Ип 6 максимальный оборот: максимальный лимит по УСН и Патенту

Ип 6 максимальный оборот: максимальный лимит по УСН и Патенту

Содержание

Компенсация за онлайн кассы рассчитывается в зависимости от годового оборота компании

Компенсация за онлайн кассы рассчитывается в зависимости от годового оборота компании

Индивидуальные предприниматели, которые работают по упрощенной декларации в Республике Казахстан и приобрели онлайн кассу до конца 2019 года, имеют право получить денежную компенсацию за кассу. ИП, работающие по упрощенке, имеют локальную систему налогообложения и не ведут бухгалтерию. Упрощенная система налогообложения обеспечивает более быструю отчетность и прозрачность после установки онлайн кассы для своих торговых точек.

 Компенсация за онлайн кассы

 

Компенсация за онлайн кассы рассчитывается в зависимости от годового оборота компании и может достигать 60 тыс. тг. ИП упрощенка для получения выплаты должна заполнить форму 911.00, что удобно сделать через личный кабинет налогоплательщика.

 

Ключевые моменты в заполнении формы:

  • п.
    4 — «дополнительный»;
  • п. 6 — отмечаем ячейку D;
  • п. 9 — предоставляем 1;
  • на пятой строке в разделе «Исчисление стоимости патента» сумму социальных отчислений следует рассчитать самостоятельно и внести в графу 911. 00. 005;
  • строка 6 запомниться автоматически.

Прочие поля для формы на компенсацию за онлайн кассу заполняются как обычно. При упрощенной декларации бухгалтерия не ведется, но все первичные документы должны храниться предпринимателем.

 

Онлайн касса для ИП по упрощенке

С января 2020 года все индивидуальные предприниматели, которые работают по упрощенной декларации, обязаны перейти на онлайн кассу. В конце 2019 года для таких бизнесменов была создана новая форма отчетности 911.00 за 2019 год путем заполнения данной формы, если условия соответствуют предъявленным законодательством, ИП упрощенка может получить, выплаты за установку онлайн кассы. Упрощенная декларация позволяет получить возмещение суммы, которая рассчитывается от годового оборота организации.

 

ИП упрощенка

Для ИП на «упрощенке» с апреля 2019 года предусмотрено увеличение порога обязательной постановке на учет по НДС. В связи с этим максимальный оборот по реализации составил 70 048 МРП по упрощенной декларации.

 

Онлайн касса при упрощенной системе налогообложения делает налоговую отчетность еще более простой и облегчает работу индивидуального предпринимателя.

Компенсацию за приобретение онлайн кассы можно получить в различных формах:

  • как переплату по налоговым позициям и потратить ее на оплату других налогов;
  • получить выплату на расчетный счет или карту.

Нельзя оплатить компрессионными выплатами социальные платежи. Такая поддержка бизнеса важна для небольших ИП на упрощенке и увеличивает охват бизнеса для вывода его из тени.

Динамика курса Доллара США к рублю по ЦБ РФ, прогноз на завтра, график изменений колебания курса Американского Доллара за неделю, месяц и за год, конвертер, котировки валюты на сегодня

Доллар США – официальная валюта Соединенных Штатов Америки. Банковский код — USD. Обозначается знаком $. 1 доллар равен 100 центам. Номиналы банкнот в обращении: 100, 50, 20, 10, 5, 2 (сравнительно редкая банкнота), 1 доллар, а также монеты 1 доллар, 50, 25, 10, 5 и 1 цент. Кроме того, существуют банкноты номиналом 500, 1 000, 5 000, 10 000 и 100 000, которые использовались ранее для взаиморасчетов в рамках Федеральной резервной системы, однако с 1945 года более не выпускаются, а с 1969 года официально выведены из обращения, так как им на смену пришла электронная система платежей. Название денежной единицы, согласно наиболее распространенной версии, происходит от средневековой монеты талер, чеканившейся в Германии.

Традиционно на лицевой стороне доллара США изображаются президенты и политические деятели Соединенных Штатов. На современных банкнотах это Бенджамин Франклин – 100 долларов, Улисс Грант – 50, Эндрю Джексон – 20, Александр Гамильтон – 10, Авраам Линкольн – 5, Томас Джефферсон – 2 и Джордж Вашингтон – 1 доллар. На оборотной стороне изображены памятники истории: 100 долларов — Индепенденс-холл, где была подписана Декларация независимости, 50 – Капитолий, 20 – Белый дом, 10 – Казначейство США, 5 – мемориал Линкольна в Вашингтоне. Банкнота в 1 доллар на обороте имеет особый рисунок, состоящий из двустороннего изображения так называемой Большой печати США, используемой для подтверждения подлинности документов, выпущенных правительством, и хранящейся в Вашингтоне.

Считается, что для противодействия печатанию фальшивых долларов дизайн необходимо менять не реже одного раза в 7-10 лет. При этом абсолютно все выпущенные банкноты США начиная с 1861 года, когда деньги были впервые эмитированы в бумажном виде, являются на территории Соединенных Штатов законным платежным средством.

Впервые решение о выпуске долларов США было принято конгрессом в 1786 году, а в 1792-м они стали основной расчетной валютой государства. С 1796 года введен принцип биметаллической денежной единицы, то есть чеканились как серебряные, так и золотые монеты. При этом каждый раз в результате изменения соотношения цен на два драгоценных металла либо одни, либо другие монеты исчезали из обращения. До 1857 года на территории США иностранные деньги (прежде всего испанские песо, а позже мексиканские доллары) также служили законным платежным средством.

В 1900 году был принят закон о золотом стандарте. К этому моменту 1 доллар соответствовал 1,50463 грамма чистого золота. В 1933 году он впервые оказался девальвирован на 41% в результате Великой депрессии. Тройская унция золота стала стоить 35 долларов.

В конце Второй мировой войны в результате Бреттон-Вудского соглашения доллар стал единственной денежной единицей, обменивавшейся на золото, при этом курсы остальных мировых валют привязывались к американской. Одновременно в послевоенные годы Соединенные Штаты сделались основным кредитором Европы. Таким образом, доллар США превратился в мировую расчетную валюту и занял свое место в резервах центральных банков.

Однако уже к 1960 году хронический дефицит бюджета США привел к тому, что количество долларов, которыми владели кредиторы по всему миру, превысило размеры золотого запаса. Усложнил ситуацию кризис 1969-70 годов. В результате в 1971-м обмен долларов на золото был окончательно прекращен после соответствующего заявления президента Ричарда Никсона.

В течение 1970-х годов курс доллара снижался. Ситуация усугубилась кризисом 1975-76 годов. В 1976 году в результате международного соглашения была создана новая – Ямайская валютная система, которая окончательно узаконила отказ от золотого обеспечения валют.

Укрепление доллара в 1980-е поставило американских производителей в невыгодное положение относительно других стран. В результате было принято решение о девальвации доллара путем урезания процентных ставок. И к 1991 году удалось фактически вдвое снизить обменный курс по отношению к японской иене, фунту и немецкой марке.

В 1992 году в результате падения британского фунта стерлингов и кризиса в Европе доллар подорожал почти на 30%, но с апреля 1993-го его котировки вновь стали снижаться — вплоть до 1998 года, когда произошло значительное ослабление доллара по отношению к японской иене — с 136 до 111 в течение трех дней. Это было связано с массовой репатриацией средств японских инвесторов в результате кризиса рынков развивающихся стран, в том числе дефолта в России.

1999-2001 годы — период нового укрепления доллара США, который был остановлен Федеральной резервной системой, снизившей процентные ставки до 2%, для того чтобы стимулировать экономику.

