а) наименование документа;

б) дату составления документа;

в) наименование организации, от имени которой составлен документ;

г) содержание хозяйственной операции;

д) измерители хозяйственной операции в натуральном и денежном выражении;

е) наименование должностей лиц, ответственных за совершение хозяйственной операции и правильность ее оформления;

ж) личные подписи указанных лиц.

3. Перечень лиц, имеющих право подписи первичных учетных документов, утверждает руководитель организации по согласованию с главным бухгалтером.

Документы, которыми оформляются хозяйственные операции с денежными средствами, подписываются руководителем организации и главным бухгалтером или уполномоченными ими на то лицами.

4. Первичный учетный документ должен быть составлен в момент совершения операции, а если это не представляется возможным — непосредственно после ее окончания.

Своевременное и качественное оформление первичных учетных документов, передачу их в установленные сроки для отражения в бухгалтерском учете, а также достоверность содержащихся в них данных обеспечивают лица, составившие и подписавшие эти документы.

5. Внесение исправлений в кассовые и банковские документы не допускается. В остальные первичные учетные документы исправления могут вноситься лишь по согласованию с участниками хозяйственных операций, что должно быть подтверждено подписями тех же лиц, которые подписали документы, с указанием даты внесения исправлений.

6. Для осуществления контроля и упорядочения обработки данных о хозяйственных операциях на основе первичных учетных документов составляются сводные учетные документы.

7. Первичные и сводные учетные документы могут составляться на бумажных и машинных носителях информации. В последнем случае организация обязана изготовлять за свой счет копии таких документов на бумажных носителях для других участников хозяйственных операций, а также по требованию органов, осуществляющих контроль в соответствии с законодательством Российской Федерации, суда и прокуратуры.

8. Первичные учетные документы могут быть изъяты только органами дознания, предварительного следствия и прокуратуры, судами, налоговыми инспекциями и органами внутренних дел на основании их постановлений в соответствии с законодательством Российской Федерации.
Главный бухгалтер или другое должностное лицо организации вправе с разрешения и в присутствии представителей органов, проводящих изъятие документов, снять с них копии с указанием основания и даты изъятия.

Указанные положения также должны быть применены при разработке в орагнизации собственной формы дефектной ведомости.

Дефектный акт на текущий ремонт: образец

Дефектный акт на текущий ремонт представляет собой документ, фиксирующий недостатки и недоработки, выявленные при обследовании помещения специально назначенной комиссией.

Аналогичные акты готовятся при контроле за произведенными работами во многих других сферах: ремонт оборудования, спецтехники, в строительстве.

Предназначение документа

Дефектный акт относится к формам учета, которые составляются организациями, осуществляющими коммерческую деятельность с использованием различного оборудования на балансе. По завершении инспектирования комиссия заполняет бланк с выявленными нарушениями и дает рекомендации относительно их устранения.

Правильное составление акта требуется для организации корректного документооборота по бухгалтерии и отражения текущего состояния средств на балансе.

Во время проведения текущего или капитального ремонта, возникает необходимость контроля за надлежащим исполнением работ. Дефектный акт на текущий ремонт, как и другие формы подобных актов, требуется для первичного учета различными предприятиями, имеющими на балансе недвижимость, прежде всего, административные помещения и промышленные объекты.

Табличные сведения документа позволяют оценить состояние помещений и сформировать перечень мероприятий, требуемых для устранения дефектов. В отличие от сметы, акт содержит конкретные требования выполнить определенные действия для исправления без указания стоимости работ.

Предприятие, оформляющее такие акты, может пользоваться своими формами документа, учитывающими специфику деятельности. Например, в строительных организациях используется форма, позволяющая отразить выявленные при строительстве конструктивные нарушения, которые, ввиду своей значимости по последствиям, могут привести к серьезному повышению стоимости по смете и необходимости применения аварийной схемы.

Акт на текущий ремонт затрагивает жилые и производственные объекты, помещения, которые с определенной периодичностью должны обследоваться на предмет инженерно-технической безопасности. Раз в 5-10 лет помещение, входящее в реестр ремонта, должно быть обследовано на предмет технического соответствия принятым в стране нормам.

Правила заполнения

Соблюдая определенные требования, предприятие ведет контроль за состоянием средств на балансе и, при необходимости, выполняет корректировки. Несмотря на отсутствие унифицированного единого для всех сфер бланка, документ должен был составлен с соблюдением определенных правил.

Требования к оформлению

Дефектный акт представляет собой форму, в которой должны быть отражены следующие параметры:

1. Название обследуемого объекта.
2. Перечень представителей, назначенных на составление акта.
3. Выявленные недочеты и нарушения.
4. Рекомендованные комиссией меры по устранению.

Юридически значимым документ становится только при условии его подписания всеми членами комиссии. В своей работе эксперты руководствуются действующими в России стандартами, включая СНиПы, РОСТ и ГОСТы. После заполнения акта и его подписания ставится печать предприятия, в рамках которого работала комиссия.

Особенности процедуры

Информация из акта должна позволять составить верное представление о расходах на действия по устранению недостатков:

• виды работ;
• мера измерения;
• статьи расходов.

Вторая графа бланка заполняется сведениями о видах предполагаемых видах работ и затратах на их выполнение.

Третья графа приводит единицу измерения согласно общепринятым нормативам (м2, м3 и т.д.)

Надлежаще заполненный акт по каждому из предметов осмотра исключает всякие расхождения между заказчиком и лицом, исполняющим работы.

Обследование помещения включает проверку следующих параметров:

1. Состояние фундамента и напольного покрытия.
2. Описание стен, проемов, различных конструкций, включая лестницы, балконы, кровлю.
3. Сведения о коммуникациях и др.

Каждый из параметров должен быть оценен с точки зрения износа, а по завершении проверки даются конкретные рекомендации.

На видео о составлении акта

Каждый дефектный акт может сопровождаться соответствующими приложениями, к числу которых могут относиться чертежи с обмерами, схемы, фотографии, детальные описания выявленных недостатков.

( Пока оценок нет )

Уведомление

и Закон о возможности ремонта

   Сводка   

Истец, подающий иск о строительном дефекте, должен предоставить письменное уведомление о каждом предполагаемом строительном дефекте Подрядчику за 90 дней до подачи иска и предоставить доказательства, подтверждающие такой иск. Истцы должны предоставить Подрядчикам разумный доступ к Жилищу для определения характера и степени дефекта (ов). Подрядчики должны ответить Истцу в течение 30 дней с момента уведомления и могут предложить исправить дефект, компромисс путем оплаты или отклонить, полностью или частично, претензию.Заявители не могут изменять свой список дефектов без дополнительного уведомления и возможности ремонта Подрядчикам. Суды отклоняют иски, возбужденные против Подрядчика Истцом, который не выполнил требования уведомления и возможности ремонта. Если Истец отклоняет разумное предложение по устранению дефекта или иной компенсации Истцу, убытки Истца ограничиваются. Во всех исках о строительных дефектах ущерб ограничивается теми, которые непосредственно вызваны Строительным дефектом.Расчет Подрядчика рассматривается как судебное решение для целей страхования. Ассоциации домовладельцев должны получить одобрение своих членов до возбуждения гражданских исков против подрядчиков.

Автор: [Законодательный орган штата]

Направлено в: [Комитет первой юрисдикции по вопросам страхования]

Закон о претензиях по поводу строительных дефектов в жилищах.

Законодательная декларация : Законодательный орган находит, объявляет и определяет, что [государство] нуждается в альтернативном методе разрешения законных строительных споров, который снизил бы необходимость судебных разбирательств при адекватной защите прав домовладельцев.Законодательный орган заявляет, что эффективный альтернативный механизм разрешения споров по определенным вопросам, связанным со строительными дефектами, должен включать подачу Истцом уведомления Подрядчику о претензии, которую Истец утверждает, что несет ответственность за дефект, и предоставление Подрядчику возможности разрешить претензию без судебного разбирательства. .

Типовое законодательство

  Раздел 1. {Определения}  

(A) «Иск» означает любой гражданский иск, судебный иск или арбитражное разбирательство, требующее, полностью или частично, о возмещении ущерба или другой компенсации в связи с Жилищем, вызванных предполагаемым строительным дефектом.

(B) «Ассоциация» означает [обычно установленное законом определение — обратитесь к местному законодательству.]

(C) «Истец» означает любого, кто заявляет претензию в отношении Строительного дефекта.

(D) «Строительный дефект» имеет значение, присвоенное письменной прямой гарантией, предоставленной Подрядчиком или требуемой применимым законодательством; если никакая письменная, явная гарантия или применимая законодательная гарантия не дает определения, тогда «Строительный дефект» означает вопрос, касающийся проектирования, строительства или ремонта Жилища, изменения, ремонта или дополнения к существующему Жилищу, или принадлежность Жилища, в отношении которого у лица есть претензия к Подрядчику.Термин может включать в себя любой физический ущерб Жилищу, любому приспособлению или недвижимому имуществу, на котором находится Жилище или приспособление, непосредственно вызванный Строительным дефектом.

(E) «Подрядчик» означает любое физическое лицо, фирму, товарищество, корпорацию, ассоциацию или другую организацию, которая занимается проектированием, разработкой, строительством или продажей Жилищ или изменением или дополнением существующего Жилища, ремонтом новое или существующее Жилище, или строительство, продажа, изменение, добавление или ремонт принадлежностей к новому или существующему Жилищу.Термин включает:

(1) Собственник, должностное лицо, директор, акционер, партнер или сотрудник Подрядчика;

(2) Субподрядчики и поставщики рабочей силы и материалов, используемых Подрядчиком в Жилище; и

(3) Группа удержания риска, зарегистрированная в соответствии с применимым законодательством, если таковая имеется, которая страхует всю или любую часть ответственности подрядчика по затратам на ремонт строительного дефекта.

(F) «Жилище» означает односемейный дом, дуплекс или многоквартирный дом, спроектированный для использования в жилых помещениях, в котором право собственности на каждую отдельную квартиру переходит к собственнику в рамках системы кондоминиума или кооператива и включает общие части и улучшения, принадлежат или обслуживаются Ассоциацией или членами Ассоциации.Жилище включает в себя системы, другие компоненты, улучшения, другие конструкции или помещения для отдыха, которые принадлежат дому, дуплексу или многоквартирному дому на момент его первоначальной продажи, но не обязательно являются частью дома, дуплекса или многоквартирного дома. .

(G) «Обслуживать» или «Услуга» означает доставку заказным письмом с уведомлением о вручении на последний известный адрес получателя. Для корпорации, товарищества с ограниченной ответственностью, компании с ограниченной ответственностью или другой зарегистрированной коммерческой организации это означает обслуживание зарегистрированного агента или другого агента для обслуживания процесса, разрешенного законами этого штата.

Раздел 2. {Действия; увольнение без ущерба}

Если Истец подает Иск без предварительного соблюдения требований настоящего Закона, по заявлению стороны в Иниции, суд или арбитр должны отклонить Иск без ущерба, и Иск не может быть повторно подан или возобновлен до тех пор, пока Истец выполнило требования настоящего Закона. В той мере, в какой иск включает в себя основание для иска о возмещении ущерба вследствие телесных повреждений или смерти, такое основание (я) иска (й) не подлежит отклонению в соответствии с настоящим разделом.

Раздел 3. {Уведомление и возможность ремонта}

(A) В каждом Действии, подпадающем под действие настоящего Закона, Истец не позднее, чем за 90 дней до инициирования Иска против Подрядчика, должен предоставить Услугу письменного уведомления о претензии к этому Подрядчику. В уведомлении о претензии должно быть указано, что Истец предъявляет претензию или претензии по дефекту конструкции и направляет уведомление о претензии (претензиях) в соответствии с требованиями настоящего Закона. В уведомлении о претензии должна быть подробно описана претензия или претензии, достаточные для объяснения характера предполагаемых дефектов конструкции и результатов дефектов.Кроме того, Истец должен предоставить Подрядчику любые доказательства, отражающие характер и причину Строительного дефекта, включая отчеты экспертов, фотографии и видеозаписи, если эти доказательства могут быть обнаружены в соответствии с правилами доказывания этого государства. Если после надлежащего запроса Истец не может предоставить такие доказательства, Истцу не разрешается использовать какие-либо такие доказательства, не представленные в качестве доказательства в каком-либо Действии.

(B) В течение тридцати дней после вручения Истцом уведомления о претензии, требуемого в подразделе A, каждый Подрядчик, получивший уведомление о претензии, может вручить Истцу и любому другому Подрядчику, получившему уведомление о претензии, a письменный ответ на претензию или претензии, в котором либо:

(1) Предлагает урегулировать претензию денежной оплатой, ремонтом или их комбинацией без проверки; или

(2) Предлагает осмотреть Жилище, являющееся предметом претензии.

(C) Если Подрядчик полностью отклоняет претензию и не будет ни устранять предполагаемый Строительный дефект, ни урегулировать претензию, или не отвечает на уведомление Истца о претензии в течение срока, указанного в подразделе 3B, Истец может подать иск против Подрядчик по претензиям, описанным в извещении о претензии, без дополнительного уведомления, за исключением случаев, предусмотренных действующим законодательством.

(D) Если Истец отклоняет предложение об урегулировании, сделанное Подрядчиком, Истец должен предоставить письменное уведомление об отказе Истца Подрядчику и, если он представлен юрисконсультом, его поверенному.Уведомление должно включать конкретные фактические и, если известны, юридические причины отклонения Истцом предложения или предложения Подрядчика. Если Истец считает, что предложение об урегулировании

(1) Опускает ссылку на любую часть претензии, или

(2) Было необоснованным в любом случае, Истец должен в своем письменном уведомлении включить те пункты, которые, по мнению Истца, были опущены, и подробно изложить все причины, по которым Истец считает предложение об урегулировании необоснованным.В любом последующем Иске, когда Истец утверждает, что предложение урегулирования было необоснованным, Истец не сможет указать какие-либо причины, которые не были включены в его ответ Подрядчику.

(E) Если предложение по инспекции (ям) сделано в соответствии с параграфом 3B.2, Истец должен в течение тридцати дней с момента получения предложения Подрядчика предоставить Подрядчику и его субподрядчикам, агентам, экспертам и консультантам быстрый и полный доступ к Жилище для осмотра Жилища, документирования любых предполагаемых строительных дефектов и выполнения любых разрушающих или неразрушающих испытаний, необходимых для полной и полной оценки характера, степени и причины заявленных дефектов, а также характера и степени любых ремонтов или замен, которые могут быть необходимо для устранения предполагаемых дефектов.Если требуются разрушающие испытания, Подрядчик должен заранее уведомить Заявителя о таких испытаниях и после завершения испытаний вернуть Жилище в состояние, в котором оно находилось до испытания. Если какой-либо осмотр или тестирование выявляет состояние, которое требует дополнительных испытаний, чтобы позволить Подрядчику полностью и полностью оценить характер, причину и степень Строительного дефекта, Подрядчик должен уведомить Заявителя о необходимости таких дополнительных испытаний и Заявителя. предоставляет доступ, как указано в настоящем документе.Если претензия заявлена ​​от имени владельцев нескольких Жилищ или нескольких владельцев квартир в многоквартирном комплексе, Подрядчик имеет право осмотреть каждое из Жилищ или квартир.

(F) В течение четырнадцати дней после завершения инспекции (й) и испытаний (й), изложенных выше, Подрядчик может обслуживать Истца:

(1) Письменное предложение о полном или частичном устранении Строительного дефекта бесплатно для Истца. Такое предложение должно включать описание любого дополнительного строительства, необходимого для устранения дефекта, описанного в претензии, и предполагаемый график завершения такого строительства;

(2) Письменное предложение об урегулировании претензии денежным платежом;

(3) Письменное предложение, включающее ремонт и денежную оплату; или

(4) Письменное заявление о том, что Подрядчик не будет предпринимать дальнейших действий по устранению дефекта.

(G) Если Истец принимает предложение Подрядчика, сделанное в соответствии с параграфами 2F.1 или 2F.2, и Подрядчик не производит денежный платеж или не устраняет Строительный дефект в согласованные сроки, Истец может подать иск против Подрядчик по претензии, описанной в извещении о претензии, без дополнительного уведомления, за исключением случаев, предусмотренных действующим законодательством. В такой ситуации Истец может также подать оферту Подрядчика и Акцепт Истца, и такая оферта и акцепт создадут опровержимую презумпцию того, что было заключено имеющее обязательную силу и действительное мировое соглашение и должно быть приведено в исполнение судом или арбитром.

(H) Если Истец получает письменное заявление о том, что Подрядчик не будет предпринимать дальнейших действий по устранению дефекта, Истец может подать иск против Подрядчика по претензии, описанной в уведомлении о претензии, без дополнительного уведомления, за исключением случаев, предусмотренных применимым законодательством. закон.