Наиболее важным событием для доллара стало создание в 1999 году единой европейской валюты, в которую центральные банки многих стран — кредиторов Соединенных Штатов перевели часть своих резервов.

На лето 2011 года доллар США котируется в пределах 1,40-1,46 доллара за евро, 76-78 японских иен за доллар и 1,62-64 доллара за фунт.

Несмотря на конкуренцию с евро, на сегодняшней день валюта Соединенных Штатов занимает ведущее место в резервах центральных банков. Кроме того, она остается основной расчетной валютой между странами в международной торговле, а также является базовой при расчетах через платежные системы по пластиковым картам вне зоны Европейского союза, где преобладает евро.

Доллар США – основная валюта рынка Forex. Через эту валюту проходят сделки и выставляются основные котировки.

Мнения специалистов относительно будущего доллара диаметрально противоположны. С одной стороны, многие считают, что в ближайшее время крах долларовой финансовой системы неизбежен из-за огромного внешнего долга Соединенных Штатов, самого большого в мире. На лето 2011 года он превышает 14,5 трлн долларов.

С другой – стабильность доллара базируется на высоких экономических показателях. Экономика США занимает первое место по валовому внутреннему продукту, опережая Китай, который на второй позиции, почти в два раза. Кроме того, высокому курсу доллара способствует монетарная политика Федеральной резервной системы, а также вера инвесторов, которые сохраняют свои активы в американской валюте и во время кризисов стремятся переводить их в доллары, находя в долговых инструментах США убежище от стихии рыночной экономики.

Материалы по теме: Что нужно знать о долларе США

Подборка: 32 страны с визами для цифровых кочевников

В списке представлены страны, которые принимают долгосрочных удаленных работников, цифровых кочевников или techpats (новое слово, означающее специалиста технологической сферы, работающего дистанционно). Некоторые из программ существуют давно, а некоторые разработаны специально, чтобы стимулировать туристическую отрасль. Различаются и условия. Рассмотрим их подробнее.

Грузия

Это отличный вариант для цифровых кочевников. Жители 95 стран могут въезжать в Грузию без визы и оставаться там до 365 дней.

В связи с пандемией была запущена программа Remotely From Georgia, которая позволяет обойти действующие ограничения и приезжать и работать в Грузии удаленно. Участнику программы нужно доказать, что он зарабатывает $2 тыс. в месяц, или показать банковскую выписку с $24 тыс. на счете.

Если проработать в Грузии более 183 дней, можно стать налоговым резидентом — подоходный налог составит в среднем 20%. При этом  в Грузии есть схема для индивидуальных предпринимателей, по условиям которой налогом облагается только 1% от оборота бизнеса примерно до $155 тыс. Она идеально подходит для цифровых кочевников и фрилансеров.

Это легко и быстро, не требует оформления визы, а стоимость жизни такая же низкая, как у некоторых азиатских стран, если не ниже. По данным индекса стоимости жизни Numbeo, Грузия занимает 132-е место из 138 стран.

При этом здесь удивительные культура и история. Местные горы отлично подходят для пеших прогулок и катания на лыжах, а на побережье Черного моря можно отдохнуть в жаркие летние месяцы. Кроме того, здесь великолепная еда и древнейшая винная культура.

  • Стоимость программы: бесплатно.
  • Продолжительность: 1 год, но если зарегистрировать бизнес по схеме индивидуального предпринимателя, можно получить вид на жительство.
  • Необходимый доход: $2 тыс. в месяц.
  • Индекс стоимости жизни: 132 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 26,23 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 36,86 Мбит/с.

Барбадос

Программа для цифровых кочевников носит название Barbados Welcome Stamp. Это возможность пожить на острове для тех, кто всю жизнь мечтал о Карибах.

Барбадос — хаб с хорошей транспортной доступностью, который позволяет исследовать остальную часть Карибского бассейна и Центральной Америки без каких-либо ограничений на поездки. Хотя жить здесь не так дешево, эта самая доступная страна в Карибах, которая сейчас предлагает визы для удаленной работы. А еще здесь чуть ли не самый быстрый интернет в Карибском бассейне.

  • Стоимость программы: $2 тыс. для одного человека или $3 тыс. для пары/семьи
  • Продолжительность: 1 год
  • Необходимый доход: $50 тыс. в год
  • Индекс стоимости жизни: 13 из 138
  • Скорость фиксированного интернета: 101,77 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно

Антигуа и Барбуда

Местная программа называется Antigua Nomad Digital Residence. На островах есть в общей сложности 365 различных пляжей, и благодаря этой визе можно успеть провести на каждом по 2 дня.

  • Стоимость программы: $1,5 тыс. на одного человека, $2 тыс. для пары, $3 тыс. для семьи из 3 и более человек.
  • Продолжительность: 2 года.
  • Необходимый доход: $50 тыс. в год.
  • Индекс стоимости жизни: не включена в список, кажется немного выше, чем на Барбадосе.
  • Скорость фиксированного интернета: 16,74 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 33,8 Мбит/с.

Бермудские острова

Для цифровых кочевников предусмотрена программа Work From Bermuda. Стоимость подачи заявки невысокая, и нет необходимости доказывать необходимый уровень заработной платы. Однако это самая дорогая страна в мире в плане стоимости жизни. Как и Каймановы острова, это скорее место для состоятельных людей.

  • Стоимость программы: $263.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: требуется иметь достаточно, чтобы прокормить себя, а на Бермудских островах это приличная сумма.
  • Индекс стоимости жизни: 1 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 73,6 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Каймановы острова

Само название программы Global Citizen Concierge Program подразумевает, что она предназначена только для состоятельных удаленных работников. И это отражает уровень дохода, который нужно доказать для подачи заявки. Программа явно направлена на привлечение руководителей высокого уровня, которые могут работать удаленно. Максимальная продолжительность — 2 года. При этом можно пересекать границу столько, сколько потребуется.

  • Стоимость программы: $1469.
  • Продолжительность: 2 года.
  • Необходимый доход: $100 тыс. в год для одного, $150 тыс. в год для пары, $180 тыс. в год для семьи.
  • Индекс стоимости жизни: не включена в список. Но при быстром сравнении кажется, что это примерно на 20% дешевле, чем на Бермудских островах.
  • Скорость фиксированного интернета: самая быстрая в Карибском бассейне, но дорогая. 100 Мбит/с обойдутся в $155 в месяц, 100 Мбит/с — в $255 в месяц. Скорость мобильного интернета: неизвестно.

Ангилья

Местная виза цифрового кочевника предусматривает ПЦР-тестирование и осмотр, как только человек окажется на острове. Население Ангильи составляет 15 тыс. человек, а размер острова — 26 км в длину и 5 км в ширину в самом широком месте. Для большинства это может быть слишком удаленное место, а небольшой размер означает худшую транспортную доступность. Но для кого-то это может быть привлекательным фактором.

  • Стоимость программы: $2 тыс.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: требуется подтверждение занятости.
  • Индекс стоимости жизни: не включена в опрос.
  • Скорость фиксированного интернета: 5-10 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Монтсеррат

Монтсеррат лишь немного больше Ангильи, его площадь составляет 102 кв. км, а население даже меньше — 5900 человек. Он расположен к северу от Гваделупы, и чтобы попасть сюда, нужно по-настоящему захотеть уединения. Местная программа называется Monserrat Remote Work Stamp. Скорость интернета кажется низкой, но пока оптоволоконная сеть находится в стадии разработки.

  • Стоимость программы: $500 на одного человека, $750 на семью, в которой есть до 3 иждивенцев, и $250 долларов на каждого дополнительного члена семьи.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: $70 тыс. в год.
  • Индекс стоимости жизни: не включена в опрос.
  • Скорость фиксированного интернета: 5-10 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Доминика

Содружество Доминики, расположенное в Карибском бассейне между французскими островами Гваделупа и Мартиника, запустило визу для цифровых кочевников под названием Work In Nature (WIN). Эта программа позволяет оставаться на острове до 18 месяцев. Также возможны льготы по подоходному налогу, а семьи могу отправлять детей в частные и государственные школы.

Фото в тексте: Denis Burdin / Shutterstock

В плане стоимости жизни Доминика, вероятно, будет самым дешевым вариантом проживания по визе цифрового кочевника в Карибском бассейне.

  • Стоимость программы: $100 в качестве вступительного взноса (не подлежит возврату), $800 на одного человека, $1200 на семью.
  • Продолжительность: до 18 месяцев.
  • Необходимый доход: $70 тыс. в год.
  • Индекс стоимости жизни: судя по некоторым данным, аналогично Канаде (30 из 138).
  • Скорость фиксированного интернета: 35,07 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Багамские острова

16 островов, где действует безналоговый режим, запустили программу Bahamas Extended Access Travel Stay (BEATS). Она дает право остаться на 12 месяцев, но этот срок может быть продлен до 3 лет. Жить здесь недешево, но отсюда легко добраться до Майами, а дальше — в любую точку США.

  • Стоимость программы: $25 в качестве вступительного взноса, $1 тыс. для первого заявителя и $500 для каждого иждивенца.
  • Продолжительность: 12 месяцев, может быть продлена до 36 месяцев.
  • Необходимый доход: требуется письмо от текущего работодателя или подтверждение самозанятости и получения дохода.
  • Индекс стоимости жизни: 9 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 47,08 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 29,23 Мбит/с.

Кюрасао

Кюрасао — один из Подветренных Антильских островов, который находится за пределами зоны ураганов в Карибском бассейне. Здесь можно насладиться голландским колониальным городом Виллемстад, а также прекрасными пляжами. Программа @HOME in Curaçao предусматривает первоначальное пребывание в течение 6 месяцев с возможностью продления еще на полгода.

  • Стоимость программы: $294 с человека.
  • Продолжительность: 6 месяцев с продлением еще на 6 месяцев.
  • Необходимый доход: требуется подтверждение платежеспособности.
  • Индекс стоимости жизни: аналогичный уровню США и Италии, 27 из 138
  • Скорость фиксированного интернета: около 25 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Коста-Рика

Эта страна славится своим расслабленным образом жизни, отличным серфингом, пляжами и впечатляющими видами джунглей, вулканов и водопадов. Виза, которая уже действовала до пандемии, называется Rentista. Она позволяет иностранцам оставаться в стране в течение 2 лет. Срок можно продлить.

Виза предназначена для самозанятых или предпринимателей: работать на другую компанию не разрешается.
  • Стоимость программы: $250.
  • Продолжительность: 2 года.
  • Необходимый доход: $2,5 тыс. в месяц за последние 2 года. Также можно внести депозит в $60 тыс. в банке Коста-Рики.
  • Индекс стоимости жизни: 59 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 43,77 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 36,86 Мбит/с.

Хорватия

Хорватская виза цифрового кочевника широко обсуждалась в прессе. За последние месяцы власти страны подготовили все необходимые процедуры, формы и законодательство.

Это недорогая возможность остаться в Европе и работать удаленно. Технически это не виза, а скорее временный вид на жительство. Подать заявление можно, находясь в Хорватии, а также в хорватских консульствах и посольствах.

  • Стоимость программы: от €80 до €130.
  • Продолжительность: максимум 1 год, можно продлить еще на 6 месяцев.
  • Необходимый доход: €2 232 в месяц или €26 790 за 12 месяцев пребывания. Это для одного человека, на каждого партнера/члена семьи требуется дополнительно 10%.
  • Индекс стоимости жизни: 42 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 57,15 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 74,76 Мбит/с.

Чехия

Цифровые кочевники обожают Прагу. В Чехии уже некоторое время действует виза фрилансера, и она называется Zivno. Однако получить ее непросто, так как необходимо иметь торговую лицензию для одной из перечисленных здесь профессий. Она позволяет работать в течение одного года, после чего ее можно продлить. Ограниченный перечень профессий затрудняет получение визы.

  • Стоимость программы: бесплатно.
  • Продолжительность: 1 год, но может быть продлена.
  • Необходимый доход: €5587 в банке на человека.
  • Подлежащий уплате налог: 1800 чешских крон (€70) в месяц.
  • Индекс стоимости жизни: 41 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 74,79 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 60,26 Мбит/с.

Эстония

Эстония совершила революцию, создав свою программу электронного резидентства, которая помогает иностранным предпринимателям вести свой бизнес в ЕС более рационально и с использованием цифровых подписей.

В июне 2020 года Эстония запустила годичную визу, которая позволяет оставаться в стране и работать удаленно. Это первая страна в мире, которая официально создала визу для цифровых кочевников.

  • Стоимость программы: €80 на короткий срок, €100 на длительный срок.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: €3504.
  • Индекс стоимости жизни: 59 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 81,17 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 51,67 Мбит/с.

Исландия

В Исландии действует долгосрочная виза для удаленных работников. Она действительна только в течение 6 месяцев, и если подать заявление во время пребывания в Шенгенской зоне, она распространяется только на 90 дней.

Фото в тексте: Boyloso / Shutterstock

В этой стране потрясающие пейзажи, и здесь никогда не будет скучно, независимо от времени года. В то же время это одно из самых дорогих мест по стоимости жизни, и для подачи заявки требуется продемонстрировать серьезный ежемесячный доход.
  • Стоимость программы: 7800 исландских крон (€50, $61).
  • Продолжительность: 6 месяцев.
  • Необходимый доход: 1 млн исландских крон (€6460 или $7777) для одного заявителя или 1,5 млн исландских крон (€9 690 или $11 667) для пары.
  • Индекс стоимости жизни: 4 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 180 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Германия

Виза для фрилансеров Германии называется Aufenthaltserlaubnis für selbständige Tätigkeit. По сути, это вид на жительство для иностранных фрилансеров и самозанятых, которые могут проживать в Германии до 3 лет. Чтобы ее получить, придется столкнуться с немецкой бюрократией: одобрение может занять до 4 месяцев.

  • Стоимость визы: €100.
  • Продолжительность: от 6 месяцев до 3 лет.
  • Необходимый доход: требуется доказать способность себя обеспечивать и иметь адрес в Германии.
  • Индекс стоимости жизни: 29 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 113,19 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 60,79 Мбит/с.

Норвегия

Это впечатляющая страна с высоким уровнем жизни. Здесь предусмотрена 2-летняя виза для цифровых кочевников и удаленных работников, которая называется Independent Contractor Visa. Жить в Норвегии дорого, и не каждый сможет себе это позволить.

  • Стоимость визы: €600.
  • Продолжительность: от 6 месяцев до 3 лет.
  • Необходимый доход: €35 719 и подтверждение проживания.
  • Индекс стоимости жизни: 3 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 153,51 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 107,83 Мбит/с.

Португалия

В Португалии действует виза для независимых работников и предпринимателей сроком на 1 год, но ее можно продлить до 5 лет. Через 5 лет есть возможность получить вид на жительство.

Стоимость: €83 за визу и €72 за вид на жительство.

  • Продолжительность: от 1 года до 5 лет.
  • Необходимый доход: €600 в месяц (в том числе суммарно из разных источников).
  • Индекс стоимости жизни: 50 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 139,93 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 44,78 Мбит/с.