(I) Если Истец отклоняет предложение Подрядчика по устранению Строительного дефекта или урегулированию претензии денежным платежом или их комбинацией, Истец должен направить Подрядчику письменное уведомление об отказе Истца.Уведомление должно включать конкретные фактические и, если они известны, юридические причины отклонения Истцом предложения Подрядчика. Если Истец считает предложение Подрядчика об урегулировании необоснованным, Истец должен подробно изложить все причины, по которым Истец считает предложение об урегулировании необоснованным. В любом последующем Иске, когда Истец утверждает, что предложение урегулирования было необоснованным, Истец не сможет указать какие-либо причины, которые не были включены в его ответ Подрядчику.

(J) После получения отказа Истца и причин такого отказа Подрядчик может в течение пятнадцати дней с момента получения отказа сделать дополнительное предложение ремонта и / или денежной выплаты Истцу.

(K) Если Истец отклоняет дополнительное предложение Подрядчика по устранению Строительного дефекта или урегулированию претензии денежным платежом или их комбинацией, Истец должен направить Подрядчику письменное уведомление об отказе Истца.Уведомление должно включать конкретные фактические и, если они известны, юридические причины отклонения Истцом предложения Подрядчика о дополнительном урегулировании. Если Истец считает предложение Подрядчика о дополнительном урегулировании необоснованным, Истец должен подробно изложить все причины, по которым Истец считает предложение о дополнительном урегулировании необоснованным. В любом последующем Иске, когда Истец утверждает, что предложение о дополнительном урегулировании было необоснованным, Истец не сможет указать какие-либо причины, которые не были включены в его ответ Подрядчику.

(L) Если Истец отклоняет разумное предложение, включая любое разумное дополнительное предложение, сделанное в соответствии с настоящим Законом, или не разрешает Подрядчику устранить Строительный дефект в соответствии с принятым предложением об урегулировании, Истец не может взыскать сумму сверх:

(1) справедливая рыночная стоимость предложения об урегулировании или фактическая стоимость произведенного ремонта, в зависимости от того, что меньше; или

(2) Сумма денежного предложения о погашении.

Для целей данного подраздела лицо, оценивающее факты, должно определить разумность предложения об урегулировании спора, сделанного в соответствии с настоящим разделом.Если Истец отклонил разумное предложение, включая любое разумное дополнительное предложение, и любой другой закон позволяет Истцу возмещать расходы и гонорары адвокатов, то Истец не может взыскать никаких расходов или гонораров адвокатов, понесенных после даты его отклонения.

(M) Любой Истец, принимающий предложение Подрядчика по устранению Строительного дефекта, должен сделать это, направив Подрядчику письменное уведомление о принятии в течение разумного периода времени после получения предложения Подрядчика об урегулировании, но не позднее, чем через тридцать дней. после получения оферты.Если в течение тридцати дней Подрядчику не поступит ответ, предложение считается принятым.

(N) Если Истец принимает предложение Подрядчика по устранению Строительного дефекта, описанного в уведомлении о претензии, Истец должен предоставить Подрядчику и его субподрядчикам, агентам, экспертам и консультантам быстрый и беспрепятственный доступ к Жилищу для выполнения и завершения работ по строительство по графику, указанному в предложении поселения.

(O) Если во время рассмотрения уведомления, проверки, предложения, принятия или ремонта в противном случае истечет применимый период ограничений, Истец может подать иск против Подрядчика, но такое действие должно быть немедленно прекращено до завершения уведомления процесса рассмотрения претензий, описанного в этом разделе.Этот подраздел не должен толковаться как:

(1) Восстановить срок исковой давности, истекший до даты вручения письменного уведомления Истца о претензии, или

(2) Продлить любой применимый статут о покое.

(P) После отправки первоначального уведомления о претензии Истец и Подрядчик могут по взаимному письменному соглашению изменить процедуру уведомления о претензии, описанную в этом разделе.

(Q) В иске, касающемся жилища, связанного со строительным дефектом, Подрядчик не несет ответственности за ущерб, связанный или вызванный:

(1) Нормальная усадка из-за высыхания или оседания строительных компонентов в пределах допусков строительных норм;

(2) Использование Подрядчиком письменной информации, касающейся Жилища, которая была получена из официальных государственных архивов или предоставлена ​​государственным учреждением;

(3) Любой строительный дефект, известный истцу требования или о котором он сообщил в письменной форме до покупки им Жилища;

(4) Если Истец не является первым владельцем Жилища, любой Строительный дефект, известный Истцу или который мог быть обнаружен Истцом в результате проявлений разумной осмотрительности до покупки Истцом Жилища; или

(5) Отказ кого-либо позволить Подрядчику или его агентам выполнять свои работы по гарантийному обслуживанию.

Раздел 4. {Дополнительные строительные дефекты; требуется дополнительное уведомление и возможность ремонта}

(A) Строительный дефект, обнаруженный после того, как Истец предоставил Подрядчику первоначальное уведомление о претензии, не может быть заявлен в Иске до тех пор, пока Истец не предоставит Подрядчику, который выполнил первоначальное строительство:

(1) Письменное уведомление о претензии в отношении предполагаемого дефекта в соответствии с требованиями статьи 3 настоящего Закона; и

(2) Возможность разрешить исковое заявление в порядке, предусмотренном статьей 3 настоящего Закона.

Раздел 5. {Выпуск; Страхование}

(A) Если Истец принимает предложение, сделанное в соответствии с настоящим Законом, и Подрядчик выполняет предложение в соответствии с этим законом,

(1) После этого Истцу будет запрещено предъявлять иск по иску, описанному в уведомлении о иске; и

(2) Для целей страхования Подрядчик должен считаться юридически обязанным произвести ремонт или денежную выплату, как если бы Истец получил судебное решение против Подрядчика в размере стоимости ремонта и / или размер денежного платежа.

Раздел 6. {Договор купли-продажи; Положения}

(A) При заключении контракта на продажу, строительство или улучшение Жилища Подрядчик должен уведомить владельца Жилища о праве Подрядчика разрешить предполагаемые Строительные дефекты до того, как Истец сможет начать судебный процесс против Подрядчика. Такое уведомление должно быть заметным и может быть включено в контракт.

(B) Уведомление, требуемое подразделом A, должно быть в основном в следующей форме:

[Закон штата] СОДЕРЖИТ ВАЖНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ, КОТОРЫЕ ВЫ ДОЛЖНЫ ВЫПОЛНЯТЬ, ПРЕЖДЕ ЧЕМ ВЫ МОЖЕТЕ ПОДАТЬ ЗАЯВЛЕНИЕ ИЛИ ДРУГИЕ ДЕЙСТВИЯ В ОТНОШЕНИИ ДЕФЕКТНОГО СТРОИТЕЛЬСТВА ПРОТИВ ПОДРЯДЧИКА, СТРОИШЬ ВАШ ДОМ.ЗА ДЕВЯТЬ ДНЕЙ ДО ПОДДЕРЖКИ ЮРИДИЧЕСКОГО РАЗБИРАТЕЛЬСТВА ИЛИ ДРУГИХ ДЕЙСТВИЙ, ВЫ ДОЛЖНЫ ПРЕДОСТАВИТЬ ПОДРЯДЧИКУ ПИСЬМЕННОЕ УВЕДОМЛЕНИЕ О ЛЮБЫХ СТРОИТЕЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ, КОТОРЫЕ ВЫ УКАЗЫВАЕТЕ ДЕФЕКТНЫМИ. В соответствии с ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВОМ ПОДРЯДЧИК ИМЕЕТ ВОЗМОЖНОСТЬ ПРЕДЛОЖИТЬ ПРЕДЛОЖЕНИЕ НА РЕМОНТ И / ИЛИ ОПЛАТИТЬ ДЕФЕКТЫ. ВЫ НЕ ОБЯЗАНЫ ПРИНЯТЬ ЛЮБЫЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ, СДЕЛАННЫЕ ПОДРЯДЧИКОМ. СУЩЕСТВУЮТ СТРОГИЕ СРОКИ И ПРОЦЕДУРЫ, ПРЕДУСМОТРЕННЫЕ ГОСУДАРСТВЕННЫМ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВОМ, И НЕИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИХ МОЖЕТ ВЛИЯТЬ НА ВАШУ СПОСОБНОСТЬ ПОДАТЬ ЗАЯВЛЕНИЕ ИЛИ ДРУГИЕ ДЕЙСТВИЯ.

(C) Настоящий Закон вступает в силу с даты его вступления в силу.Закон применяется ко всем Действиям, начатым после даты вступления в силу, независимо от даты продажи или завершения строительства Жилища, о котором идет речь в Действии.

Раздел 7. {Действия товариществ собственников жилья}

(A) Лицо не должно предоставлять или предлагать что-либо ценное, прямо или косвенно, управляющему имуществом ассоциации или члену или должностному лицу ассоциации, чтобы побудить управляющего имуществом, члена или должностного лица поощрять или отговорить Ассоциацию подавать иск о возмещении ущерба, причиненного строительным дефектом.

(B) Управляющий недвижимостью, нанятый ассоциацией домовладельцев, не должен принимать ничего ценного, прямо или косвенно, в обмен на поощрение или отговорку ассоциации от того, что ему удается подать иск о возмещении ущерба, возникшего в результате строительного дефекта.

(C) Член или должностное лицо ассоциации не должны принимать ничего ценного, прямо или косвенно, в обмен на поощрение или отговорку Ассоциации, членом или должностным лицом которой он является, подавать иск о возмещении ущерба, возникшего в результате Строительного дефекта.

(D) Лицо, сознательно нарушающее пункты A, B или C этого раздела, виновно в проступке.

(E) Ассоциация может подать иск против Подрядчика, чтобы возместить убытки, возникшие в результате Строительных дефектов в любом из общих элементов или ограниченных общих элементах только сообщества общих интересов. Такое действие может быть сохранено только после:

(1) Ассоциация сначала получает письменное согласие владельца каждой единицы, чей интерес в общих элементах или ограниченных общих элементах будет предметом Действия;

(2) голос владельцев паев, на который распределяется не менее большинства голосов членов Ассоциации;

(3) Полный совет директоров Ассоциации и Подрядчика встретились лично и добросовестно предприняли попытку разрешить претензию Ассоциации, или Подрядчик окончательно отклонил или проигнорировал запросы о встрече с советом директоров Ассоциация; и

(4) В остальном Ассоциация удовлетворила все предварительные требования для Истца, чтобы начать Иск, как изложено в настоящем документе.

(F) По крайней мере, за три рабочих дня до голосования для начала действия Ассоциации по взысканию убытков, возникших в результате Строительных дефектов в любом из общих элементов или ограниченных общих элементах сообщества общих интересов, поверенный, представляющий Ассоциацию должен предоставить владельцу каждой единицы письменное заявление, которое включает в разумных деталях:

(1) Дефекты и повреждения или повреждения общих элементов или ограниченных общих элементов;

(2) Причина дефекта, если причина известна;

(3) характер и известная степень ущерба или травм, возникших в результате дефектов;

(4) Расположение каждого дефекта в общих элементах или ограниченных общих элементах, если известно;

(5) Разумная оценка стоимости Действия или посредничества, включая разумные гонорары и расходы адвоката, гонорары экспертов и затраты на тестирование;

(6) Вся информация, которую владелец единицы должен раскрыть после продажи единицы.

(G) Ассоциация или поверенный Ассоциации не должны нанимать человека для проведения разрушающих испытаний для определения любого повреждения или травмы устройства, общего элемента или ограниченного общего элемента, вызванных Строительным дефектом, за исключением случаев:

(1) Лицо имеет лицензию Подрядчика в соответствии с [Законом штата]

(2) Ассоциация получила предварительное письменное согласие владельца каждой единицы, чья единица или доля в общем элементе или ограниченном общем элементе будут затронуты таким тестированием;

(3) Лицо, проводившее испытания, предоставило письменный график ремонта;

(4) Лицо, проводящее испытания, обязано устранить все повреждения, возникшие в результате таких испытаний, в соответствии с законами штата и местными постановлениями, относящимися к ним;

(5) Ассоциация или нанятое таким образом лицо получает все разрешения, необходимые для проведения таких испытаний и устранения любых повреждений, возникших в результате таких испытаний; и

(6) Разумное предварительное уведомление и возможность наблюдать за испытаниями дается Подрядчику, против которого может быть предъявлен иск по результатам испытаний.

(H) Ассоциация может начать действие только после голосования или письменного согласия владельцев паев, которым отводится не менее большинства голосов членов Ассоциации. В таком случае Ассоциация должна направить письменное уведомление владельцу каждого подразделения собрания, на котором должно рассматриваться начало Действия или действие должно быть предпринято, по крайней мере, за 21 календарный день до собрания.

(I) Совет директоров Ассоциации может, без уведомления владельцев единиц, нанять Подрядчика и таких других лиц, которые необходимы для выполнения такого немедленного ремонта единицы или общего элемента в сообществе общих интересов, как необходимы для защиты здоровья, безопасности и благополучия владельцев квартир.

Раздел 8. {Разное}

(A) Ничто в настоящем документе не создает оснований для иска от имени Истца или Подрядчика.

(B) Настоящий Закон не применяется к праву Подрядчика требовать от субподрядчика, поставщика или специалиста по проектированию взносов, возмещения или возмещения ущерба по любым претензиям, предъявленным Подрядчику Истцом.

Утверждено Советом директоров ALEC в январе 2004 года.

Утверждено Советом директоров ALEC 28 января 2013 г.

Утверждено Советом директоров ALEC 24 мая 2018 г.

часто задаваемых вопросов | Закон Бреннана

Вот ответы на некоторые вопросы, которые люди обычно задают в процессе рассмотрения своих дел.

Что такое «лимонный закон»?

В Калифорнии «лимонный закон» называется Законом о потребительской гарантии Сонга-Беверли, и он содержится в разделах Гражданского кодекса Калифорнии с 1790 по 1797 год. В общих чертах, он позволяет потребителям искать замену или возмещение покупной цены за основные потребительские товары, которые имеют дефекты и не могут быть отремонтированы за разумное количество попыток ремонта.

Существует также федеральный «лимонный закон», называемый законом о гарантии Магнусона-Мосса, который содержится в 15 разделах Кодекса США с 2301 по раздел 2310. Он очень похож на закон Калифорнии. В большинстве случаев может применяться любой закон. Однако в большинстве случаев закон Сонга-Беверли обеспечивает большую защиту, чем закон Магнусона-Мосса.

Как действует «лимонный закон» на потребителя?

«Лимонный закон» позволяет потребителю требовать замены или возмещения покупной цены транспортного средства (или основного потребительского товара), если производитель или дилер не может устранить дефект или дефекты в течение разумного количества попыток ремонта.

Изготовитель имеет право на компенсацию за использование транспортного средства, но только до тех пор, пока потребитель не вернет его производителю в первый раз по поводу неисправимого дефекта. Производители часто пытаются договориться с потребителями о гораздо большей компенсации, но на самом деле это нарушает закон. Закон о зачетах в соответствии с Сонг-Беверли выглядит следующим образом: производитель имеет право только на зачет, рассчитанный путем умножения покупной цены на дробь, имея в числителе количество миль на момент первой попытки потребителя ремонта неисправного дефект, а знаменатель — 120 000, цифра, выбранная законодательным собранием Калифорнии как представляющая средний срок службы легкового автомобиля.

В качестве примера предположим, что Джон покупает машину за 20 000 долларов. У него серьезные проблемы с тормозами, которые он требует ремонта на 1000 миль, 5000 миль, 10 000 миль и 20 000 миль. Производитель в переговорах с Джоном часто пытается убедить его, что он имеет право на компенсацию за 20 000 миль использования. Это неверно. Смещение Song-Beverly рассчитывает смещение в 1000 миль, количество миль для первой попытки ремонта. Раздел 1793.2 (d) (2) (C) Гражданского кодекса.В случае с Джоном покупная цена в 20 000 долларов умножается на 1 000 вместо 120 000, или 1/120, и получается компенсация примерно в 167 долларов. Таким образом, Джон надлежащим образом требует в погашение своего требования 19 833,00 долларов.

Применяется ли «лимонный закон» к незначительным дефектам или только к существенным дефектам?

Закон Сонга-Беверли применяется к дефектам, которые представляют собой существенное ухудшение использования, стоимости или безопасности транспортного средства для владельца или арендатора. Таким образом, незначительные неудобства (например, статические помехи в радио) обычно не являются предметом претензий по лимонному закону.Серьезные проблемы с тормозами, трансмиссией, работой двигателя, неработающим кондиционером, постоянной утечкой воды, и это лишь некоторые из них, являются примерами случаев, когда присяжные присуждали истцу возмещение убытков.

Каковы юридические требования лимонного закона?

Требуется ли требование о том, чтобы претензия по лимонному закону включала четыре попытки ремонта одного и того же дефекта в течение первого года? »] Производители в течение многих лет распространяли ложную пропаганду, что потребитель не имеет претензии по лимонному закону, если у него или нее нет четырех попытки ремонта того же дефекта в течение первых 18 000 миль.Это просто неверно. Производители автомобилей стремятся отговорить достойных потребителей от предъявления претензий по поводу дефектных продуктов.