Испания

В настоящее время в Испании действует Non-Lucrative Visa, по условиям которой технически не разрешается работать. Она больше подходит для тех, кто сам себя обеспечивает, или уже вышел на пенсию. Однако вряд ли кто-то сможет помешать вам работать удаленно.

Кроме того, сейчас Испания готовит законопроект по визам для цифровых кочевников, который получил название «Закон о стартапах» (Ley de Startups). Согласно предлагаемому закону, удаленные работники смогут получить визу, которая позволит им находиться в стране и работать в течение 12 месяцев. Срок можно будет продлить еще на 24 месяца. С первых заработанных €600 тыс. будет взиматься налог в размере 15%.

Низкая стоимость жизни в Испании, пляжи, горы и оживленные города, такие как Барселона, Мадрид и Валенсия, делают ее излюбленным местом для тех, кто работает удаленно. Технологическая сфера в Барселоне быстро развивается.

  • Стоимость визы: $140 долларов США (Non-Lucrative Visa).
  • Продолжительность: 1 год, возможно продление (Non-Lucrative Visa).
  • Необходимый доход: €2151 в месяц (Non-Lucrative Visa).
  • Индекс стоимости жизни: 39 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 169 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 46,16 Мбит/с.

Мальта

В островном государстве Мальта есть виза для цифровых кочевников, которая называется Nomad Residency Permit. Эта программа предназначена для удаленных работников не из стран ЕС и рассчитана на 1 год, после чего может быть продлена. По всей Мальте действует сеть 5G, английский считается одним из ее официальных языков, а еще здесь более 300 солнечных дней в году.

  • Стоимость визы: €300 евро, включая семью. Для удаленных работников не из стран ЕС.
  • Продолжительность: 1 год, возможно продление.
  • Необходимый доход: €2700 в месяц плюс договор аренды или покупка недвижимости.
  • Индекс стоимости жизни: 25 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 134,48 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 52,97 Мбит/с.

Дубай (ОАЭ)

В Дубае действует годичная программа для удаленных работников и цифровых кочевников. Теперь можно работать в этом мегаполисе в течение одного года и пользоваться нулевым подоходным налогом для физических лиц.

  • Стоимость визы: $287.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: €5 тыс. в месяц (за последние 3 месяца) плюс подтверждение занятости или владения компанией.
  • Индекс стоимости жизни: 36 из 138 — для ОАЭ, Дубай будет дороже.
  • Скорость фиксированного интернета: 130,99 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 183,03 Мбит/с.

Маврикий

Местная программа Premium Visa не требует сборов и подтверждения дохода. Таким образом, она подходит для многих цифровых кочевников.

Здесь можно насладиться потрясающими пляжами, джунглями и горами, а также попробовать индийские блюда с карри.

  • Стоимость визы: бесплатно.
  • Продолжительность: 1 год.
  • Необходимый доход: собственный независимый бизнес в вашем регионе или удаленная работа в компании за пределами Маврикия.
  • Индекс стоимости жизни: 52 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 21,36 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 26,18 Мбит/с.

Мексика

Благодаря пляжам, наследию майя, колониальной культуре, разнообразным ландшафтам, столице Мехико и великолепной кухне эта страна особенно любима путешественниками и цифровыми кочевниками. Среди причин и 6-месячная туристическая виза и низкая стоимость жизни. В Мексике есть виза временного резидента (Temporary Resident Visa ), которая позволяет оставаться один год и может быть продлена после этого еще на 3 года.

  • Стоимость визы: неизвестна.
  • Продолжительность: 1 год, максимум 4 года.
  • Необходимый доход: $1620 в месяц или $27 тыс. на банковском счете.
  • Индекс стоимости жизни: 104 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 44,48 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 32,06 Мбит/с.

Кабо-Верде

Архипелаг Кабо-Верде, бывшая португальская колония, состоящая из 10 островов, расположен в 570 км к западу от Африканского континента в Атлантическом океане. Здесь почти круглый год светит солнце и редко бывают осадки. В год здесь 350 солнечных дней.

Программу удаленной работы в Кабо-Верде (Remote Working Cabo Verde) не очень хорошо рекламируют. Между тем, на учатие в ней могут претендовать граждане Европы, Северной Америки, Сообщества португалоговорящих стран и Экономического сообщества Западноафриканских государств (CEDEAO).

  • Стоимость визы: визовый сбор €20, аэропортовый сбор — €34 евро.
  • Продолжительность: 6 месяцев, может быть продлена еще на 6 месяцев.
  • Необходимый доход: €1500 в месяц для отдельного лица, €2700 в месяц для семьи
  • Индекс стоимости жизни: недостаточно данных. Есть статья, в которой утверждается, что жить здесь на 21% дешевле, чем в Нидерландах и Бельгии. Стоимость жизнь аналогична Кипру и Греции.
  • Скорость фиксированного интернета: 26,42 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Сейшельские острова

Островной архипелаг включен в список благодаря  Seychelles Workcation Program. Требования кажутся очень простыми: нужно иметь действительный паспорт, предоставить документы, подтверждающие работу или владение компанией, а также подтвердить доход или состояние. Как и почти во всех других программах, понадобится медицинская и туристическая страховка.

  • Стоимость визы: €45 с человека.
  • Продолжительность: 12 месяцев.
  • Необходимый доход: неизвестно.
  • Индекс стоимости жизни: 19 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 29,08 Мбит/с, скорость мобильного интернета: неизвестно.

Тайвань

Здесь нет программы, специально предназначенной для цифровых кочевников, однако существует так называемая «Золотая карта» (Gold Card). Фактически она разрешает открыто работать на Тайване, и ее цель — привлекать таланты. Однако, даже если каких-то особенных навыков нет, но вы можете доказать ежемесячный доход в размере 160 тыс. тайваньских долларов ($5700), этого может оказаться достаточно подать заявку.

В противном случае потребуются некоторые навыки довольно высокого уровня, например, быть юристом или иметь степень доктора философии.

  • Стоимость визы: $100-310 в зависимости от гражданства и срока действия.
  • Продолжительность: без установленного окончательного срока.
  • Необходимый доход: $5700 в месяц либо наличие определенных профессиональных навыков.
  • Индекс стоимости жизни: 33 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 156,1 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 77,19 Мбит/с

Следующие страны занимаются разработкой виз для цифровых кочевников. 

Северная Македония

В связи с тем, что Хорватия широко обсуждается на международном уровне из-за цифровой визы кочевника, Северная Македония, которая тоже входила в Югославию, решила разработать аналогичную программу. Эта страна привлекает своей низкой стоимостью жизни, а также потрясающим Охридским озером.

  • Индекс стоимости жизни: 106 из 138.
  • Скорость фиксированного широкополосного интернета: 32,57 Мбит/с

Таиланд

Таиланд всегда был излюбленным местом цифровых кочевников, особенно окрестности Чиангмая и Бангкока, с низкой стоимостью жизни и высокоскоростным интернетом. Однако большинство используют 60-дневную туристическую визу, которую можно продлить еще на 30 дней (обратившись в иммиграционную службу), прежде чем им придется оформлять визу. Из-за коронавируса это стало непрактично и почти невозможно.

На днях стало известно, что Таиланд предложит 10-летние визы богатым иностранцам (в том числе пенсионерам) и цифровым кочевникам. Для их получения потребуется вложить как минимум $500 тыс. в таиландские облигации или недвижимость и доказать доход не менее $80 тыс. в год.

  • Индекс стоимости жизни: 65 из 138
  • Скорость фиксированного интернета: 220,59 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 50,00 Мбит/с

Белиз

Эту страну особенно горячо обсуждают. 17 февраля 2021 года был выпущен пресс-релиз, информирующий о программе «Работайте там, где отдыхаете» (Work where you Vacation). Ее цель — побудить туристов оставаться дольше и работать удаленно. Поскольку в Белизе существует территориальное налогообложение, это может быть интересно.

  • Индекс стоимости жизни: 53 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 37,85 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 23,47 Мбит/с.

Греция

Кто бы не хотел некоторое время поработать удаленно на одном из многочисленных греческих островов? Правительство Греции разрабатывает специальную визу для цифровых кочевников. Для переезда сюда есть еще один мощный стимул: снижение налогов на 50% в течение следующих 7 лет.

  • Индекс стоимости жизни: 37 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 33,38 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 56,39 Мбит/с.

Румыния

По сообщениям источников, Румыния, страна с самыми быстрым в Европе фиксированным широкополосным интернетом, работает над цифровой визой кочевника. В этой стране низкая стоимость жизни, и она выглядит довольно многообещающе. Необходимый ежемесячный доход здесь составляет всего €1100. О сроках и стоимости программы пока неизвестно.

  • Индекс стоимости жизни: 93 из 138
  • Скорость фиксированного интернета: 210,82 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 52,35 Мбит/с

Шри-Ланка

Жемчужина Индийского океана, Шри-Ланка, объявила о своем намерении запустить визу для цифровых кочевников. Деталей немного, но упоминается виза сроком на один год для иностранных гостей, которые могут работать удаленно. Шри-Ланка предлагает отличное сочетание пляжей, национальных парков, отличной еды и множества исторических достопримечательностей — это отличная среда для цифрового кочевника.

  • Индекс стоимости жизни: 124 из 138.
  • Скорость фиксированного интернета: 24,35 Мбит/с, скорость мобильного интернета: 13,89 Мбит/с.

Следующие страны пока не сообщали о планах разработать визы для удаленных работников. Но условия в них нравятся многим цифровым кочевникам. 

Бали

Еще одно любимое место в Юго-Восточной Азии для цифровых кочевников и любителей йоги — Бали, Индонезия. Этот остров предлагает множество коворкингов и кафе, где люди по туристическим визам работают удаленно. Это означает, что каждые 60 дней нужно было оформлять визу, чтобы продлить пребывание, другим способом было подкупить некоторых иммиграционных чиновников.

Как-то Nomad List сообщал, что в любое время в пляжной зоне Кангу работало около 5 тысяч цифровых кочевников. С COVID-19 и вводом ограничений это осталось в прошлом. Похоже, теперь здесь скорее негативно относятся к блогерам, которые остались на острове и не соблюдают местные обычаи. The Telegraph сообщало о депортации двух инфлюенсеров. Официальной программы или визы пока нет.

Вьетнам

Вьетнам — еще одно любимое место цифровых кочевников, а Хошимин — это оживленное место с низкими расходами на проживание и отличной едой. Преимущество этой страны в 3-месячных туристических визах. Вьетнамскую визу можно легко обновить, ненадолго покинув страну. Это легче, чем в Таиланде. Технически по туристической визе не разрешается работать, и при нахождении в стране более 6 месяцев придется платить налоги.

На данный момент нет никаких разговоров о предоставлении визы цифрового кочевника для более длительного пребывания.

Источник.

Фото на обложке: Evgeny Atamanenko / Shutterstock

Новости Стерлитамака :: г. Стерлитамак. Стерлитамакский портал (СТЕРЛИТАМАК.

РФ, СТР.РФ, СТЕРЛИТАМАК.РУ, СТР.РУ) :: Стерлитамак город

Раздел новости Стерлитамака. Стерлитамакские новости — это обзор самых интересных событий, происходящих в городе Стерлитамаке. Новости Стерлитамака создаются не только администраторами портала, но и любым жителем, стремящимся к тому, чтобы все в Стерлитамаке были в курсе последних новостей города. Добавляя сообщение в раздел «новости Стерлитамак», каждый из нас вносит свою лепту в то, чтобы все мы были более информированы о событиях города Стерлитамака. Ведь именно новости г.Стерлитамак интересуют нас в жизни больше всего, ведь мы хотим быть в курсе всех событий, и мы не хотим пропустить важные и интереснейшие мероприятия. Добавь новость Стерлитамака сам и расскажи о ней всем гостям и жителям города Стерлитамака.

Поиск:

Самое популярное на STR.RU


Интересное на STR.RU

Витрина Стерлитамака

Разместиться на Витрине Стерлитамака


20.09  Лэтсар КФ0,5; полиимидная плёнка и прочие ленты, плёнки закупаем по РФ
20.09  Фторопластовые втулки ф4, ф4К20 куплю по России неликвиды, невостребованные
20.09  Стержень фторопластовый ф4, ф4к20 куплю по России излишки, неликвиды
20.09  Куплю фторопласт ФУМ лента, ФУМ жгут, плёнка фторопластовая неликвиды по России
20.09  Фторопластовая труба ф4, лента ф4ПН куплю с хранения, невостребованную по РФ
20.09  Фторопластовый порошок куплю по всей России неликвиды, с хранения
20.09  Фторкаучук скф-26, 26 ОНМ, скф-32 куплю по всей России неликвиды, невостребованный
20. 09  Закупаем различную химию, фторкаучук, кальций фтористый и прочие неликвиды по РФ
20.09  Куплю кабель апвпу2г, ввгнг-ls, пвпу2г, пввнг-ls, пвкп2г, асбл, сбшв, аабл и прочий по России
20.09  Куплю провод изолированный СИП-2, СИП-3, СИП-4, СИП-5 невостребованный, неликвиды по РФ

Коэффициенты оборачиваемости и качество фондов

Оборачиваемость и качество паевого инвестиционного фонда

Оборачиваемость паевого инвестиционного фонда рассчитывается как сумма всех транзакций (покупка, продажа), деленная на два, а затем деленная на общую сумму авуаров фонда. По сути, оборот паевых инвестиционных фондов обычно измеряет замену долей во взаимном фонде и обычно представляется инвесторам как процент за период в один год . Если фонд имеет 100% оборот, это может быть истолковано, что фонд заменяет всех своих вкладов в течение 12-месячного периода (это также может указывать на то, что фонд заменял 50% своих вкладов дважды в течение года).

Вы можете обнаружить, что скорость оборачиваемости вашего паевого инвестиционного фонда намного выше, чем вы ожидали. По словам Майкла Ласке, менеджера по исследованиям Morningstar, по состоянию на 28 февраля 2019 г. средний коэффициент оборачиваемости управляемых внутренних фондов акций составляет 63%.

Имейте в виду, что аналитики обычно расходятся во мнениях по большинству вопросов. Тем не менее, важно учитывать коэффициент оборачиваемости, прежде чем принимать какие-либо новые инвестиционные решения или поддерживать текущие инвестиции.

Как и в случае с большинством технических индикаторов, величина оборота вашего паевого инвестиционного фонда не является ни лакмусовой бумажкой для принятия инвестиционного решения, ни показателем будущих результатов.Как инвестор, вы должны учитывать другие факторы в контексте оборачиваемости вашего паевого инвестиционного фонда, прежде чем принимать какое-либо обязательное или необратимое решение.

Ключевые выводы

  • Когда управляющие портфелем паевых инвестиционных фондов покупают и продают акции на рынке, чтобы изменить портфель фонда, это называется «оборотом».
  • Хотя вначале это не обязательно плохо, оборот генерирует транзакционные сборы и потенциальные налогооблагаемые события для инвесторов фонда.
  • В целом, более низкие показатели оборачиваемости средств указывают на более высокое качество, но оборачиваемость будет зависеть от типа фонда и его заявленной инвестиционной стратегии.
  • Фонды роста, как правило, имеют более высокую текучесть, поскольку они более активно инвестируют.
  • С другой стороны, индексные фонды должны иметь очень низкую скорость оборота, поскольку они торгуют только тогда, когда индекс, который они отслеживают, изменяет состав.