Правильный стандарт заключается в том, предоставил ли потребитель производителю разумную возможность отремонтировать автомобиль в течение гарантийного срока. Разумная возможность обычно включает более одной попытки ремонта; Я видел несколько случаев, в которых удавалось отремонтировать только две попытки, а присяжные и судьи обычно ожидают как минимум трех попыток ремонта.«В течение гарантийного срока» означает именно то, что он говорит: если на ваш автомобиль гарантия на трансмиссию составляет 70 000 миль, а трансмиссия неисправна, то у вас есть 70 000 миль, чтобы производитель эффективно провел необходимый ремонт. Если они не отремонтируют трансмиссию, и если вы дали производителю разумное количество попыток ремонта, то у вас есть претензия по лимонному закону.

Кроме того, если производитель не может устранить проблему в течение гарантийного срока, и вы письменно уведомили производителя или его представителя в дилерском центре в течение 60 дней после последней неудачи в устранении проблемы, гарантия на этот дефект не истекает.Таким образом, если указанный выше потребитель уведомил производителя о том, что он не отремонтирует транспортное средство в течение 60 дней после последней неудачной попытки ремонта, то гарантия не истекает в отношении этого дефекта трансмиссии.

Существует так называемая «презумпция лимонного закона», и это единственная часть лимонного закона, где требуется 4 попытки ремонта в течение первых 18 000 миль. Это правовая презумпция, влияющая на бремя доказывания в судебном процессе по лимонному делу.Обычно истец несет бремя доказывания того, что он или она предоставили производителю разумное количество попыток ремонта, чтобы отремонтировать транспортное средство. Однако, если потребитель докажет, что он или она привезли автомобиль для ремонта по поводу того же дефекта четыре раза в течение первых 18000 миль, или если он или она докажет, что транспортное средство не эксплуатировалось 30 или более дней в течение первых 18000 миль миль, то закон перекладывает бремя доказывания на производителя, чтобы доказать, что ему не была предоставлена ​​разумная возможность отремонтировать транспортное средство.

Кроме того, если в автомобиле имеется дефект, «который может привести к смерти или серьезным телесным повреждениям, если транспортное средство находится за рулем», и у потребителя было две или более попыток ремонта в пределах 18 000 миль и он напрямую уведомил производителя о необходимости ремонта дефект, презумпция лимонного закона применяется, чтобы переложить бремя доказывания на производителя.

На практике многие дела по лимонному праву проходят без презумпции лимонного закона. Единственное требование к потребителю — предоставить производителю разумное количество попыток ремонта в течение гарантийного срока.Если это сделано, а автомобиль по-прежнему не отремонтирован, у потребителя будет дело по лимонному закону.

Должен ли я платить много денег, чтобы обеспечить соблюдение моих прав по «лимонному закону» как потребителя?

Определенно нет. Адвокатское бюро Роберта Ф. Бреннана обрабатывает почти все наши дела по лимонному праву на непредвиденной основе или иногда с клиентом просто авансом части расходов по делу. Претензии по лимонному закону обычно очень доступны для потребителей. Лимонный закон предусматривает, что преобладающий в иске по лимонному закону потребитель может взыскать с производителя гонорары и расходы на адвоката.Расчеты по лимонному закону почти всегда включают деньги для покрытия гонораров и расходов потребителя на адвоката.

Применяется ли «лимонный закон» к арендованным автомобилям?

Да. Единственное существенное отличие состоит в том, что убытки истца рассчитываются в соответствии с его или ее обязательствами по договору аренды, а не с его или ее обязательствами по договору купли-продажи.

Распространяется ли «лимонный закон» на подержанные автомобили?

Да, если на подержанный автомобиль распространяется гарантия.Если на подержанный автомобиль распространяется гарантия производителя, то потребитель может подать иск против производителя, как если бы автомобиль был новым. Если потребитель покупает подержанный автомобиль у дилера без гарантии производителя, но с гарантией дилера, потребитель может преследовать дилера по иску лимонного закона.

Опять же, это область, где производители заполонили всемирную паутину ложной информацией о том, что лимонный закон не распространяется на подержанные автомобили. Это просто неверно.

Применяется ли «лимонный закон» к автомобилям, купленным «как есть»?

Нет. Для претензии по лимонному закону должна быть гарантия. Когда потребитель покупает автомобиль «как есть», он категорически отказывается от каких-либо гарантий. Тем не менее, потребитель может подать иск о мошенничестве, поскольку претензии о мошенничестве не аннулируются положением о покупке «как есть». Кроме того, если продавец или производитель не соблюдает закон о четком и заметном раскрытии условий «как есть», то у потребителя может быть требование лимона.

Применяется ли «лимонный закон» к автомобилям с истекшим гарантийным сроком?

Как правило, нет. Исключение составляют случаи, когда дефект возникает в течение гарантийного срока и не устраняется в течение гарантийного срока, и потребитель направляет производителю и дилеру письменное уведомление в течение 60 дней с момента последней неудачной попытки ремонта дефекта. В таком случае гарантия на этот дефект продлевается до тех пор, пока он не будет устранен.

Применяется ли «лимонный закон» только к автомобилям, купленным по договору на обслуживание?

Да.В 1998 году Апелляционный суд Калифорнии постановил, что контракт на оказание услуг дает потребителю права по лимонному закону. Если потребитель покупает автомобиль по контракту на обслуживание, существует как минимум подразумеваемая гарантия сроком до года после покупки. Покупка с контрактом на обслуживание не может быть покупкой «как есть». Потребитель будет иметь права по лимонному закону против продавца-продавца, а также поставщика контракта на обслуживание

.

Применяется ли «лимонный закон» к другим основным потребительским товарам, таким как лодки, самолеты, дома на колесах или мотоциклы?

Да.Мой офис успешно рассмотрел несколько таких дел, касающихся лодок, мотоциклов и жилых автофургонов.

Какие распространенные примеры ситуаций «лимонного закона»?

Некоторые общие примеры могут включать неисправные тормоза, отказы тормозов АБС, отказы трансмиссии и ситуации «жесткого переключения» или «без переключения», жалобы на отказ двигателя, серьезные электрические проблемы с транспортным средством, сбои в работе бортового компьютера, повторяющееся отсутствие запуска. ситуации и другие. Любой дефект, который существенно снижает использование, ценность или безопасность транспортного средства, может быть предметом судебного иска.

Чего мне ожидать, если я подам иск по «лимонному закону»?

Это очень широкий вопрос. Как правило, продажа или аренда автомобилей без надлежащего раскрытия известных дефектов или опасных состояний транспортного средства является мошенничеством с автомобилями.

Что такое автомобильное мошенничество?

Общее средство правовой защиты — это возврат покупной цены за вычетом компенсации за использование или замена автомобиля. Также могут быть возмещены наличные расходы, связанные с неисправным автомобилем или продуктом.В некоторых случаях присяжные или судья могут назначить гражданский штраф в размере до двух раз превышающего сумму ущерба, нанесенного истцу. Кроме того, выигравшему истцу гонорары адвоката выплачиваются проигравшей стороной.

Какие распространенные примеры мошенничества с автомобилями?

Частые примеры, которыми занимается мой офис, включают продажу или аренду автомобилей с нераскрытым повреждением в результате столкновения, продажу или аренду автомобилей с обратным одометром, продажу или аренду автомобилей с нераскрытой историей «лимонного закона» (т. Е. Автомобиль был выкуплен у предыдущего владелец в качестве «лимона», и это не было раскрыто последующему покупателю), обманным путем привлечение потребителя в договор аренды, в котором он или она думал, что они покупают автомобиль, неразглашение гарантийных ограничений и ограничений, взимание платы с потребителей за аксессуары, не фактически продается вместе с автомобилем (например,грамм. подушки безопасности), ситуации с мошенническим ремонтом автомобилей и другие. Автомобильное мошенничество — очень обширная область. Существует множество различных видов мошенничества, и ответчиками являются страховые компании, автосалоны, производители автомобилей, компании с расширенной гарантией, компании по контракту на обслуживание и компании по финансированию автомобилей. Мой офис также занимался делами о мошенничестве против производителей лодок и дилеров лодок.

Что такое мошенничество при аренде и почему дилер обманывает потребителя при аренде?

Дилеры часто могут заработать больше денег на аренде, иногда превосходно, а иногда нет.Все договоры аренды финансируются, и дилеры часто получают откаты по договорам финансирования аренды, которые превышают откаты, которые они получают от продаж. Дилеры также часто кладут крупные «начальные платежи по лизингу» в свои карманы; при продаже это будет первоначальный взнос и в конечном итоге будет представлять собой долю владения автомобилем. Кроме того, аренда дает дилерам возможность штрафов в конце срока аренды, таких как штрафы за пробег или состояние, которых нет при продаже. Например, когда вы арендуете автомобиль, в договоре аренды обычно указывается, сколько миль вы можете проехать по договору аренды.Во многих случаях аренды это составляет около 12 000 миль в год. Если вы водите больше, дилер и / или лизинговая компания могут наложить на вас штраф за пробег, который может повлечь за собой большие деньги, если вы проехали немного выше лимита. Кроме того, дилер может попытаться взимать высокие розничные цены за вмятины, царапины, любые повреждения в результате аварии или износа на автомобиле, когда вы сдаете его в аренду, и вы будете должны деньги дилеру и / или финансовым службам. Компания. Аренда часто предполагает менее выгодные условия финансирования для потребителей с хорошей кредитной историей.По этим и другим причинам многие дилеры пытаются подтолкнуть потребителей к заключению договоров аренды, даже если покупка будет иметь больше смысла для потребителей с финансовой точки зрения. Некоторые дилеры используют для этого мошенничество. Здесь вам нужно проконсультироваться с нашей фирмой.

Что мне ожидать, если я подам иск о мошенничестве с автомобилем?

Дела о мошенничестве с автомобилями, как правило, более прибыльны как для потребителей, так и для адвокатов, если их можно доказать. Присяжные и судьи не одобряют мошенническое сокрытие серьезных дефектов транспортных средств или других основных потребительских товаров.Такие дефекты также могут представлять серьезную опасность для владельцев транспортных средств, поскольку теперь автомобили не так безопасны, как задумано производителем.

Таргетная терапия восстановления ДНК: прошлое или будущее лечения рака?

Abstract

Восстановление повреждений ДНК — это сложный процесс, в котором используются определенные пути для устранения определенных типов повреждений ДНК. Диапазон повреждений ДНК включает небольшие, умеренные изменения в структуре, включая несовпадение оснований и простые события метилирования окисленных оснований, внутри- и межцепочечные сшивки ДНК, двухцепочечные разрывы ДНК и аддукты белок-ДНК.Пути, необходимые для репарации этих повреждений, включают репарацию несоответствия, репарацию эксцизией оснований, репарацию эксцизией нуклеотидов и путь гомологически направленной репарации / анемии Фанкони. Каждый из этих путей способствует генетической стабильности, и было продемонстрировано, что мутации в генах, кодирующих белки, участвующие в этих путях, способствуют генетической нестабильности и раку. Фактически, было высказано предположение, что все виды рака обнаруживают дефекты репарации ДНК. Также было продемонстрировано, что способность раковых клеток восстанавливать терапевтически индуцированные повреждения ДНК влияет на терапевтическую эффективность.Это привело к нацеливанию на пути репарации ДНК и белков для разработки противораковых агентов, которые повысят чувствительность к традиционным химиотерапевтическим средствам. В то время как первоначальные исследования томились и страдали из-за отсутствия специфичности и определенного механизма действия, более современные подходы к использованию синтетических летальных взаимодействий и разработке химических ингибиторов с высоким сродством оказались значительно более эффективными. В этом обзоре мы выделим последние достижения и обсудим предыдущие неудачи в нацеливании на репарацию ДНК, чтобы проложить путь для будущих нацеленных на репарацию ДНК агентов и их использования в терапии рака.

Ключевые слова

Повреждение ДНК

Реставрация ДНК

Рак

Радиация

Репликационный белок A

Сокращения

NER

эксцизионная репарация нуклеотидов

HDR

гомологически направленная репарация

HR-

гомологичная

гомологичная рекомбинантная 9J0008

PARP

поли (АДФ-рибоза) полимераза

NAD ⁺

никотинамид аденин динуклеотид

FDA

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов

MDS

миелодиспластический синдром

AML

острый миелоидный лейкоз

ER-0009 TC-0009 EXCISION

TC-3000 ремонт перекрестного комплементации

Цисплатин

Цис-диамминдихлорплатина (II)

OB

Связывание олигонуклеотид / олигосахарид

HTS

высокопроизводительный скрининг

ДНК-PKcs

ДНК-зависимая протеинкиназа каталитическая субъединица

PIos3Kti-подобная

PIos3Kti-протеинкиназа

PIos3Kti-подобная фосфин-30008

структура отношения деятельности

ATM

ataxia telangiectasia мутированная киназа

ATR

ATM-Rad3 киназа

ATRIP

ATR взаимодействующий белок

hPNKP

полинуклеотидкиназа / фосфатаза человека

MRN комплекс

Mre11-9509000 статьи © 2016 Авторы.Опубликовано Elsevier Inc.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Функция

Rb во внеэмбриональных клонах подавляет апоптоз в ЦНС Rb-дефицитных мышей

Abstract

Эмбрионы с дефицитом ретинобластомы ( Rb ) обнаруживают серьезные дефекты нейрогенеза, эритропоэза и развития хрусталика и умирают на 14,5-й день эмбриона. Наши недавние результаты продемонстрировали резкую дезорганизацию лабиринтного слоя плаценты у эмбрионов с дефицитом Rb , сопровождаемую снижением транспортной функции плаценты.Когда эти Rb ^{— / —} эмбрионы были снабжены плацентой дикого типа с использованием либо тетраплоидной агрегации, либо генетических подходов, животные выживали до рождения. Здесь мы анализируем роль экстраэмбрионального Rb в регуляции пролиферации, апоптоза и дифференцировки у спасенных животных на разных стадиях развития. Многие из неврологических и эритроидных аномалий, которые, как считается, ответственны за эмбриональную летальность Rb ^{— / —} животных, включая эктопический апоптоз в ЦНС, практически отсутствовали у спасенных Rb ^{— / —} щенков.Однако спасенные животные умерли при рождении с серьезными дефектами скелетных мышц. Как и у эмбрионов с нокаутом Rb, у спасенных животных наблюдалось заметное усиление репликации ДНК и деления клеток в ЦНС. Напротив, типичный широко распространенный апоптоз нейронов отсутствовал у Rb-дефицитных эмбрионов, восстановленных с нормальной плацентой. Однако в клетках волокон хрусталика несоответствующая пролиферация и апоптоз, которые обычно наблюдаются у эмбрионов Rb ^{— / —} , у спасенных животных не ослабевают.Эти результаты демонстрируют, что функция Rb во внеэмбриональных клонах играет важную роль в выживании нейрональных клеток и в дифференцировке эритроидного клона, обеспечивая механистическое понимание клеточных автономных и неавтономных функций Rb во время развития.

Двадцать лет назад ген ретинобластомы ( Rb ) был открыт как первый супрессор опухоли у человека. Хотя мутации с потерей функции в Rb первоначально наблюдались в наследственной ретинобластоме (1), с тех пор инактивация Rb была связана с широким спектром опухолей человека, включая семейные остеосаркомы, а также спорадические заболевания мочевого пузыря, легких и других. карциномы простаты и груди (2).Действительно, изменения пути передачи сигнала Rb путем активации компонентов с положительным действием, таких как циклины G ₁ и циклин-зависимые киназы (cdk), путем инактивации компонентов с отрицательным действием, таких как ингибиторы cdk (т.е. p16 ^INK4a ) и p53 или мутации в самом Rb были обнаружены практически во всех раковых заболеваниях человека (3). Интересно, что мыши, гетерозиготные по Rb , не предрасположены к ретинобластоме, но вместо этого очень восприимчивы к карциномам гипофиза и щитовидной железы (4-7).

Делеция Rb у мышей приводит к широко распространенному вступлению в эктопический клеточный цикл и усилению апоптоза в ЦНС, периферической нервной системе (ПНС), хрусталике и печени (4–6, 8). Помимо ключевой роли в балансировании пролиферации и апоптоза, Rb играет важную роль в определении судьбы клеток. Исследования in vitro указывают на функцию Rb в регуляции терминальной дифференцировки многих типов клеток, включая адипоциты, остеобласты, эритроциты и клетки скелетных мышц (9-13).Удаление Rb у мышей приводит к дефектам дифференцировки в эмбриональном нейрогенезе и эритропоэзе (4-6). В каждом случае клоны клеток с дефицитом Rb оказываются компетентными в инициации программ дифференцировки, на что указывает их способность экспрессировать маркеры ранней дифференцировки, но не могут достичь полностью дифференцированного состояния. Эти исследования подпитывают современные модели опухолевых супрессоров, подтверждающие представление о том, что рак — это болезнь развития, на которую сильно влияют программы экспрессии генов, которые влияют на судьбу клеток и процессы дифференцировки (14).