Фонды ценности

В общем, фонды стоимости обычно имеют более низкие показатели оборачиваемости просто из-за их инвестиционной философии: находите ценные бумаги, которые недооценены по отношению к рынку, держите их до тех пор, пока они не достигнут целевой стоимости, а затем продавайте с солидной прибылью.

По сути, это осмотрительный подход, который помогает минимизировать налогооблагаемые события и коэффициенты расходов вашего фонда.

Меньшее количество транзакций означает более низкие торговые издержки и меньший краткосрочный прирост капитала. Однако простое инвестирование в фонды с низкой оборачиваемостью на самом деле не является инвестиционной стратегией и не может служить оправданием плохой работе.

Многие инвесторы и управляющие капиталом, которые придерживались подхода «покупай и держи» с низкой оборачиваемостью, добились неутешительных результатов.Это особенно верно для тех, кто недавно увидел «ценность» в финансовых акциях. Покупка их по дешевке и удержание их в течение длительного периода могло казаться разумным в то время, но, как показано на диаграмме ниже, некоторые паевые инвестиционные фонды с низкими показателями оборачиваемости оказались хуже, чем индекс S&P 500 Index с годовой совокупной доходностью 11,48% по сравнению с пятилетним периодом. период до 28 февраля 2019 г.

Символ Название фонда Morningstar
Категория
Оборот (%) Доходность за 5 лет (%)
LEXCX Целевой фонд для руководителей корпораций Voya, серия B Большое значение 0 7.6
CVLVX Cullen Value Fund, класс I Большое значение 2 8,12
AUFFX Auxier Focus Fund Class Investor Большое значение 3 7,2
RMVIX RBC Microcap Value Fund Class I Небольшое значение 5 6,4
QRSVX Queens Road Small Cap Value Fund Небольшое значение 6 6.14
HOVLX Фонд стоимости приусадебных участков Большое значение 7 9,63
QRVLX Queens Road Value Fund Большое значение 8 8,93
VVIAX Vanguard Value Index Fund Admiral Shares Большое значение 8 9,81
SLVAX Columbia Select Фонд с большой капитализацией, класс A Большое значение 9 7.9
HRCVX Carillon Eagle Growth & Income Fund, класс A Большое значение 10 8,75
Источник: Morningstar

Фонды роста

С другой стороны, фонды роста, как правило, имеют более высокую скорость оборота, поскольку их управляющие деньгами постоянно ищут секторы и ценные бумаги, которые станут следующими лидерами в своих отраслях. Тип стратегии управления, который используют эти фонды, основан на поиске недооцененных акций, высоких продажах и максимальном использовании возможностей, что означает, что в течение любого года может быть много покупок и продаж.

Как подразумевается выше, более высокая скорость оборачиваемости означает, что фонд будет подвергаться большему количеству налогооблагаемых событий, и это, вероятно, отразится на его общей прибыли. Высокий коэффициент оборачиваемости также может указывать на то, что расходы фонда относительно высоки даже для его категории. В любом случае фонды с высоким оборотом действительно должны превосходить по стоимости фонды, если все остальное равно.

Как и в случае с денежными фондами, скорость оборачиваемости (в данном случае высокая) оправдана только при высокой доходности инвестиций.К сожалению, многие управляющие фондами, похоже, скрывают дневную торговлю. На диаграмме ниже показаны некоторые фонды с высоким оборотом и невысокой пятилетней доходностью, все из которых отстают от эталонного индекса S&P 500.

Символ Название паевого инвестиционного фонда Оборот (%) Годовая доходность за 5 лет (%)
RYWCX Rydex Small Cap Growth C 834 -8.75
RYGRX Rydex Large Cap Growth C 450 -10,59
AFUAX AFBA 5Star Cap Growth Adv 254 -7,27
AFGLX AFBA 5Star Large Cap Growth I 254 -7,05
VCGAX Пенсионный фонд AIG I Рост и доход 238 -6,97
GSXAX Aberdeen Small Cap A 215 -4.42
Источник: Morningstar

Индексные фонды

Если вы инвестируете в индексный паевой инвестиционный фонд, пассивный характер ценной бумаги, естественно, означает, что коэффициент оборачиваемости должен быть очень низким. Как следует из их названия, индексированные фонды созданы для отслеживания заданных индексов и почти не требуют практического управления. Акции добавляются или удаляются только тогда, когда базовый индекс публикует изменение.

Индексный фонд с высокой скоростью оборачиваемости не управляется должным образом.Все, что превышает 20–30%, следует рассматривать со скептицизмом или беспокойством.

Итог

Еще одним фактором, который следует учитывать инвесторам при оценке оборачиваемости паевых инвестиционных фондов, является тип инвестиционных счетов, на которых размещаются средства. Не пенсионные счета с большей вероятностью будут подвергаться налогообложению, поэтому фонды с низкой оборачиваемостью могут быть более подходящими. Пенсионные счета с отсроченным налогом (401k) или безналоговым статусом (Roth IRA) могут быть более подходящими для паевых инвестиционных фондов с высокой текучестью.В любом случае инвесторы должны поработать, чтобы определить для себя правильное сочетание.

Есть много онлайн-источников для определения скорости оборачиваемости того или иного фонда. Yahoo! Finance, Morningstar, WSJ.com и многие другие предоставляют данные об обороте паевых инвестиционных фондов почти по всем паевым инвестиционным фондам. Некоторые веб-сайты также указывают среднюю скорость оборота для категории (типа фонда).

Скорость оборачиваемости вашего паевого инвестиционного фонда на самом деле является мерой частоты транзакций. В целом, решая, покупать ли тот или иной паевой инвестиционный фонд, инвесторы должны анализировать скорость оборота в сочетании с рядом других соображений.Никакая конкретная скорость оборачиваемости средств не подходит для вашего инвестиционного портфеля; вместо этого его следует использовать как дополнительный инструмент для принятия решений.

Другие показатели, такие как соотношение расходов, нагрузка / отсутствие нагрузки, срок полномочий руководства, философия инвестирования и производительность, (по крайней мере) так же важны, как скорость текучести кадров, помогая вам принимать правильные инвестиционные решения.

Сравнить счета

Раскрытие информации рекламодателя

×

Предложения, представленные в этой таблице, поступают от партнерств, от которых Investopedia получает компенсацию.Эта компенсация может повлиять на то, как и где появляются объявления. Investopedia не включает все предложения, доступные на торговой площадке.

Число оборотов — обзор

3 ВЛИЯНИЕ ГЕОМЕТРИЧЕСКОГО РАЗМЕРА НА КАТАЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ

Если мы правильно выразим каталитическую активность через число оборотов, , то есть , активность на атом поверхности катализатора, тогда есть два типа реакции : Один, для которого число оборотов не зависит от размера частиц, и один, для которого это зависит.На рис. 5 приведены примеры, взятые из работы Ох и Эйкеля по катализаторам выхлопных газов автомобилей [17]. Активность частиц родия на оксиде алюминия в реакции связывания CO совершенно не зависит от размера частиц Rh, а зависит от активности тех же Rh-катализаторов в реакции между CO и NO с образованием CO 2 и N 2 сильно зависит от размера частиц. Таким образом, размерная зависимость является функцией реакции, а не катализатора.

Рис. 5. Активность катализаторов Rh на один поверхностный атом Rh в реакциях CO с O 2 и NO в зависимости от размера частиц.