Rb ^{— / —} эмбрионы умирают между 13,5 и 15,5 днями эмбрионального развития (E), и считается, что это является результатом дефекта эритропоэза, приводящего к анемии (4–6). Интересно, что недавно мы продемонстрировали, что мыши Rb ^{— / —} имеют серьезные дефекты лабиринтного слоя плаценты, характеризующиеся выраженной гиперплазией клеток трофобласта и тяжелой дисплазией лабиринтной архитектуры, связанной с уменьшением в транспортной функции плаценты.Поставляя нормальную плаценту либо посредством тетраплоидной агрегации, либо с помощью генетических подходов, Rb ^{— / —} эмбрионов смогли выжить до полного срока, что позволяет предположить, что аномальная плацента является основной причиной эмбриональной летальности Rb ^{— / —} животных (15). Эти Rb-дефицитные животные, снабженные нормальной плацентой, представляют собой мощный инструмент для оценки механизма клеточно-автономной и не клеточно-автономной роли Rb в развитии плода.

Целью настоящего исследования было непосредственно оценить роль экстраэмбрионального Rb в контроле пролиферации, апоптоза и клеточной судьбы клеток в тканях спасенных Rb ^{— / —} плодов и новорожденных детенышей. Примечательно, что многие из ранее охарактеризованных фенотипов мутантных Rb животных в ЦНС и органах кроветворения практически полностью отсутствовали у спасенных животных. Мы показываем, что Rb выполняет не клеточно-автономную функцию при апоптозе перивентрикулярных нейронов заднего мозга и клеточно-автономную функцию при пролиферации нейронов.Напротив, у спасенных животных наблюдалась чрезмерная пролиферация и апоптоз в клетках волокон хрусталика, сопровождающиеся той же неорганизованной архитектурой хрусталика, что наблюдали у эмбрионов Rb ^{– / –}. Взятые вместе, эти результаты определяют ключевую функцию Rb во внеэмбриональных клонах, которая важна для нейрогенеза и эритропоэза плода.

Экспериментальные процедуры

Штаммы мышей и генотипирование. Rb ^{+ / —} мышей (5), Mox2 ^{+ / cre} трансгенных мышей (16) и Rb ^{loxP / loxP} мышей с условным нокаутом (17) мышей-оборотней (17) поддерживается на смешанном фоне (C57BL / 6 × 129 / Зв или FVB / N × 129 / Зв).Генотипы мышей определяли методом ПЦР, как описано (5, 16, 17).

Тетраплоидная агрегация. Эксперименты по агрегации тетраплоидов проводили, как описано (15).

Гистологический анализ, иммунофлуоресценция и иммуногистохимия. Эмбрионы и новорожденные были зафиксированы в 10% формалине. Фиксированные образцы заливали парафином и делали на них серийные срезы размером 5 мкм, которые окрашивали гематоксилином / эозином для общего гистопатологического анализа.Для анализа скелета новорожденных мышей очищали, выпотрошивали и фиксировали в 95% этаноле в течение ночи. Хрящ и кости окрашивали альциановым синим и ализариновым красным, соответственно, в соответствии с ранее описанными процедурами (18).

Для иммунофлуоресценции внутрибрюшинно вводили BrdUrd (100 мкг на 1 г массы тела). беременным самкам за 1,5 часа до эвтаназии и сбора тканей. BrdUrd-положительные клетки определяли с использованием процедуры окрашивания на основе флуоресценции.Фосфорилированные гистон-3 (Ph4) -позитивные клетки выявляли с помощью системы обнаружения ABC (Santa Cruz Biotechnology). Апоптоз анализировали с использованием опосредованного терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой мечения ник-концов dUTP (TUNEL) / набора для анализа пероксидазы (Intergen, Purchase, NY). Множественные непоследовательные срезы с интервалом не менее 40 мкм подсчитывали как для иммуноокрашивания, так и для анализа TUNEL. Для анализа BrdUrd ядра окрашивали 4,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Было подсчитано примерно 200-700 волоконных клеток для каждой секции хрусталика и 2000-3000 ядер из промежуточной зоны заднего мозга для каждой секции ЦНС.Данные представлены в виде среднего процента или среднего числа положительных ячеек по крайней мере для трех непоследовательных секций, при этом столбцы ошибок представляют стандартное отклонение различных секций для каждого образца.

Результаты

Недавние исследования выявили новый фенотип у мышей с нокаутом Rb, при котором чрезмерная пролиферация лабиринтных трофобластов приводит к серьезному нарушению архитектуры и функции плаценты (15). Тот факт, что эмбрионы Rb ^{— / —} , поставляемые с нормальной плацентой, можно отнести к сроку, предоставил нам уникальное обстоятельство, при котором можно непосредственно оценить роль Rb в дифференцировке тканей, которые полностью развиваются во время последней. стадии вынашивания.Поэтому мы восстановили Rb ^{— / —} эмбрионов с клетками трофобласта дикого типа двумя отдельными, но взаимодополняющими методами и проанализировали потомство на разных стадиях развития. В первом методе мы агрегировали тетраплоидные зародыши дикого типа с диплоидными зародышами, полученными в результате интеркроссов гетерозигот Rb (рис. 1 A ). В этих условиях тетраплоидные клетки дикого типа вносят вклад исключительно в плаценту, тогда как диплоидные клетки вносят вклад в основном в собственно эмбрион с некоторым вкладом в лабиринт плаценты (19).Как сообщалось ранее, эта стратегия позволила нам восстановить несколько живых и явно нормальных эмбрионов Rb ^{— / —} на стадиях развития, на которых не было Rb ^{— / —} эмбрионов, полученных из естественных спаривания восстанавливаются (15).

Рис.1.

Схематическое изображение экспериментов с агрегацией тетраплоидов ( A ) и условным нокаутом ( B ).

В дополнение к стратегии тетраплоидной агрегации, описанной выше, мы использовали второй подход, используя Rb ^{loxP / loxP} мышей с условным нокаутом (17) и Mox2 ^{+ / cre} трансгенных мышей (16), чтобы обеспечить Rb -дефицитных эмбрионов с плацентой дикого типа (рис.1 В ). Промотор Mox2 управляет экспрессией Cre внутри самого эмбриона, но не в тканях внеэмбрионального происхождения, которые составляют основную часть плаценты (15, 16). Путем скрещивания Mox2 ^{+ / cre} мышей, несущих один Rb -нулевой аллель ( Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{+ / — 90gous 9) с гомосексуальными loxP / loxP мышей с условным нокаутом, мы смогли восстановить Rb -дефицитных эмбрионов, обладающих нормальными Rb — / loxP плацентой на E13.5, E15.5, E18.5 и рождения, но они умерли сразу или вскоре после рождения.}

Подавление дефектов ЦНС в рублях ^{— / —} Эмбрионы. Интересно, что Rb-дефицитные эмбрионы, восстановленные с нормальной плацентой с помощью условного нокаута или тетраплоидных методов, лишены многих характерных фенотипов Rb ^{— / —} (рис. 2; и см. Опубликованный рис. в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS www.pnas.org). Гистологический анализ органов ЦНС, включая головной, спинной мозг и сетчатку, не выявил значимых микроскопических различий между спасенными и контрольными животными (рис.2 A — C и H и 5 A — C ). и G ).

Рис.2.

Нейрогенные и гематопоэтические дефекты сильно подавляются у Rb-дефицитных животных, получающих нормальную плаценту с помощью метода условного нокаута. Показана гистология множественных органов из Mox2 ^{+ / +} Rb ^{+ / loxP} и Mox2 ^{+ / cre} Rb lo365 ^— новорожденных мышей.( A ) Головной мозг, сагиттальный разрез. ( B ) Задний мозг, прилегающий к четвертому желудочку, сагиттальный разрез. ( C ) Спинной мозг, сагиттальный разрез. ( D ) Ганглии задних корешков (DRG), сагиттальный разрез. ( E ) Печень. ( F ) Мазок крови. ( G ) Более высокое увеличение эритроцита из вставки в F . ( H ) Глаз. ( I ) Легкое ( Вставка , легкое E15.5). ( J ) Сердечная мышца. ( K ) Межреберная скелетная мышца.( L ) Скелетная мышца конечностей. ( M ) Мембрана. ( N ) Каркас. co, кора головного мозга; lv, боковой желудочек; vz, желудочковая зона; iz, промежуточная зона; wm, белое вещество; гм, серое вещество; bv, кровеносный сосуд; ле, линза; ре, сетчатка; шк, бронхиолярное пространство; а, альвеолярное пространство. (Исходное увеличение: A , × 2; B — E и J — M , × 40; F , × 100; G , × 1000; H и I , × 10; N , × 0.8.)

Многие эксперименты in vitro и in vivo продемонстрировали важную роль Rb в контроле развития клеточного цикла, клеточной пролиферации и апоптоза. Инактивация Rb у мышей приводит к чрезмерной незапланированной репликации ДНК и эктопическому апоптозу в развивающейся ЦНС (4-6). Поэтому мы оценили пролиферативный статус ЦНС у эмбрионов E13.5 и E15.5, полученных от Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / +} и Rb ^{loxP / loxP.} крестовины, а также Е13.5 эмбрионов, полученных в результате экспериментов по агрегации тетраплоидов, путем включения BrdUrd и тестов TUNEL. Как и ожидалось, обычно постмитотические нейроны заднего мозга, окружающие четвертый желудочек эмбрионов Rb ^{— / —} E13.5, показали высокие уровни включения BrdUrd, что указывает на несоответствующую репликацию ДНК в этих клетках. Эквивалентные уровни несоответствующей репликации ДНК были обнаружены в нейронах заднего мозга из Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и спасенных тетраплоидами (TR) Rb — ^/ эмбрионов по сравнению с Rb ^{— / —} E13.5 эмбрионов (рис. 3 C и F ; и см. Рис. 6 C и E , который опубликован в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS). Кроме того, иммуногистохимическое окрашивание на митотический маркер Ph4 также выявило значительное увеличение митотических нейронов Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} E13.5 эмбрионов, что позволяет предположить, что большинство BrdUrd-положительных нейрональных клеток завершить S-фазу и пройти митоз (рис.3 E и H ). В отличие от Rb ^{— / —} плодов, не было доказательств эктопического апоптоза в нейронах Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / TRXP} Rb ^{— / —} эмбрионов (Фиг.3 D и G и 6 D и F ). Эти находки идентифицируют ключевую роль Rb во внеэмбриональных клонах в выживании фетальных нейрональных клеток.

Рис.3.

Плацента дикого типа подавляет аберрантный апоптоз, но не эктопическую пролиферацию в ЦНС при использовании подхода условного нокаута. Гистология ( A ), окрашивание DAPI ( B ), иммунофлуоресцентное окрашивание BrdUrd ( C ), тесты TUNEL ( D ) и иммуногистохимическое окрашивание фосфорилированного гистона 3 (Ph4) ( E ) мозга h. рядом с четвертым желудочком) от генетически спасенных E13.5 и E15.5 эмбрионов. ( F ) Количественная оценка C . ( G ) Количественная оценка D . ( H ) Количественная оценка E . Аналогичные срезы мутантного эмбриона E13.5 Rb использовали в качестве контроля. Стрелки указывают на клетки с положительным окрашиванием. vz, желудочковая зона; из, промежуточная зона. (Исходное увеличение: A — D , × 40; E , × 63.)

Мы также проанализировали DRG Rb ^{— / —} животных с нормальной плацентой.Гистологическая оценка DRG в E13.5 Rb ^{— / —} эмбрионов и в меньшей степени в E13.5 Rb ^{— / —} спасенных эмбрионов, выявило увеличение митотические фигуры и кариорексис, характеризующиеся фрагментацией ядер, по сравнению с нормальным контролем однопометников (данные не показаны). Однако DRG из E15.5 TR Rb ^{— / —} эмбрионы или новорожденные Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / 653 lox} нормальные ганглиозные клетки со случайной фрагментацией ядер, что указывает на улучшение незапланированной пролиферации и апоптоза на более поздних стадиях развития (рис.2 D и 5 D ).

Подавление эритропоэтических дефектов в рублях ^{— / —} Эмбрионы. Во время нормального развития основной участок кроветворения смещается из желточного мешка в печень примерно на E12.5. Rb ^{— / —} животные демонстрируют серьезные дефекты созревания эритроцитов, характеризующиеся повышенным количеством ядерных эритроцитов как в печени, так и в периферическом кровообращении (4–6).К ст. E13.5, Rb ^{— / —} эмбрионы визуально бледнее контрольных однопометников и в конечном итоге погибают на ст. E14.5. Примечательно, что гемопоэтический фенотип в печени почти полностью отсутствовал у эмбрионов Rb ^{— / —} , обеспеченных нормальной плацентой (рис.2 E и 5 E ). Хотя кроветворение печени было в пределах нормы и эмбрионы имели нормальную окраску, наблюдалось небольшое, но значительное увеличение количества ядерных эритроцитов по сравнению с контролем, что указывает на небольшую задержку дифференцировки эритроидов (рис.2 F и G и 5 F ; исх. 15). Эта задержка также отражалась наличием более базофильной штриховки эритроцитов в мазках крови, приготовленных из Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} по сравнению с детенышами из однопометника Mox2 + 903 ^{/ +} Rb ^{+ / loxP} обычные регуляторы (рис.2 G ).

Аномальное развитие линз сохраняется в Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и TR Rb ^{— / —} Mice. Предыдущие исследования также документально подтвердили роль Rb в развитии хрусталика, поскольку клетки волокон хрусталика в Rb ^{— / —} эмбрионах входят в S-фазу и подвергаются апоптозу ненадлежащим образом (8). Интересно, что ни пролиферация, ни апоптотические дефекты в клетках волокон хрусталика, вызванные нарушением Rb , не были устранены путем снабжения эмбрионов с дефицитом Rb плацентой дикого типа (рис. 4; и см. Рис. опубликовано в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS).Ячейки линзового волокна в E13.5 Rb ^{— / —} , Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и TR Rb ^{— / — эмбрионы демонстрировали равные уровни незапланированного синтеза ДНК и апоптоза и имели одинаковый неорганизованный гистологический вид. Точно так же линзы E15.5 из Mox2 + / cre Rb — / loxP эмбрионов показали высокие уровни несоответствующей пролиферации и апоптоза по сравнению с контрольными линзами (рис.4 D и E ). Линзы Mox2 + / cre Rb — / loxP новорожденных щенков и TR Rb — / — Плоды E15.5 были сильно дезорганизованы, сильно гипернуклеарны некротический (фиг.2 H и 5 G ). Следовательно, один характерный фенотип, проистекающий из потери функции Rb, катаракта, остался у этих генетически и тетраплоидно спасенных эмбрионов и новорожденных детенышей.Однако сетчатка спасенных животных с дефицитом Rb выглядела нормальной и не имела видимых апоптотических клеток (фиг. 2 H и 5 G ). Фенотипические различия между сетчаткой и хрусталиком у этих мышей с дефицитом Rb , вероятно, отражают различное происхождение этих тканей; в то время как клетки сетчатки являются продолжением ЦНС, происходящим от нервной эктодермы, клетки волокон хрусталика происходят от предшественника поверхностной эктодермы (20). Эти результаты предполагают, что Rb действует в развивающемся хрусталике, контролируя пролиферацию и апоптоз клеточно-автономным образом.}

Рис.4.

Плацента дикого типа не спасает аберрантный апоптоз и эктопическую пролиферацию хрусталика при использовании подхода условного нокаута. Окрашивание DAPI ( A ), иммунофлуоресцентное окрашивание BrdUrd ( B ) и тесты TUNEL ( C ) хрусталика от генетически спасенных эмбрионов E13.5 и E15.5. ( D ) Количественная оценка B . ( E ) Количественная оценка C . Аналогичные срезы мутантного эмбриона E13.5 Rb использовали в качестве контроля.Стрелки указывают на клетки с положительным окрашиванием. (Исходное увеличение: A — C , × 10.)

Тяжелая дисплазия скелетных мышц при Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и TR Rb ^{— /}000 ^— Животные. Гистологический анализ тканей плода не выявил явных дефектов мозга, сердца, печени, легких, почек или селезенки Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и TR Rb ^{— / —} животных (рис.2 и 5; данные не показаны). Однако у этих спасенных эмбрионов и новорожденных детенышей был серьезный дефицит скелетных мышц, о чем свидетельствуют гипопластические и диспластические миофибриллы в межреберных мышцах, диафрагме, конечностях и, в меньшей степени, языке (рис.2 J — M ). и 5 I — L ; данные не показаны). Хотя легкие Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} и TR Rb ^{— / —} эмбрионов на E15.5 были неотличимы от контрольных эмбрионов, легкие Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} животные после рождения демонстрировали выраженный ателектаз плода, фенотип, характеризующийся коллапсом альвеолярных воздушных пространств (рис. . 2 I и 5 H ). Этот легочный фенотип вместе с тяжелым дефектом диафрагмальных мышечных волокон позволяет предположить, что внезапная послеродовая смерть этих детенышей с дефицитом Rb была вызвана их неспособностью дышать.Кроме того, щенки Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} имели характерный «горбатый» вид и не имели нормального S-образного изгиба позвоночника (рис. 2 N ). . Никаких дополнительных аномалий скелета или дефектов окостенения не было обнаружено у спасенных детенышей с дефицитом Rb . Отсутствие искривления шейки матки и наклон головы вперед у животных Mox2 ^{+ / cre} Rb ^{— / loxP} , скорее всего, являются косвенными последствиями недостаточности необходимой скелетной мускулатуры. для поддержки правильного выравнивания скелета во время разработки.

Обсуждение

Предыдущие исследования установили центральную роль Rb в контроле клеточной пролиферации, апоптоза и дифференцировки различных клеточных клонов (21–23). Гомозиготная потеря Rb у мышей приводит к эктопической пролиферации и выраженному апоптозу, что приводит к серьезным дефектам нейрогенеза, гематопоэза печени и гибели эмбрионов на E14.5 (4-6). Совсем недавно наша работа продемонстрировала глубокий дефект плаценты у эмбрионов Rb ^{– / –} (15).Интересно, что нарушение DP1 гетеродимерного партнера E2F у мышей ведет к неправильной плацентации и ранней летальности, подтверждая важную роль пути Rb / E2F в развитии плаценты (24). Теперь мы обнаружили, что за счет снабжения экстраэмбриональными клетками дикого типа, которые формируют основную часть плаценты, Rb-дефицитные плоды развиваются до рождения без многих тяжелых фенотипов, обычно связанных с инактивацией Rb во всем эмбрионе. Таким образом, эти и другие недавно представленные результаты (15) указывают на важную функцию Rb в плаценте, которая глубоко влияет на апоптоз и дифференцировку тканей плода и в конечном итоге определяет развитие и жизнеспособность плода.

Нарушение функции Rb у мышей приводит к заметной индукции незапланированной репликации ДНК и эктопического апоптоза, который наиболее выражен в постмитотических нейронах желудочковых областей заднего мозга, DRG и спинного мозга. Предоставление экстраэмбриональных клонов дикого типа подавляло серьезные дефекты нейрогенеза, которые связаны с потерей Rb во время развития. Прямой анализ ЦНС спасенных Rb -нулевых эмбрионов показал, что, хотя незапланированная пролиферация продолжается, эктопический апоптоз, обычно наблюдаемый в постмитотических нейронах Rb ^{— / —} эмбрионов, полностью исчез.Следовательно, архитектура и дифференциация этих тканей относительно нормальны. Наши результаты согласуются с недавним подробным анализом химерных мышей Rb ^{+ / +} и Rb ^{— / —}, демонстрирующим, что Rb играет автономную роль клетки в контроле над S. -фазы и неклеточно-автономная роль в подавлении апоптоза и поддержании терминальной дифференцировки в развивающейся ЦНС (25).Lipinski et al. (25) предположил, что в химерах Rb клетки дикого типа могут изменять судьбу соседних Rb ^{— / —} нейронных клеток, предоставляя им специфический сигнал выживания или антиапоптотические сигналы. или путем создания улучшенной среды для роста, которая поддерживает непрерывное выживание клеток с дефицитом Rb . Наши результаты предполагают, что нарушение внеэмбриональной функции Rb может объяснить большую часть эктопического апоптоза, наблюдаемого у Rb ^{— / —} эмбрионов.Мы предполагаем, что потеря функции Rb во внеэмбриональных клонах приводит к избыточной пролиферации клеток лабиринтного трофобласта и нарушению развития и функции плаценты, что, следовательно, способствует индукции апоптоза в ЦНС Rb ^{— / —} эмбрионов. . Хотя точный механизм еще не ясен, на апоптоз в ЦНС могут напрямую влиять факторы, транспортируемые плацентой или производимые в ней. С другой стороны, апоптоз может быть косвенным следствием нарушения функции плаценты.Эритропоэтические дефекты в эмбрионах Rb ^{— / —} , например, могут создавать гипоксическое состояние, которое способствует апоптозу в нейронах ЦНС. В соответствии с нашим предположением, условное удаление Rb из нейрональных клеток ЦНС не вызывает апоптоза в этих клетках (26, 27). В то время как нарушение Rb во внеэмбриональных клонах приводит к апоптозу в ЦНС, который явно не является клеточным неавтономным, инактивация Rb в хрусталике и периферической нервной системе посредством Cre-опосредованной рекомбинации (см.27 и эта работа) или в эпителиальных клетках сосудистого сплетения Т-антигеном вируса обезьяны 40 приводит к апоптозу, который, по-видимому, является автономным для клеток (28, 29). Однако для этих последних наблюдений может существовать несколько других объяснений, включая эффекты, обусловленные ограниченным характером архитектуры хрусталика и дополнительными функциями Т-антигена, которые могут влиять на апоптоз, наблюдаемый в мозге этих мышей.

Эритропоэз также почти нормален у спасенных эмбрионов с дефицитом Rb , что позволяет предположить, что неклеточная автономная функция Rb во внеэмбриональных клонах может объяснить соответствующую дифференцировку различных тканей эмбриона.Хотя наши данные предполагают, что дефект плаценты является наиболее вероятной основной причиной анемии эмбрионов Rb ^{— / —} , инактивация Rb из других клеток, происходящих вне эмбриона, также может способствовать этому фенотипу. Например, мутантная энтодерма желточного мешка, которая происходит из внеэмбриональной энтодермы, может в принципе неблагоприятно влиять на эритропоэз желточного мешка и объяснять тяжелую анемию у эмбрионов с нокаутом Rb .Тот факт, что желточный мешок является основным местом эритропоэза между E8.5 и E12.5 и что эритропоэтические дефекты у эмбрионов с нокаутом Rb становятся очевидными только непосредственно перед их смертью на E14.5, предполагают, что эритропоэз желточного мешка является нормальным и вряд ли несет ответственность за их анемию и летальность. Хотя точная природа сигналов, полученных из плаценты, ответственных за дефекты развития и летальность эмбрионов Rb ^{— / —} , еще не известна, мы подозреваем, что недостаток кислорода и / или питательных веществ может привести к увеличению в незрелой продукции эритроцитов.В качестве альтернативы, поскольку плацента продуцирует факторы эритропоэтической дифференцировки, включая эритропоэтин (Epo) и плацентарный пролактин-e (Plp-e), возможно, что плацента может более непосредственно влиять на эритропоэз.

Ранняя эмбриональная летальность Rb ^{— / —} эмбрионов препятствовала исследованиям потенциальной роли Rb во время позднего развития плода. Следовательно, увеличение продолжительности жизни Rb ^{— / —} животных путем снабжения их нормальной плацентой дает возможность исследовать функцию Rb на более поздних стадиях развития.Интересно, что Rb ^{— / —} животные, получающие нормальную плаценту, имеют серьезный дефицит скелетных мышц и умирают на поздних стадиях эмбрионального развития или вскоре после рождения. Наши наблюдения показывают, что серьезные дефекты дифференцировки скелетных мышц, которые возникают на более позднем этапе развития, могут быть объяснены только потерей Rb . Кроме того, в исследованиях, в которых изучалась структура скелета (ссылки 13 и 30 и эта работа), было спасено Rb ^{— / —} животных не было нормальной кривизны шейки матки и, как правило, черепа были согнуты вперед, который мы теперь предполагаем быть вторичным эффектом серьезного дефицита массы скелетных мышц.Эти наблюдения предоставляют in vivo доказательств роли Rb в дифференцировке скелетных мышц и указывают на то, что эта функция Rb, как и в развитии хрусталика, вероятно, является клеточно-автономной.

Интересно, что потеря регуляторов клеточного цикла E2F1, E2F3 или Id2 также может спасти, по крайней мере частично, раннюю летальность Rb ^{— / —} эмбрионов и некоторых из ^{— Rb. / — последствия, связанные с} (30–32).Эти наблюдения вместе с нашими текущими открытиями, указывающими на ключевую роль Rb в развитии плаценты, повышают вероятность того, что E2F1, E2F3 и Id2 могут функционировать как нижестоящие эффекторы Rb в контроле пролиферации и дифференцировки внеэмбриональных клонов, которые образуют плаценту. . Если бы это было так, то инактивации этих регуляторов клеточного цикла из плаценты Rb ^{— / —} могло бы быть достаточно для восстановления функции плаценты и, таким образом, спасения некоторых фенотипических последствий, проистекающих из инактивации Rb, включая раннее летальность Rb ^{— / —} эмбрионов.Хотя подавление эритропоэтических дефектов и апоптоза в ЦНС Rb ^{— / —} эмбрионов за счет потери E2F1 или E2F3 может быть механически связано с восстановлением плаценты, наши данные предполагают, что подавление несоответствующего S- вступление в фазу у двойных мутантных эмбрионов, вероятно, отражает клеточно-автономные функции Rb и E2Fs. Текущие находки побудят к более тщательной оценке клеточно-автономной или не-клеточной автономной природы взаимодействий между Rb, E2F и Id2 во время развития.

Таким образом, эмбриональные манипуляции и стратегии условного нокаута привели нас к выявлению и определению ключевой функции Rb во внеэмбриональных клонах, которая необходима для развития и жизнеспособности плода, что позволило разделить клеточно-автономные и неклеточно-автономные функции Rb у плода. Идентификация автономных и не автономных клеток функций Rb представляет собой первый шаг к выяснению молекулярного механизма, с помощью которого Rb действует во время развития.В будущем идентификация и выделение точных клеток, происходящих из плаценты, дефектных в эмбрионах Rb ^{– / –} будет вторым ключевым шагом в понимании функции Rb.

Благодарности

Мы благодарим A. Berns, P. Soriano и T. Jacks за Rb ^{+ / loxP} , Mox2 ^{+ / cre} и Rb ^{+ / —} мышей соответственно.Эта работа была поддержана грантами Национального института рака (для G.L. и T.J.R.), Национальных институтов здравоохранения (для M.W. и G.L.) и Национального центра исследовательских ресурсов (для T.J.R.). Л.В. и его. были поддержаны наградами Национальных институтов здравоохранения, A.d.B. был поддержан докторской стипендией Up on the Roof Human Cancer Genetics, а G.L. является V Foundation и стипендиатом Pew.

Сноски

• ↵ ** Кому следует обращаться.Электронная почта: Leone-1 {at} medctr.osu.edu.

• Сокращения: DRG, ганглии задних корешков; E n , эмбриональный день n ; TR, спасенный тетраплоидом; TUNEL, опосредованное терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой мечение ник-концов dUTP.

• Поступило 27 января 2003 г.

• Авторское право © 2003, Национальная академия наук

Микробиомы, метаболиты и экология определяют микробиом при недостаточном и эффективном репарации несовпадения колоректального рака | Геномная медицина

1.

Флемер Б., Линч Д. Б., Браун Дж. М.Р., Джеффри И.Б., Райан Ф.Дж., Клаессон М.Дж. и др. Опухолевая и не связанная с опухолью микробиота при колоректальном раке. Кишечник. 2017; 66: 633–43. https://doi.org/10.1136/gutjnl-2015-309595.

CAS Статья Google ученый

2.

Чен В., Лю Ф., Лин З, Тонг Х, Сян К. Микробиота кишечника человека и микробиота слизистой оболочки у пациентов с колоректальным раком. PLoS One. 2012; 7: e39743.

CAS Статья Google ученый

3.

Zackular JP, Baxter NT, Chen GY, Schloss PD. Манипуляции с кишечной микробиотой выявляют роль в опухолевом генезе толстой кишки mSphere 2016; 1: e00001 – e00015. DOI: https: //doi.org/10.1128/mSphere.00001-15.

4.

Ан Дж., Синха Р., Пей З., Доминианни С., Ву Дж., Ши Дж. И др. Микробиом кишечника человека и риск колоректального рака. J Natl Cancer Inst. 2013; 105: 1907–11.

CAS Статья Google ученый

5.

Артур Дж. К., Гараибех Р. З., Мюльбауэр М., Перес-Чанона Е., Уронис Дж. М., Маккафферти Дж. И др.Геномный анализ микробов показывает важную роль воспаления при колоректальном раке, вызванном бактериями. Nat Commun. 2014; 5: 4724. https://doi.org/10.1038/ncomms5724.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

6.

Brennan CA, Garrett WS. Микробиота кишечника, воспаление и колоректальный рак. Annu Rev Microbiol. 2016; 70: 395–411. https://doi.org/10.1146/annurev-micro-102215-095513.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

7.

Marchesi JR, Dutilh BE, Hall N, Peters WH, Roelofs R, Boleij A, et al. К микробиому колоректального рака человека. PLoS One. 2011; 6: e20447. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0020447.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

8.

Sobhani I., Tap J, Roudot-Thoraval F, Roperch JP, Letulle S, Langella P, et al. Микробный дисбактериоз у пациентов с колоректальным раком (CRC). PLoS One. 2011; 6: e16393.

CAS Статья Google ученый

9.

Louis P, Hold GL, Flint HJ. Микробиота кишечника, бактериальные метаболиты и колоректальный рак. Nat Rev Microbiol. 2014; 12: 661–72.

CAS Статья Google ученый

10.

Кастелларин М., Уоррен Р.Л., Фриман Д.Д., Дреолини Л., Кшивински М., Штраус Дж. И др. Инфекция Fusobacterium nucleatum широко распространена при колоректальной карциноме человека.Genome Res. 2012; 22: 299–306.

CAS Статья Google ученый

11.

Kostic AD, Chun E, Robertson L, Glickman JN, Gallini CA, Michaud M, et al. Fusobacterium nucleatum усиливает онкогенез кишечника и модулирует иммунное к опухоли микроокружение. Клеточный микроб-хозяин. 2013; 14: 207–15.

CAS Статья Google ученый

12.

Мима К., Нишихара Р., Цянь З.Р., Цао Ю., Сукава Ю., Новак Дж. А. и др.Fusobacterium nucleatum в ткани колоректального рака и прогноз пациента. Кишечник. 2016; 65: 1973–80.

CAS Статья Google ученый

13.

Фланаган Л., Шмид Дж., Эберт М., Соучек П., Куницка Т., Лиска В. и др. Fusobacterium nucleatum ассоциируется со стадиями развития колоректальной неоплазии, колоректального рака и исходом заболевания. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014; 33: 1381–90.

CAS Статья Google ученый

14.

Kostic AD, Gevers D, Pedamallu CS, Michaud M, Duke F, Earl AM и др. Геномный анализ выявляет ассоциацию Fusobacterium с колоректальной карциномой. Genome Res. 2012; 22: 292–8.

CAS Статья Google ученый

15.

Drewes JL, White JR, Dejea CM, Fathi P, Iyadorai T., Vadivelu J, et al. Мета-анализ бактериального профиля гена 16S рРНК с высоким разрешением и статус биопленки выявляют общие консорциумы колоректального рака.NPJ Biofilms Microbiomes. 2017; 3: 34.

Артикул Google ученый

16.

Синха Р., Абу-Али Г., Фогтманн Э., Фодор А.А., Рен Б., Амир А. и др. Оценка вариации в последовательности ампликонов микробного сообщества консорциумом проекта Microbiome Quality Control (MBQC). Nat Biotechnol. 2017; 35: 1077–86. https://doi.org/10.1038/nbt.3981.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

17.

Рубинштейн MR, Ван X, Лю В, Хао Y, Цай Г, Хан YW. Fusobacterium nucleatum способствует колоректальному канцерогенезу, модулируя передачу сигналов E-кадгерин / β-катенин через его адгезин FadA. Клеточный микроб-хозяин. 2013; 14: 195–206.

CAS Статья Google ученый

18.

Ян Й., Венг В., Пэн Дж., Хун Л., Ян Л., Тояма Ю. и др. Fusobacterium nucleatum увеличивает пролиферацию клеток колоректального рака и развитие опухолей у мышей за счет активации передачи сигнала TLR4 к NFκB, повышая экспрессию микроРНК-21.Гастроэнтерология. 2016; 152: 851–866.e24. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2016.11.018.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

19.

Housseau F, Sears CL. Энтеротоксигенный Bacteroides fragilis (ETBF) -опосредованный колит у мышей min (Apc +/-): мышиная модель канцерогенеза толстой кишки на основе комменсала человека. Клеточный цикл. 2010; 9: 3–5.

CAS Статья Google ученый

20.

Перселл Р., Пирсон Дж., Эйчисон А., Диксон Л., Фризель Ф. А., Кинан Дж. Колонизация энтеротоксигенным Bacteroides fragilis связана с ранней стадией колоректальной неоплазии. PLoS One. 2017; 12: e0171602.

Артикул Google ученый

21.

Чанг Л., Тиле Орберг Э., Гейс А.Л., Чан Дж.Л., Фу К., ДеСтефано Шилдс CE и др. Токсин Bacteroides fragilis координирует проканцерогенный воспалительный каскад, воздействуя на эпителиальные клетки толстой кишки.Клеточный микроб-хозяин. 2018; 23: 203–214.e5. https://doi.org/10.1016/j.chom.2018.01.007.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

22.