Данные Ох и Эйкеля [17].

Другой реакцией, которая показывает зависящую от размера частиц частоту оборота, является гидрирование CO или реакция Фишера-Тропша на железных катализаторах. Юнг и др. [18] сообщили, что мелкие частицы железа в диапазоне 1 нм имеют частоту оборота для образования CH 4 порядка 0,001 / с (при 548 К), тогда как более крупные частицы с диаметром от 40 до 60 нм составляют около 50 раз активнее. Интересно, что они также обнаружили, что, хотя мелкие частицы менее активны на атом поверхности железа, они очень стабильны и не дезактивируются.

Каталитическая активность, зависящая от размера, является скорее правилом, чем исключением. Только некоторые реакции не зависят от размера частиц, например, окисление CO и несколько реакций гидрирования. Каковы причины зависимости каталитических свойств от размера частиц?

Для большинства практических каталитических систем ответ заключается в структуре каталитически активного центра, который часто представляет собой ансамбль, состоящий из нескольких атомов с определенной геометрией. Вероятность найти ансамбль на поверхности маленькой частицы быстро уменьшается с уменьшением размера, как показано в следующем примере.

Предположим, что у нас есть реакция, которая требует ансамбля из 7 атомов, расположенных как на плоскости (111) ГЦК-металла. Просто ради аргумента возьмем частицу в форме октаэдра (рис. 6) и посмотрим на атомное расположение одной из треугольных граней. Вероятность встретить каталитически активный ансамбль из семи атомов намного больше на большой частице, чем на маленькой. Небольшой октаэдр на рисунке 6 с четырьмя атомами на ребро имеет только один ансамбль на грань, более крупная частица с десятью атомами на ребро имеет 28 таких ансамблей на грань, шесть из которых могут быть активными одновременно.Подробные исследования того, как статистика участков на поверхности изменяется в зависимости от размера частиц, можно найти в прекрасном обзоре Ван Хардевельда и Хартога [19].

Рис. 6. Вероятность найти ансамбль из 7 атомов на гранях октаэдра быстро уменьшается с уменьшением размера

Существует параллель с наукой о поверхности, где изучается каталитическая активность четко определенных поверхностей монокристаллов, для которых расположение атомов известно. Реакционные системы, чувствительные к размеру частиц, почти всегда чувствительны к типу поверхности, экспонируемой при исследованиях на монокристаллах.Такие реакции называются структурно-чувствительными . Примером является синтез аммиака: число оборотов увеличивается в 35 раз при увеличении размера частиц железа с 1,5 до 30 нм [2]. Соморжай и его коллеги сообщили, что открытая поверхность Fe (111) более чем в 400 раз активнее плотноупакованной поверхности (110) при 200 атм и 800 К [20]. Причина в том, что диссоциация N 2 лучше всего протекает на группе атомов Fe с геометрией, присутствующей на открытой грани (111) ОЦК-железа.

Таким образом, чтобы вернуться к катализу на малых частицах, структурно-чувствительные реакции требуют каталитических ансамблей из нескольких атомов в заданной геометрии. Скорость структурно-чувствительных реакций зависит от размера частиц, поскольку вероятность обнаружить ансамбли из нескольких атомов на поверхности мелких частиц резко уменьшается с увеличением диаметра частиц. В результате активность, приходящаяся на один атом на поверхности, мала или становится нулевой для мелких частиц. Реакции, нечувствительные к структуре (также называемые легкими реакциями), не требуют больших ансамблей, и если им нужно больше атоинов, геометрия ансамбля некритична.Таким образом, окисление CO имеет частоту смены циклов, одинаковую для мелких и крупных частиц и даже для поверхностей монокристаллов Rh [21].

Не только активность, но также селективность и стабильность катализатора могут зависеть от размера частиц. Например, железные катализаторы при гидрировании CO или платиновые катализаторы при конверсии углеводородов деактивируют из-за образования кокса большие полиароматические структуры с низкой реакционной способностью. На мелких частицах грани поверхности меньше, чем требуется для образования этих крупных углеродистых структур, и поэтому мелкие частицы могут быть более стабильными, чем крупные частицы.

В заключение, для частиц с диаметром в диапазоне 2–10 нм влияние размера частиц на каталитические свойства легко объяснить с точки зрения вероятности того, что активный ансамбль присутствует на поверхности частицы, без какой-либо необходимости вызывают различия в электронных свойствах мелких и крупных частиц.

Что означает высокая текучесть кадров? Уровень текучести кадров, рабочие места и причины

Высокая текучесть кадров может быть как хорошо, так и плохо. Когда, например, доходит до продажной стоимости, вы хотите, чтобы ваш оборот резко вырос.Однако, когда дело касается ваших сотрудников, следует избегать высокой текучести кадров. Есть очевидные операционные трудности с поиском и наймом кого-то еще, а также дополнительная нагрузка и обязанности для остальной команды.

Но влияние высокой текучести кадров выходит за рамки операционных неудобств. Когда люди постоянно покидают организацию, это влияет на моральный дух и производительность сотрудников и, в конечном итоге, на продукты и услуги компании. Это означает, что высокая текучесть кадров тоже стоит больших денег.

Точные цифры различаются в зависимости от типа работы и страны, но исследования показывают, что их замена обходится компаниям от 6 до 9 месяцев зарплаты сотрудника. И это всего лишь прямые издержки оборота. Потому что тогда есть все, что вы потратили на обучение и адаптацию, расходы на собеседование, рекламу и т. Д.

В этой статье мы подробно рассмотрим высокую текучесть кадров. Мы обсудим показатели текучести кадров, примеры вакансий с высокой текучестью и причины.

Что внутри?
Что означает высокая текучесть кадров? Определение
Что такое высокая текучесть кадров?
Причины высокой текучести кадров
Примеры высокой текучести кадров
3 способа снижения высокой текучести
В заключении
FAQ


Что означает высокая текучесть кадров? Определение

В контексте управления персоналом (высокая) текучесть кадров относится к количеству сотрудников, покидающих организацию.В большинстве случаев этих уволенных необходимо заменить новыми сотрудниками. Текучесть кадров часто является результатом неправильных решений о найме и плохого управления.

Впереди родственный (бесплатный) ресурс! Продолжить чтение ниже ↓

Организационный Шпаргалка по метрикам разработки

Загрузите шпаргалку, которая поможет вам управлять способностями вашей организации к изменениям.

Текучка кадров происходит из-за увольнения, увольнения людей с работы, которую они считают лучшей, или из-за того, что они считают, что не могут развить свою карьеру в вашей компании.

В этой 4-минутной обучающей статье мы подробно рассмотрим текучесть кадров:
что такое высокая текучесть кадров, что движет текучестью и как ее уменьшить?

Что такое высокая текучесть кадров?

Высокая текучесть кадров означает, что многие из ваших сотрудников — больше, чем ожидается в вашей сфере деятельности — покинули организацию в течение определенного периода времени. То, что считается высокой текучестью кадров, зависит от отрасли, в которой вы работаете.В разных отраслях и странах ожидаемая текучесть кадров разная.

В Великобритании, например, профессиональная группа с самой высокой текучестью кадров сегодня — это продажи и маркетинг (31%).

Оборот по функциональным группам в Великобритании.
Источник изображения

С другой стороны, в США отраслями с самой высокой текучестью кадров являются кадры (352%) и гостиницы (300%).

Отрасли с самой высокой текучестью кадров в США на сегодняшний день.
Источник изображения

Существует множество отчетов, которые показывают среднюю текучесть кадров по отраслям (и / или странам).Итак, один очень простой способ узнать, как обстоят дела в вашей организации, — это просто проверить статистику; если ваше число (намного) выше среднего, вам, вероятно, придется иметь дело с высокой текучестью кадров.