Koi M, Okita Y, Carethers JM. Инфекция Fusobacterium nucleatum при колоректальном раке: связывание воспаления, восстановления несоответствия ДНК и генетических и эпигенетических изменений. J анус, прямая кишка толстой кишки. 2018; 2: 37–46. https://doi.org/10.23922/jarc.2017-055.

Артикул Google ученый

23.

Abed J, Emgård JEM, Zamir G, Faroja M, Almogy G, Grenov A, et al. Fap2 опосредует обогащение колоректальной аденокарциномы fusobacterium nucleatum путем связывания с экспрессируемым опухолью Gal-GalNAc. Клеточный микроб-хозяин. 2016; 20: 215–25.

CAS Статья Google ученый

24.

Dejea CM, Fathi P, Craig JM, Boleij A, Taddese R, Geis AL, et al. Пациенты с семейным аденоматозным полипозом содержат биопленки толстой кишки, содержащие онкогенные бактерии.Наука (80-). 2018; 359: 592–7.

CAS Статья Google ученый

25.

Richman S. Ремонт дефектного несоответствия: прочтите об этом (обзор). Int J Oncol. 2015; 47: 1189–202.

CAS Статья Google ученый

26.

French AJ, Sargent DJ, Burgart LJ, Foster NR, Kabat BF, Goldberg R, et al. Прогностическое значение дефектной репарации несовпадений и BRAF V600E у пациентов с раком толстой кишки.Clin Cancer Res. 2008; 14: 3408–15. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-07-1489.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

27.

Guinney J, Dienstmann R, Wang X, De Reyniès A, Schlicker A, Soneson C, et al. Консенсусные молекулярные подтипы колоректального рака. Nat Med. 2015; 21: 1350.

CAS Статья Google ученый

28.

Мортенссон А., Оберг А., Юнг А., Седерквист К., Стенлинг Р., Палмквист Р. Экспрессия бета-катенина в связи с генетической нестабильностью и прогнозом при колоректальном раке. Онкол Реп. 2007; 17: 447–52.

PubMed Google ученый

29.

Morkel M, Riemer P, Bläker H, Sers C. Схожие, но разные: разные роли онкогенов KRAS и BRAF в развитии колоректального рака и устойчивости к терапии. Oncotarget. 2015; 6: 20785–800. https: // doi.org / 10.18632 / oncotarget.4750.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

30.

Sweetser S, Jones A, Smyrk TC, Sinicrope FA. Сидячие зубчатые полипы являются предшественниками карциномы толстой кишки с недостаточной репарацией несоответствия ДНК. Клин Гастроэнтерол Гепатол. 2016; 14: 1056–9.

CAS Статья Google ученый

31.

Dejea CM, Wick EC, Hechenbleikner EM, White JR, Mark Welch JL, Rossetti BJ, et al.Организация микробиоты — отличительная черта проксимального колоректального рака. Proc Natl Acad Sci. 2014; 111: 18321–6. https://doi.org/10.1073/pnas.1406199111.

CAS Статья PubMed Google ученый

32.

Перселл Р.В., Висновска М., Биггс П.Дж., Шмайер С., Фризель Ф.А. Отчетливые паттерны микробиома кишечника ассоциируются с консенсусными молекулярными подтипами колоректального рака. Научный отчет 2017; 7: 11590.

Артикул Google ученый

33.

Белчева А., Ирразабал Т., Робертсон С.Дж., Стрейткер С., Моган Х., Рубино С. и др. Микробный метаболизм кишечника управляет трансформацией эпителиальных клеток толстой кишки с дефицитом msh3. Клетка. 2014; 158: 288–99.

CAS Статья Google ученый

34.

Lennard KS, Goosen RW, Blackburn JM. Бактериально-ассоциированное ремоделирование транскрипции в отдельном геномном подтипе колоректального рака обеспечивает правдоподобную молекулярную основу для развития заболевания.PLoS One. 2016; 11: e0166282. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166282.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

35.

Хейл В.Л., Джеральдо П., Манди М., Яо Дж., Кини Дж., Скотт Н. и др. Синтез многомерных данных и моделей метаболизма сообщества позволяет лучше понять роль сероводорода в развитии рака толстой кишки. Методы. 2018. https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2018.04.024.

CAS Статья Google ученый

36.

Chen J, Ryu E, Hathcock M, Ballman K, Chia N, Olson JE и др. Влияние демографии на микробное разнообразие кишечника человека в популяции Среднего Запада США. PeerJ. 2016; 4: e1514. https://doi.org/10.7717/peerj.1514.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

37.

Hale VL, Chen J, Johnson S, Harrington SC, Yab TC, Smyrk TC, et al. Изменения фекальной микробиоты, связанные с аденоматозными полипами. Эпидемиол рака. Предыдущие биомаркеры.2017; 26: 85–94.

CAS Статья Google ученый

38.

Каллахан Б.Дж., Макмерди П.Дж., Розен М.Дж., Хан А.В., Джонсон А.Дж., Холмс С.П. DADA2: вывод образца с высоким разрешением из данных ампликона Illumina. Нат методы. 2016; 13: 581–3.

CAS Статья Google ученый

39.

Ван К., Гаррити ГМ, Тидже Дж. М., Коул Дж. Р. Наивный байесовский классификатор для быстрого отнесения последовательностей рРНК к новой бактериальной таксономии.Appl Environ Microbiol. 2007. 73: 5261–7.

CAS Статья Google ученый

40.

Quast C, Pruesse E, Yilmaz P, Gerken J, Schweer T., Yarza P, et al. Проект базы данных генов рибосомных РНК SILVA: улучшенная обработка данных и веб-инструменты. Nucleic Acids Res. 2013; 41: D590–6.

CAS Статья Google ученый

41.

Копылова Э., Ноэ Л., Тузе Х.SortMeRNA: быстрая и точная фильтрация рибосомных РНК в метатранскриптомических данных. Биоинформатика. 2012; 28: 3211–7.

CAS Статья Google ученый

42.

Nawrocki EP, Eddy SR. Infernal 1.1: поиск гомологии РНК в 100 раз быстрее. Биоинформатика. 2013; 29: 2933–5.

CAS Статья Google ученый

43.

Цена МН, Дехал П.С., Аркин А.П. FastTree 2 — деревья приблизительно максимального правдоподобия для больших трасс.PLoS One. 2010; 5: e9490.

Артикул Google ученый

44.

Lozupone C, Knight R. UniFrac: новый филогенетический метод сравнения микробных сообществ. Appl Environ Microbiol. 2005. 71: 8228–35. https://doi.org/10.1128/AEM.71.12.8228-8235.2005.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

45.

McMurdie PJ, Holmes S. Phyloseq: пакет R для воспроизводимого интерактивного анализа и графики данных переписи микробиома.PLoS One. 2013; 8: e61217. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061217.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

46.

Оксанен Дж., Киндт Р., Лежандр П., О’Хара Б., Симпсон Г.Л., Солимос П.М. и др. Веганский пакет. Сообщество Ecol Packag. 2008: 190. https://doi.org/10.4135/9781412971874.n145.

47.

Болкер Б.М., Брукс М.Э., Кларк С.Дж., Геанж С.В., Поулсен Дж. Р., Стивенс М. Х. и др. Обобщенные линейные смешанные модели: практическое руководство по экологии и эволюции.Trends Ecol Evol. 2009. 24: 127–35. https://doi.org/10.1016/j.tree.2008.10.008.

Артикул PubMed Google ученый

48.

Брукс М.Э., Кристенсен К., ван Бентем К.Дж., Магнуссон А., Берг К.В., Нильсен А. и др. glmmTMB уравновешивает скорость и гибкость среди пакетов для обобщенного линейного смешанного моделирования с нулевым раздутием. R J 2017; 9: 378–400.

49.

Burns MB, Montassier E, Abrahante J, Priya S, Niccum DE, Khoruts A, et al.Мутационные профили колоректального рака коррелируют с определенными микробными сообществами в микроокружении опухоли. PLoS Genet. 2018; 14: 0^{. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1007376.}

Артикул Google ученый

50.

Orth JD, Thiele I, Palsson BØ. Что такое анализ баланса потоков? Nat Biotechnol. 2010; 28: 245–8. https://doi.org/10.1038/nbt.1614.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

51.

Mendes-Soares H, Mundy M, Soares LM, Chia N. MMinte: приложение для прогнозирования метаболических взаимодействий между видами микробов в сообществе. BMC Bioinformatics. 2016; 17: 343. https://doi.org/10.1186/s12859-016-1230-3.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

52.

Сунг Дж., Ким С., Кабатбат Дж. Дж. Т., Джанг С., Джин И-С, Юнг Дж. И др. Глобальная сеть метаболического взаимодействия микробиоты кишечника человека для контекстно-зависимого анализа в масштабе сообщества.Nat Commun. 2017; 8: 15393. https://doi.org/10.1038/ncomms15393.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

53.

Шеннон П., Маркиэль А., Озьер О., Балига Н.С., Ван Дж. Т., Рэймидж Д. и др. Cytoscape: программная среда для интегрированных моделей сетей биомолекулярного взаимодействия. Genome Res. 2003. 13: 2498–504.

CAS Статья Google ученый

54.

Аттене-Рамос М.С., Нава Г.М., Мюлльнер М.Г., Вагнер Э.Д., Плева М.Дж., Гаскинс Х.Р. Повреждение ДНК и токсикогеномный анализ сероводорода в человеческих эпителиальных FHs 74 кишечных клеток. Environ Mol Mutagen. 2010; 51: 304–14.

CAS PubMed Google ученый

55.

Wolf PG, Parthasarathy G, Chen J, O’Connor HM, Chia N, Bharucha AE, et al. Оценка микробиома толстой кишки, гидрогеногенных и гидрогенотрофных генов, транзита и вдыхания метана при запоре.Нейрогастроэнтерол Мотил. 2017; 29: 1–9.

CAS Статья Google ученый

56.

Lee ZW, Zhou J, Chen CS, Zhao Y, Tan CH, Li L, et al. Медленно высвобождающийся донор сероводорода, GYY4137, проявляет новые противораковые эффекты in vitro и in vivo. PLoS One. 2011; 6: e21077.

CAS Статья Google ученый

57.

Hellmich MR, Coletta C, Chao C, Szabo C.Терапевтический потенциал ингибирования цистатионин-β-синтетазы / сероводорода при раке. Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал. 2015; 22: 424–48. https://doi.org/10.1089/ars.2014.5933.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

58.

Cai W, Wang M, Ju L, Wang C, Zhu Y. Сероводород индуцирует пролиферацию клеток рака толстой кишки человека: роль Akt, ERK и p21. Cell Biol Int. 2010; 34: 565–72. https://doi.org/10.1042 / CBI200

.

CAS Статья PubMed Google ученый

59.

Лим Д.Р., Кук Дж.К., Ким Т., Шин Э.Дж. Сравнение онкологических исходов рака правой толстой кишки и рака левой толстой кишки после радикальной резекции. Мед (США). 2017; 96: e8241.

Google ученый

60.

Maiuri AR, Peng M, Sriramkumar S, Kamplain CM, DeStefano Shields CE, Sears CL, et al.Белки репарации несоответствия инициируют эпигенетические изменения во время онкогенеза, вызванного воспалением. Cancer Res. 2017; 77: 3467–78.

CAS Статья Google ученый

61.

Lind AL, Wisecaver JH, Lameiras C., Wiemann P, Palmer JM, Keller NP, et al. Факторы генетического разнообразия в кластерах вторичных метаболических генов в пределах одного вида грибов. PLoS Biol. 2017; 15: e2003583.

Артикул Google ученый

62.

Magnúsdóttir S, Thiele I. Моделирование метаболизма микробиома кишечника человека. Curr Opin Biotechnol. 2018; 51: 90–6.

Артикул Google ученый

63.

Бенедикт М.Н., Манди М.Б., Генри С.С., Чиа Н., Прайс без даты. Аннотации генов на основе правдоподобия для заполнения пробелов и оценки качества в моделях метаболизма в масштабе генома. PLoS Comput Biol. 2014; 10: e1003882.

Артикул Google ученый

64.

Magnúsdóttir S, Heinken A, Kutt L, Ravcheev DA, Bauer E, Noronha A, et al. Создание метаболических реконструкций в масштабе генома для 773 представителей кишечной микробиоты человека. Nat Biotechnol. 2017; 35: 81–9.

Артикул Google ученый

65.

Wattam AR, Abraham D, Dalay O, Disz TL, Driscoll T., Gabbard JL, et al. PATRIC, база данных и аналитический ресурс по бактериальной биоинформатике. Nucleic Acids Res. 2014; 42: D581–91.

CAS Статья Google ученый

Потеря E2F1 вызывает спонтанное развитие опухоли в Rb-дефицитном эпидермисе

1

Nevins JR.Путь Rb / E2F и рак. Hum Mol Genet 2001; 10 : 699–703.

CAS Статья Google ученый

2

Ruiz S, Santos M, Segrelles C, Leis H, Jorcano JL, Berns A et al . Уникальные и частично совпадающие функции pRb и p107 в контроле пролиферации и дифференцировки в эпидермисе. Разработка 2004; 131 : 2737–2748.

CAS Статья Google ученый

3

Руис С., Сантос М., Лара М.Ф., Сегрелес С., Баллестин С., Парамио Дж. М..Неожиданная роль pRb в канцерогенезе кожи мышей. Cancer Res 2005; 65 : 9678–9686.

CAS Статья Google ученый

4

Martinez-Cruz AB, Santos M, Lara MF, Segrelles C, Ruiz S, Moral M и др. . Спонтанная плоскоклеточная карцинома, индуцированная соматической инактивацией ретинобластомы и опухолевых супрессоров Trp53. Cancer Res 2008; 68 : 683–692.

CAS Статья Google ученый

5

Лара М.Ф., Сантос М., Руис С., Сегреллес С., Морал М., Мартинес-Крус А.Б. и др. .p107 действует как опухолевый супрессор в pRb-дефицитном эпидермисе. Mol Carcinog 2008; 47 : 105–113.

CAS Статья Google ученый

6

Сантос М., Руис С., Лара М.Ф., Сегреллес С., Морал М., Мартинес-Крус А.Б. и др. . Восприимчивость эпидермиса с дефицитом pRb к химическому канцерогенезу кожи зависит от дозы аллеля p107. Mol Carcinog 2008; 47 : 815–821.

CAS Статья Google ученый

7

Сейдж Дж., Миллер А.Л., Перес-Мансера П.А., Высоцкий Дж. М., Джекс Т.Острая мутация функции гена ретинобластомы достаточна для повторного входа в клеточный цикл. Nature 2003; 424 : 223–228.

CAS Статья Google ученый

8

Johnson DG, Cress WD, Jakoi L, Nevins JR. Онкогенная способность гена E2F1. Proc Nat Acad Sci USA 1994; 91 : 12823–12827.

CAS Статья Google ученый

9

Johnson DG, Schwarz JK, Cress WD, Nevins JR.Экспрессия фактора транскрипции E2F1 побуждает покоящиеся клетки переходить в S-фазу. Nature 1993; 365 : 349–352.

CAS Статья Google ученый

10

Field SJ, Tsai FY, Kuo F, Zubiaga AM, Kaelin WG, Livingston DM et al . E2F-1 действует у мышей, способствуя апоптозу и подавляя пролиферацию. Cell 1996; 85 : 549–561.

CAS Статья Google ученый

11

Ямасаки Л., Джекс Т, Бронсон Р., Гойо Э, Харлоу Э, Дайсон, штат Нью-Джерси.Индукция опухоли и атрофия тканей у мышей, лишенных E2F-1. Cell 1996; 85 : 537–548.

CAS Статья Google ученый

12

Ямасаки Л., Бронсон Р., Уильямс Б.О., Дайсон Нью-Джерси, Харлоу Е., Джекс Т. Потеря E2F-1 снижает онкогенез и увеличивает продолжительность жизни мышей Rb1 (+/-). Nature genetics 1998; 18 : 360–364.

CAS Статья Google ученый

13

Цай К.Ю., Ху Y, Маклеод К.Ф., Кроули Д., Ямасаки Л., Джекс Т.Мутация E2f-1 подавляет апоптоз и несоответствующее вступление в S-фазу и увеличивает выживаемость Rb-дефицитных эмбрионов мыши. Molecular Cell 1998; 2 : 293–304.

CAS Статья Google ученый

14

Paramio JM, Segrelles C, Casanova ML, Jorcano JL. Противоположные функции E2F1 и E2F4 в дифференцировке эпидермальных кератиноцитов человека. J Biol Chem 2000; 275 : 41219–41226.

CAS Статья Google ученый

15

D’Souza SJ, Vespa A, Murkherjee S, Maher A, Pajak A, Dagnino L. E2F-1 необходим для нормального заживления эпидермальных ран. J Biol Chem 2002; 277 (): 10626–10632.

CAS Статья Google ученый

16

Лорц К., Гарсия-Эскудеро Р., Сегреллес С., Гарин М.И., Ариса Дж. М., Сантос М. и др. .Функциональная роль RB-зависимого пути в контроле покоя взрослых эпидермальных стволовых клеток выявлена ​​с помощью геномного профилирования. Обзоры стволовых клеток 2010; 6 : 162–177.

Артикул Google ученый

17

Лопес Р.Г., Гарсия-Силва С., Мур С.Дж., Берещенко О., Мартинес-Крус А.Б., Ермакова О. и др. . C / EBPalpha и бета-пара межфолликулярная пролиферация кератиноцитов останавливает предопределение и терминальную дифференцировку. Nat Cell Biol 2009; 11 : 1181–1190.

CAS Статья Google ученый

18

Пирс А.М., Фишер С.М., Конти С.Дж., Джонсон Д.Г. Дерегулированная экспрессия E2F1 вызывает гиперплазию и взаимодействует с ras в развитии опухоли кожи. Онкоген 1998; 16 : 1267–1276.

CAS Статья Google ученый

19

Pierce AM, Gimenez-Conti IB, Schneider-Broussard R, Martinez LA, Conti CJ, Johnson DG.Повышенная активность E2F1 вызывает опухоли кожи у мышей, гетерозиготных и нулевых по p53. Proc Nat Acad Sci USA 1998; 95 : 8858–8863.

CAS Статья Google ученый

20

Pierce AM, Schneider-Broussard R, Gimenez-Conti IB, Russell JL, Conti CJ, Johnson DG. E2F1 обладает как онкогенными, так и опухолевыми свойствами в трансгенной модели. Mol Cell Biol 1999; 19 : 6408–6414.

CAS Статья Google ученый

21

Виконкал Н.М., Ременьик Э., Кнежевич Д., Чжан В., Лю М., Чжао Х. и др. . Инактивация E2f1 восстанавливает устойчивость к апоптозу и чувствительность к раку у мышей с дефицитом Trp53. Nat Cell Biol 2003; 5 : 655–660.

CAS Статья Google ученый

22

Рассел Дж. Л., Слабый Р. Л., Бертон Т. Р., Джонсон Д. Г..E2F1 подавляет канцерогенез кожи через путь ARF-p53. Онкоген 2006; 25 : 867–876.

CAS Статья Google ученый

23

Лара М.Ф., Гарсия-Эскудеро Р., Руис С., Сантос М., Мораль М., Мартинес-Крус А.Б. и др. . Подходы к профилированию генов помогают определить специфические функции семейства ретинобластом в эпидермисе. Mol Carcinog 2008; 47 : 209–221.

CAS Статья Google ученый

24

Лахманн А., Сюй Х., Кришнан Дж., Бергер С.И., Мазлум А.Р., Мааян А.ChEA: регуляция фактора транскрипции, полученная в результате интеграции полногеномных экспериментов с ChIP-X. Биоинформатика 2010; 26 : 2438–2444.

CAS Статья Google ученый

25

О’Гин ВМ, Сан ТТ, Манабе М. Взаимодействие трихогиалина с промежуточными филаментами: три иммунологически определенные стадии созревания трихогиалина. J Invest Dermatol 1992; 98 : 24–32.

CAS Статья Google ученый

26

Ruiz S, Santos M, Paramio JM.Существенна ли потеря pRb для канцерогенеза кожи мышей? Cell Cycle 2006; 5 : 625–629.

CAS Статья Google ученый

27

Моррис EJ, Ji JY, Yang F, Di Stefano L, Herr A, Moon NS et al . E2F1 подавляет транскрипцию бета-катенина и противостоит как pRB, так и CDK8. Nature 2008; 455 : 552–556.

CAS Статья Google ученый

28

Gat U, DasGupta R, Degenstein L, Fuchs E.Морфогенез волосяного фолликула De Novo и опухоли волос у мышей, экспрессирующих усеченный бета-катенин в коже. Cell 1998; 95 : 605–614.

CAS Статья Google ученый

29

Lo Celso C, Prowse DM, Watt FM. Временной активации передачи сигналов бета-катенином в эпидермисе взрослых мышей достаточно, чтобы индуцировать новые волосяные фолликулы, но постоянная активация необходима для поддержания опухолей волосяных фолликулов. Разработка 2004; 131 : 1787–1799.

CAS Статья Google ученый

30

Doglioni C, Piccinin S, Demontis S, Cangi MG, Pecciarini L, Chiarelli C и др. . Изменения пути бета-катенина в немеланомных опухолях кожи: потеря ядерной реактивности альфа-ABC коррелирует с наличием мутации гена бета-катенина. Am J pathol 2003; 163 : 2277–2287.

CAS Статья Google ученый

31

Lowry WE, Blanpain C, Nowak JA, Guasch G, Lewis L, Fuchs E.Определение влияния трансактивации бета-катенина / Tcf на эпителиальные стволовые клетки. Genes Dev 2005; 19 : 1596–1611.

CAS Статья Google ученый

32

Huelsken J, Vogel R, Erdmann B, Cotsarelis G, Birchmeier W. бета-катенин контролирует морфогенез волосяного фолликула и дифференцировку стволовых клеток в коже. Cell 2001; 105 : 533–545.

CAS Статья Google ученый

33

Li M, He Y, Dubois W., Wu X, Shi J, Huang J.Определенные регуляторные механизмы и функции для генов ответа на повреждение ДНК, активируемых p53 и репрессированных p53, в эмбриональных стволовых клетках. Молекулярная ячейка 2012; 46 : 30–42.

CAS Статья Google ученый

34

Rhodes DR, Kalyana-Sundaram S, Mahavisno V, Varambally R, Yu J, Briggs BB et al . Oncomine 3.0: гены, пути и сети в коллекции из 18 000 профилей экспрессии генов рака. Неоплазия 2007; 9 : 166–180.

CAS Статья Google ученый

35

Родос Д.Р., Ю Дж., Шанкер К., Дешпанде Н., Варамбалли Р., Гош Д. и др. . ONCOMINE: база данных микрочипов рака и интегрированная платформа интеллектуального анализа данных. Neoplasia 2004; 6 : 1–6.

CAS Статья Google ученый

36

Chong JL, Wenzel PL, Saenz-Robles MT, Nair V, Ferrey A, Hagan JP et al .E2f1-3 переключается с активаторов в клетках-предшественниках на репрессоры в дифференцирующихся клетках. Nature 2009; 462 : 930–934.

CAS Статья Google ученый

37

Chong JL, Tsai SY, Sharma N, Opavsky R, Price R, Wu L et al . E2f3a и E2f3b способствуют контролю пролиферации клеток и развития мышей. Mol Cell Biol 2009; 29 : 414–424.

CAS Статья Google ученый

38

Saavedra HI, Wu L, de Bruin A, Timmers C, Rosol TJ, Weinstein M et al .Специфичность E2F1, E2F2 и E2F3 в опосредовании фенотипов, вызванных потерей Rb. Cell Growth Differ 2002; 13 : 215–225.

CAS PubMed Google ученый

39

Rabbani F, Cordon-Cardo C. Мутации регуляторов клеточного цикла и их влияние на поверхностный рак мочевого пузыря. Урол клин North Am 2000; 27 : 83–102 ix.

CAS Статья Google ученый

40

Раббани Ф., Ричон В.М., Орлов И., Лу М.Л., Дробняк М., Дудас М и др. .Прогностическое значение фактора транскрипции E2F-1 при раке мочевого пузыря: генотипическая и фенотипическая характеристика. J Natl Cancer Ins 1999; 91 : 874–881.

CAS Статья Google ученый

41

Ли Дж.С., Лим С.Х., Ли С.И., Ким С.К., Парк Е.С., Ким С.Б. и др. . Сигнатура экспрессии E2F1 и связанных с ним генов предсказывает прогрессирование опухолей мочевого пузыря от поверхностного до инвазивного. J Clin Oncol 2010; 28 : 2660–2667.

CAS Статья Google ученый

42

Rounbehler RJ, Rogers PM, Conti CJ, Johnson DG. Инактивация E2f1 усиливает онкогенез в трансгенной модели Myc. Cancer Res 2002; 62 : 3276–3281.

CAS PubMed Google ученый

43

Paulson QX, McArthur MJ, Johnson DG. E2F3a стимулирует пролиферацию, p53-независимый апоптоз и канцерогенез на модели трансгенных мышей. Cell Cycle 2006; 5 : 184–190.

CAS Статья Google ученый

44

Ziebold U, Reza T, Caron A, Lees JA. E2F3 вносит вклад как в несоответствующую пролиферацию, так и в апоптоз, возникающий у мутантных эмбрионов Rb. Genes Dev 2001; 15 : 386–391.

CAS Статья Google ученый

45

Ruiz S, Segrelles C, Santos M, Lara MF, Paramio JM.Функциональная связь между семейством белков ретинобластомы и сигнальным путем Wnt в эпидермисе мыши. Dev Dyn 2004; 230 : 410–418.

CAS Статья Google ученый

46

Takebe N, Harris PJ, Warren RQ, Ivy SP. Нацеливание на раковые стволовые клетки путем ингибирования путей Wnt, Notch и Hedgehog. Нат Рев Клин Онкол 2011; 8 : 97–106.

CAS Статья Google ученый

47

Лобо Н.А., Шимоно Й., Цянь Д., Кларк М.Ф.Биология раковых стволовых клеток. Annu Rev Cell Dev Biol 2007; 23 : 675–699.

CAS Статья Google ученый

48

Clevers H. Передача сигналов Wnt / бета-катенина в развитии и заболевании. Cell 2006; 127 : 469–480.

CAS Статья Google ученый

49

Chan EF, Gat U, McNiff JM, Fuchs E. Распространенная опухоль кожи человека вызывается активирующими мутациями бета-катенина. Nature genetics 1999; 21 : 410–413.

CAS Статья Google ученый

50

Gandarillas A, Watt FM. c-Myc способствует дифференцировке эпидермальных стволовых клеток человека. Genes Dev 1997; 11 : 2869–2882.

CAS Статья Google ученый

51

Haegebarth A, Clevers H. Передача сигналов Wnt, lgr5 и стволовые клетки в кишечнике и коже. Am J pathol 2009; 174 : 715–721.

CAS Статья Google ученый

52

Алонсо Л., Фукс Э. Стволовые клетки кожи: нет отходов, нет. Genes Dev 2003; 17 : 1189–1200.

CAS Статья Google ученый

53

Lorz C, Segrelles C, Paramio JM. О происхождении эпидермального рака. Curr Mol med 2009; 9 : 353–364.

Артикул Google ученый

54

Ахмад И., Сансом О.Дж., Леунг Х. Изучение молекулярной генетики рака мочевого пузыря: уроки, извлеченные из моделей на мышах. Dis модели мех 2012 г .; 5 : 323–332.

CAS Статья Google ученый

55

Ахмад И., Патель Р., Лю Й., Сингх Л. Б., Такето М. М., Ву XR и др. . Мутация Ras взаимодействует с активацией бета-катенина, управляя опухолью мочевого пузыря. Болезнь клеточной смерти 2011; 2 : e124.

CAS Статья Google ученый

56

Ахмад И., Мортон Дж. П., Сингх Л. Б., Радулеску С. М., Риджуэй Р. А., Патель С. и др. . Активация бета-катенина взаимодействует с потерей PTEN, вызывая образование рака мочевого пузыря. Онкоген 2011 г .; 30 : 178–189.

CAS Статья Google ученый

57

Шин К., Ли Дж., Гуо Н, Ким Дж., Лим А., Цюй Л. и др. .Обратная связь Hedgehog / Wnt поддерживает регенеративную пролиферацию эпителиальных стволовых клеток в мочевом пузыре. Природа 2011; 472 : 110–114.

CAS Статья Google ученый

58

Brandt WD, Matsui W., Rosenberg JE, He X, Ling S, Schaeffer EM и др. . Карцинома уротелия: стволовые клетки на грани. Раковые метастазы, рев. 2009; 28 : 291–304.

Артикул Google ученый

59

Segrelles C, Lu J, Hammann B, Santos M, Moral M, Cascallana JL и др. .Нарушение регуляции активности akt в эпителиальных базальных клетках вызывает спонтанные опухоли и повышенную чувствительность к канцерогенезу кожи. Cancer Res 2007; 67 : 10879–10888.

CAS Статья Google ученый

60

Paramio JM, Casanova ML, Segrelles C, Mittnacht S, Lane EB, Jorcano JL. Модуляция клеточной пролиферации цитокератинами К10 и К16. Mol Cell Biol 1999; 19 : 3086–3094.

CAS Статья Google ученый

61

Segrelles C, Moral M, Lorz C, Santos M, Lu J, Cascallana JL и др. . Постоянно активный akt вызывает дефекты эктодермы и нарушение передачи сигналов костных морфогенетических белков. Mol biol cell 2008; 19 : 137–149.

CAS Статья Google ученый

62

Лорц С, Сегреллес С, Гарин М, Парамио Дж. М..Выделение стволовых кератиноцитов взрослых мышей с помощью магнитной сортировки клеток (MACS). Методы в моль биол 2010; 585 : 1–11.

CAS Статья Google ученый

63

Саид А.И., Шаров В., Уайт Дж., Ли Дж., Лян В., Бхагабати Н. и др. . TM4: бесплатная система с открытым исходным кодом для управления и анализа данных микрочипов. Biotechniques 2003; 34 : 374–378.

CAS Статья Google ученый

64

Чен Р., Ли Л., Бьютт А.Дж.AILUN: автоматическое повторное аннотирование данных экспрессии генов. Природные методы 2007; 4 : 879.

CAS Статья Google ученый

65

Деннис Г., Шерман Б.Т., Хосак Д.А., Ян Дж., Гао В., Лейн HC и др. . ДЭВИД: База данных для аннотаций, визуализации и интегрированного обнаружения. Genome Biol 2003; 4 : P3.

Артикул Google ученый

66

Hosack DA, Dennis G, Sherman BT, Lane HC, Lempicki RA.Выявление биологических тем в списках генов с EASE. Genome Biol 2003; 4 : R70.

Артикул Google ученый

67

Субраманиан А., Тамайо П., Мутха В.К., Мукерджи С., Эберт Б.Л., Gillette MA и др. . Анализ обогащения набора генов: основанный на знаниях подход к интерпретации профилей экспрессии в масштабе всего генома. Proc Natl Acad Sci USA 2005; 102 : 15545–15550.

CAS Статья Google ученый

Контрольные точки клеточного цикла | Биология для майоров I

Определите и объясните важные контрольные точки, через которые проходит клетка во время клеточного цикла

Как мы только что узнали, клеточный цикл — довольно сложный процесс.Чтобы убедиться, что все идет правильно, в цикле есть контрольные точки. Давайте узнаем об этом и о том, как они помогают контролировать клеточный цикл.

Цели обучения

• Определите важные контрольные точки в делении клеток
• Объясните, как ошибки в делении клеток связаны с раком

Длина клеточного цикла сильно варьируется даже внутри клеток одного организма. У людей частота обновления клеток колеблется от нескольких часов на раннем этапе эмбрионального развития до в среднем от двух до пяти дней для эпителиальных клеток и до всей жизни человека, проведенной в G ₀ специализированными клетками, такими как корковые нейроны. или клетки сердечной мышцы.Также существует вариация времени, которое клетка проводит в каждой фазе клеточного цикла. Когда быстро делящиеся клетки млекопитающих выращивают в культуре (вне тела при оптимальных условиях роста), продолжительность цикла составляет около 24 часов. В быстро делящихся человеческих клетках с 24-часовым клеточным циклом фаза G ₁ длится примерно девять часов, фаза S длится 10 часов, фаза G ₂ длится примерно четыре с половиной часа и фаза M длится примерно полчаса.У ранних зародышей плодовых мушек клеточный цикл завершается примерно за восемь минут. Время событий клеточного цикла контролируется механизмами, которые являются как внутренними, так и внешними по отношению к клетке.

Регуляция клеточного цикла внешними событиями

И инициация, и ингибирование клеточного деления запускаются внешними по отношению к клетке событиями, когда она собирается начать процесс репликации. Событие может быть таким простым, как смерть соседней клетки, или столь же масштабным, как выброс гормонов, способствующих росту, таких как гормон роста человека (HGH).Недостаток гормона роста может подавлять деление клеток, приводя к карликовости, тогда как избыток гормона роста может привести к гигантизму. Скученность клеток также может препятствовать делению клеток. Другой фактор, который может инициировать деление клетки, — это размер клетки; по мере роста клетки она становится неэффективной из-за уменьшения отношения поверхности к объему. Решение этой проблемы — разделить.

Независимо от источника сообщения, ячейка получает сигнал, и серия событий внутри ячейки позволяет ей перейти в промежуточную фазу.Двигаясь вперед от этой начальной точки, все параметры, требуемые во время каждой фазы клеточного цикла, должны быть соблюдены, иначе цикл не может продолжаться.

Правила на внутренних контрольно-пропускных пунктах

Важно, чтобы продуцируемые дочерние клетки были точными дубликатами родительской клетки. Ошибки в дупликации или распределении хромосом приводят к мутациям, которые могут передаваться каждой новой клетке, полученной из аномальной клетки. Чтобы предотвратить дальнейшее деление скомпрометированной клетки, существуют механизмы внутреннего контроля, которые работают в трех основных контрольных точках клеточного цикла.Контрольная точка — это одна из нескольких точек в цикле эукариотической клетки, в которой переход клетки к следующей стадии цикла может быть остановлен до тех пор, пока условия не станут благоприятными. Эти контрольные точки возникают ближе к концу G ₁ , на переходе G ₂ / M и во время метафазы (рисунок 1).

Рис. 1. Клеточный цикл контролируется на трех контрольных точках. Целостность ДНК оценивается на контрольно-пропускном пункте G ₁ . Правильная дупликация хромосом оценивается на контрольной точке G ₂ .Присоединение каждой кинетохоры к волокну веретена оценивается в контрольной точке M.

G

₁ Контрольно-пропускной пункт

Контрольная точка G ₁ определяет, все ли условия благоприятны для продолжения деления клеток. Контрольная точка G ₁ , также называемая точкой ограничения (у дрожжей), представляет собой точку, в которой клетка необратимо присоединяется к процессу клеточного деления. Внешние воздействия, такие как факторы роста, играют большую роль в переносе клетки через контрольную точку G ₁ .Помимо адекватных резервов и размера клеток, на контрольно-пропускном пункте G ₁ проводится проверка на повреждение геномной ДНК. Ячейка, не отвечающая всем требованиям, не сможет перейти в фазу S. Ячейка может остановить цикл и попытаться исправить проблемное состояние, или ячейка может перейти в G ₀ и ожидать дальнейших сигналов, когда условия улучшатся.

G

₂ Контрольно-пропускной пункт

Контрольная точка G ₂ блокирует вход в митотическую фазу, если не выполняются определенные условия.На контрольной точке G ₁ оценивается размер клеток и запасы белка. Однако наиболее важная роль контрольной точки G ₂ — гарантировать, что все хромосомы реплицированы и реплицируемая ДНК не повреждена. Если механизмы контрольной точки обнаруживают проблемы с ДНК, клеточный цикл останавливается, и клетка пытается либо завершить репликацию ДНК, либо восстановить поврежденную ДНК.

Контрольно-пропускной пункт M

Контрольная точка M возникает ближе к концу метафазной стадии кариокинеза.Контрольная точка M также известна как контрольная точка веретена, потому что она определяет, все ли сестринские хроматиды правильно прикреплены к микротрубочкам веретена. Поскольку разделение сестринских хроматид во время анафазы является необратимым этапом, цикл не будет продолжаться до тех пор, пока кинетохоры каждой пары сестринских хроматид не будут прочно закреплены по крайней мере на двух веретенообразных волокнах, выходящих из противоположных полюсов клетки.

Посмотрите, что происходит в контрольных точках G ₁ , G ₂ и M, загрузив эту анимацию клеточного цикла.

Регулятор молекул клеточного цикла

В дополнение к внутренне контролируемым контрольным точкам есть две группы внутриклеточных молекул, которые регулируют клеточный цикл. Эти регуляторные молекулы либо способствуют переходу клетки к следующей фазе (положительная регуляция), либо останавливают цикл (отрицательная регуляция). Молекулы-регуляторы могут действовать индивидуально или влиять на активность или продукцию других регуляторных белков. Следовательно, отказ одного регулятора может почти не повлиять на клеточный цикл, особенно если одно и то же событие контролируется несколькими механизмами.И наоборот, действие недостаточного или нефункционирующего регулятора может быть широкомасштабным и, возможно, фатальным для клетки, если затронуты несколько процессов.

Положительная регуляция клеточного цикла

Две группы белков, называемые циклинами и циклинзависимыми киназами (Cdks), отвечают за прохождение клетки через различные контрольные точки. Уровни четырех циклиновых белков колеблются на протяжении клеточного цикла предсказуемым образом (рис. 2). Повышение концентрации циклиновых белков вызывается как внешними, так и внутренними сигналами.После того, как клетка переходит на следующую стадию клеточного цикла, циклины, которые были активны на предыдущей стадии, разлагаются.

Рис. 2. Концентрации циклиновых белков изменяются на протяжении клеточного цикла. Существует прямая корреляция между накоплением циклина и тремя основными контрольными точками клеточного цикла. Также обратите внимание на резкое снижение уровней циклина после каждой контрольной точки (переход между фазами клеточного цикла), поскольку циклин разрушается цитоплазматическими ферментами. (кредит: модификация работы «WikiMiMa» / Wikimedia Commons)

Циклины регулируют клеточный цикл только тогда, когда они прочно связаны с Cdks.Чтобы быть полностью активным, комплекс Cdk / cyclin также должен фосфорилироваться в определенных местах. Как и все киназы, Cdks представляют собой ферменты (киназы), которые фосфорилируют другие белки. Фосфорилирование активирует белок, изменяя его форму. Белки, фосфорилируемые Cdks, участвуют в продвижении клетки к следующей фазе (рис. 3). Уровни белков Cdk относительно стабильны на протяжении клеточного цикла; однако концентрации циклина колеблются и определяют, когда образуются комплексы Cdk / циклин.Различные циклины и Cdks связываются в определенных точках клеточного цикла и, таким образом, регулируют разные контрольные точки.

Рис. 3. Циклинзависимые киназы (Cdks) представляют собой протеинкиназы, которые при полной активации могут фосфорилировать и, таким образом, активировать другие белки, которые продвигают клеточный цикл мимо контрольной точки. Чтобы стать полностью активированным, Cdk должен связываться с белком циклина, а затем фосфорилироваться другой киназой.

Поскольку циклические колебания уровней циклина основаны на времени клеточного цикла, а не на конкретных событиях, регуляция клеточного цикла обычно происходит либо с помощью одних молекул Cdk, либо комплексов Cdk / циклин.Без определенной концентрации полностью активированных комплексов циклин / Cdk клеточный цикл не может проходить через контрольные точки.

Хотя циклины являются основными регуляторными молекулами, которые определяют поступательный импульс клеточного цикла, существует несколько других механизмов, которые регулируют ход цикла с отрицательными, а не положительными эффектами. Эти механизмы по существу блокируют развитие клеточного цикла до тех пор, пока не будут устранены проблемные условия. Молекулы, препятствующие полной активации Cdk, называются ингибиторами Cdk.Многие из этих молекул-ингибиторов прямо или косвенно контролируют конкретное событие клеточного цикла. Блок, помещенный на Cdks молекулами ингибитора, не будет удален до тех пор, пока не будет выполнено определенное событие, которое отслеживает ингибитор.

Отрицательная регуляция клеточного цикла

Вторая группа регуляторных молекул клеточного цикла — негативные регуляторы. Отрицательные регуляторы останавливают клеточный цикл. Помните, что при положительном регулировании активные молекулы заставляют цикл прогрессировать.

Наиболее изученными негативными регуляторными молекулами являются белок ретинобластомы (Rb), p53 и p21.Белки ретинобластомы представляют собой группу белков-супрессоров опухолей, распространенных во многих клетках. Обозначения 53 и 21 относятся к функциональным молекулярным массам белков (p) в килодальтонах. Многое из того, что известно о регуляции клеточного цикла, получено в результате исследований, проведенных с клетками, утратившими регуляторный контроль. Было обнаружено, что все три из этих регуляторных белков повреждены или нефункциональны в клетках, которые начали бесконтрольно реплицироваться (стали злокачественными). В каждом случае основной причиной неконтролируемого прохождения клеточного цикла была неправильная копия регуляторного белка.

Rb, p53 и p21 действуют в первую очередь на контрольной точке G ₁ . p53 — это многофункциональный белок, который оказывает большое влияние на приверженность клетки к делению, потому что он действует, когда в клетках, которые подвергаются подготовительным процессам во время G ₁ , есть поврежденная ДНК. Если обнаружена поврежденная ДНК, p53 останавливает клеточный цикл и привлекает ферменты для восстановления ДНК. Если ДНК не может быть восстановлена, p53 может вызвать апоптоз или самоубийство клетки, чтобы предотвратить дублирование поврежденных хромосом.По мере повышения уровня p53 запускается производство p21. p21 обеспечивает остановку цикла, диктуемого p53, путем связывания и ингибирования активности комплексов Cdk / циклин. По мере того, как клетка подвергается большему стрессу, накапливаются более высокие уровни p53 и p21, что снижает вероятность перехода клетки в S-фазу.

Rb оказывает свое регулирующее влияние на другие положительные белки-регуляторы. В основном Rb контролирует размер ячейки. В активном дефосфорилированном состоянии Rb связывается с белками, называемыми факторами транскрипции, чаще всего с E2F (рис. 4).Факторы транскрипции «включают» определенные гены, позволяя производить белки, кодируемые этим геном. Когда Rb связан с E2F, производство белков, необходимых для перехода G ₁ / S, блокируется. По мере увеличения размера клетки Rb медленно фосфорилируется, пока не станет инактивированным. Rb высвобождает E2F, который теперь может включать ген, продуцирующий переходный белок, и этот конкретный блок снимается. Чтобы клетка прошла через каждую из контрольных точек, все положительные регуляторы должны быть «включены», а все отрицательные регуляторы должны быть «выключены».”

Практический вопрос

Рис. 4. Rb останавливает клеточный цикл и освобождает его в ответ на рост клеток.

Rb и другие белки, негативно регулирующие клеточный цикл, иногда называют супрессорами опухолей. Как вы думаете, почему для этих белков подходит название «опухолевый супрессор»?

Показать ответ

Rb и другие негативные регуляторные белки контролируют деление клеток и, следовательно, предотвращают образование опухолей. Мутации, мешающие этим белкам выполнять свои функции, могут привести к раку.

Рак и клеточный цикл

Рак включает множество различных заболеваний, вызываемых общим механизмом: неконтролируемым ростом клеток. Несмотря на избыточность и перекрывающиеся уровни контроля клеточного цикла, ошибки все же возникают. Одним из критических процессов, контролируемых механизмом контроля контрольных точек клеточного цикла, является правильная репликация ДНК во время S-фазы. Даже когда все средства контроля клеточного цикла полностью функциональны, небольшой процент ошибок репликации (мутаций) передается дочерним клеткам.Если изменения в нуклеотидной последовательности ДНК происходят в кодирующей части гена и не исправляются, возникает мутация гена. Все виды рака начинаются, когда мутация гена приводит к образованию дефектного белка, который играет ключевую роль в воспроизводстве клеток. Изменение в клетке, которое является результатом неправильного белка, может быть незначительным: возможно, небольшая задержка в связывании Cdk с циклином или Rb-белком, который отделяется от своей целевой ДНК, но все еще фосфорилируется. Однако даже незначительные ошибки могут способствовать более быстрому возникновению последующих ошибок.Снова и снова небольшие неисправленные ошибки передаются от родительской клетки к дочерним клеткам и усиливаются по мере того, как каждое поколение производит больше нефункциональных белков из-за неисправленных повреждений ДНК. В конце концов, скорость клеточного цикла увеличивается, поскольку эффективность механизмов контроля и восстановления снижается. Неконтролируемый рост мутировавших клеток опережает рост нормальных клеток в этой области, что может привести к опухоли (~ oma ).

Протоонкогены

Гены, кодирующие положительные регуляторы клеточного цикла, называются протоонкогенами .Протоонкогены — это нормальные гены, которые при определенных мутациях становятся онкогенами , генами, которые приводят к тому, что клетка становится злокачественной. Подумайте, что может произойти с клеточным циклом в клетке с недавно приобретенным онкогеном. В большинстве случаев изменение последовательности ДНК приводит к менее функциональному (или нефункциональному) белку. Результат пагубен для клетки и, вероятно, помешает клетке завершить клеточный цикл; тем не менее, организм не пострадает, потому что мутация не будет перенесена.Если клетка не может воспроизводиться, мутация не распространяется и ущерб минимален. Однако иногда мутация гена вызывает изменение, которое увеличивает активность положительного регулятора. Например, мутация, которая позволяет активировать Cdk без партнерства с циклином, может подтолкнуть клеточный цикл за контрольную точку до того, как будут выполнены все необходимые условия. Если полученные дочерние клетки будут слишком повреждены, чтобы подвергнуться дальнейшим клеточным делениям, мутация не будет распространяться и организму не будет нанесен вред.Однако, если атипичные дочерние клетки способны подвергаться дальнейшим клеточным делениям, последующие поколения клеток, вероятно, будут накапливать еще больше мутаций, возможно, в дополнительных генах, регулирующих клеточный цикл.

Ген Cdk в приведенном выше примере — только один из многих генов, которые считаются протоонкогенами. Помимо белков, регулирующих клеточный цикл, любой белок, влияющий на цикл, может быть изменен таким образом, чтобы перекрыть контрольные точки клеточного цикла. Онкоген — это любой ген, изменение которого приводит к увеличению скорости развития клеточного цикла.

Гены супрессоров опухолей

Подобно протоонкогенам, многие негативные регуляторные белки клеточного цикла были обнаружены в клетках, которые стали злокачественными. Гены-супрессоры опухоли — это сегменты ДНК, которые кодируют белки-негативные регуляторы, тип регуляторов, которые при активации могут предотвращать неконтролируемое деление клетки. Коллективная функция наиболее изученных белков гена-супрессора опухолей, Rb, p53 и p21, состоит в том, чтобы создать препятствие на пути развития клеточного цикла до тех пор, пока не будут завершены определенные события.Клетка, несущая мутированную форму негативного регулятора, может быть не в состоянии остановить клеточный цикл, если возникнет проблема. Подавители опухолей похожи на тормоза в автомобиле: неисправные тормоза могут способствовать автомобильной аварии.

Мутировавшие гены р53 были идентифицированы более чем в половине всех опухолевых клеток человека. Это открытие неудивительно в свете множества ролей, которые белок p53 играет в контрольной точке G ₁ . Клетка с дефектным p53 может не обнаружить ошибки, присутствующие в геномной ДНК (рис. 5).Даже если частично функциональный p53 действительно идентифицирует мутации, он больше не может сигнализировать о необходимых ферментах репарации ДНК. В любом случае поврежденная ДНК останется неисправленной. На этом этапе функциональный p53 будет считать клетку не подлежащей спасению и запускать запрограммированную гибель клеток (апоптоз). Однако поврежденная версия p53, обнаруженная в раковых клетках, не может запускать апоптоз.

Рис. 5. Роль нормального p53 — контролировать ДНК и снабжение кислородом (гипоксия — это состояние пониженного снабжения кислородом).Если обнаружено повреждение, p53 запускает механизмы репарации. Если восстановление безуспешно, p53 сигнализирует об апоптозе. Клетка с аномальным белком p53 не может восстанавливать поврежденную ДНК и, следовательно, не может сигнализировать об апоптозе. Клетки с аномальным p53 могут стать злокачественными. (кредит: модификация работы Тьерри Сусси)

Утрата функции p53 имеет другие последствия для клеточного цикла. Мутировавший p53 может потерять способность запускать производство p21. Без адекватного уровня p21 нет эффективного блокирования активации Cdk.По сути, без полностью функционального p53 контрольная точка G ₁ серьезно нарушена, и клетка переходит прямо из G ₁ в S независимо от внутренних и внешних условий. По завершении этого укороченного клеточного цикла образуются две дочерние клетки, унаследовавшие мутировавший ген p53. Учитывая неоптимальные условия, в которых воспроизводилась родительская клетка, вполне вероятно, что дочерние клетки приобретут другие мутации в дополнение к дефектному гену-супрессору опухоли.Клетки, такие как эти дочерние клетки, быстро накапливают как онкогены, так и нефункциональные гены-супрессоры опухолей. И снова результат — рост опухоли.

В этом видео рассматривается, как рак является побочным продуктом нарушенной репликации ДНК:

Вкратце: контрольные точки клеточного цикла

Каждый этап клеточного цикла контролируется внутренними средствами контроля, называемыми контрольными точками. В клеточном цикле есть три основных контрольных точки: одна ближе к концу G ₁ , вторая на переходе G ₂ / M и третья во время метафазы.Положительные молекулы регулятора позволяют клеточному циклу перейти к следующей стадии. Отрицательные молекулы регулятора контролируют клеточные условия и могут останавливать цикл до тех пор, пока не будут выполнены определенные требования.

Рак — результат неконтролируемого деления клеток, вызванного нарушением механизмов, регулирующих клеточный цикл. Утрата контроля начинается с изменения последовательности ДНК гена, который кодирует одну из регуляторных молекул. Неправильные инструкции приводят к тому, что белок не функционирует должным образом.Любое нарушение работы системы мониторинга может привести к передаче дочерним клеткам других ошибок. Каждое последующее деление клеток приводит к появлению дочерних клеток с еще большим накопленным повреждением. В конце концов, все контрольные точки перестают функционировать, и быстро воспроизводящиеся клетки вытесняют нормальные клетки, что приводит к опухоли или лейкемии (раку крови).