Станьте специалистом по HR-аналитике Программа сертификации HR Analytics
Получите полный набор аналитических навыков, который позволит вам управлять
процессами принятия решений на основе данных в HR.

Загрузить программу

Чтобы сравнить ваш коэффициент текучести с отраслевым, вам нужно сначала рассчитать свой коэффициент.Это не так просто, как вы думаете. Google «как рассчитать текучесть кадров», и вы получите разные формулы. Подробное объяснение и рекомендации по измерению текучести кадров можно найти в статье «Как рассчитать текучесть кадров» от наших друзей из Analytics in HR.

Причины высокой текучести кадров

В 2000 г. три ученых объединили всю существующую литературу по текучести кадров. В результате был проведен мета-анализ более 60 000 сотрудников. Их выводы представлены на инфографике ниже (щелкните изображение, чтобы увеличить).Он показывает нам, какие переменные влияют на текучесть кадров и могут вызвать высокую текучесть кадров. Ниже мы объясним некоторые из этих переменных.

Стресс
Стресс — это причина того, что люди уходят с работы. В среде с высоким уровнем стресса текучесть кадров обычно выше, чем в условиях с меньшим стрессом.

Демография
Демографические факторы — сильные индикаторы намерений смены. Например, люди, состоящие в браке или имеющие детей, с меньшей вероятностью уйдут, чем те, кто не состоит в браке или не имеет детей.

Содержание работы
Это о том, как люди воспринимают свою работу. Элементы, которые играют здесь роль, — это уровень рутины, связанный с работой (большая рутина обычно означает более высокую текучесть кадров), и возможность повышения по службе (если кто-то знает, что может получить повышение, он с меньшей вероятностью уйдет. ).

Примеры вакансий с высокой текучестью

Поскольку мы рассмотрели некоторые причины текучести кадров, теперь мы можем выделить несколько примеров рабочих мест с высокой текучестью.Точные ставки различаются в зависимости от страны и отрасли, но вакансии с «гарантированной» высокой текучестью включают:

  • Работа в розничной торговле: Работать в розничной торговле сложно. Часто это означает, что вы будете работать сверхурочно, в том числе по вечерам и в выходные, заработная плата, как правило, низкая, и пробовали ли вы быть на ногах весь день? Это утомительно физически. Помимо этих практических аспектов, меняется и розничная торговля как таковая. Сектор превращается из обычных магазинов в электронную коммерцию, что означает меньшее количество людей на этажах.
  • Рабочие места в сфере гостеприимства: Индустрия гостеприимства очень похожа на сектор розничной торговли, когда дело касается условий работы. Часы работы ненормированные, клиенты требовательны, и многие работы в сфере гостеприимства тоже тяжелы физически.
  • Рабочие места в сфере технологий / ИТ: Это может показаться немного большим сюрпризом, но, хотите верьте, хотите нет, в ИТ довольно высокая текучесть кадров. Существует большой спрос на разработчиков программного обеспечения и часто нехватка квалифицированных специалистов, что заставляет компании требовать (слишком) многого от своих сотрудников.Другие технические вакансии, такие как дизайнеры пользовательского интерфейса и аналитики данных, также имеют высокую текучесть кадров. Согласно LinkedIn, это, вероятно, связано с тем, что работодатели и предложения становятся более конкурентоспособными.
  • Работа в сфере продаж: Если вы хороший продавец, вы можете продать все, что угодно, включая себя. Поэтому неудивительно, что продавцы обычно идут туда, где они могут заработать больше всего, что приводит к высокой текучести кадров на этом типе работы.

Другие часто называемые рабочие места с высокой текучестью кадров — это работа в сфере образования, агенты call-центра, представители службы поддержки клиентов и работники по уходу за детьми.

Люди из сферы розничной торговли, гостиничного бизнеса, информационных технологий и продаж, скорее всего, уйдут преждевременно.

3 способа снизить высокий оборот

В конце концов, мы действительно хотим знать, как снизить текучесть кадров, верно? В конце концов, именно так все становится лучше: моральный дух и производительность сотрудников, качество ваших продуктов и услуг и т. Д.

Узнайте больше о нашем новом еженедельном подкасте ↓

Но как снизить оборот? Мы перечислили 3 способа сделать это.

1. Адаптируйте свою стратегию найма

Это включает в себя так много элементов, что само по себе легко оправдывает статью. Однако, чтобы дать вам представление, я приведу несколько примеров того, как адаптация вашей стратегии найма может помочь в сокращении текучести кадров.

  • Поиск источников: Вы нацелены на правильных кандидатов в нужных местах (доски объявлений, социальные сети)? Если вы отслеживаете различные каналы поиска, которые вы используете, это должно предоставить вам информацию о том, какие каналы, как правило, предоставляют вам лучших (и худших) кандидатов.Большим преимуществом поиска в 21 веке является то, что доступно множество технологий, которые помогут вам оптимизировать ваши усилия по поиску поставщиков.
  • Объявления о вакансиях: Язык, который вы используете в объявлениях о вакансиях, определяет тип кандидатов, которые подаются. Определенные слова или способы формулировки вещей понравятся — или оттолкнут — потенциальных кандидатов. Здесь также есть отличная технология, которая поможет вам ускорить написание объявления о работе.
  • Предварительный отбор: новые сотрудники нередко уходят преждевременно из-за неудовлетворенных ожиданий относительно работы, организации или того и другого.Один из способов избежать этого — использовать инструмент оценки перед приемом на работу. Эти виды инструментов состоят из различных модулей и используют данные для прогнозирования вероятности того, что кандидат преуспеет в роли и в организации, на которую он претендует.

2. Предложить конкурентную сделку

Вы можете оптимизировать свою стратегию найма сколько угодно, если не предлагаете людям конкурентоспособный общий пакет услуг, который вы не сможете нанять или оставить себе. Это не обязательно означает, что вы должны платить самую высокую зарплату.Однако это означает предложение конкурентоспособной оплаты труда и привлекательных дополнительных видов льгот для сотрудников.

Какие это преимущества, зависит от того, что вы можете предложить. Гибкий график и (неограниченный) отпуск являются хорошими примерами, но другими преимуществами могут быть медицинская страховка, бесплатный обед, оплачиваемый отпуск по уходу за ребенком и т. Д.

Когда дело доходит до предложения людям конкурентоспособной сделки, важно, чтобы вы смотрели на человека перед вами и на то, что для них считает самым важным; для новой мамы имеет значение другое, чем для выпускницы колледжа.

3. Слушайте своих сотрудников

Конечно, это может означать многое. Но в данном случае речь идет о карьере и возможностях обучения и развития ваших сотрудников. Большинство сегодняшних соискателей и сотрудников хотели бы развиваться и развивать свои (цифровые) навыки.

Будьте честны с ними с самого начала, то есть с момента подачи заявления. Чего они могут ожидать от вас как работодателя с точки зрения карьерного роста? Есть ли возможности подняться по карьерной лестнице, и если да, то в какие сроки и при каких условиях? И что это за они от вас ожидают ?

Другой аспект здесь связан с обучением.Сотрудники все больше придают значение возможностям обучения, которые их компания предлагает (или не предлагает).

На самом деле, недавно опубликованное исследование показывает, что работники, одобряющие возможности обучения в своей компании, на 21% реже покидают свою организацию для получения новой должности за последние пять лет.

На заключительной ноте

Высокая текучесть кадров оказывает большое влияние как на ваших сотрудников, так и на вашу организацию. Хотя (естественная) текучесть кадров никогда не исчезнет полностью — что в определенной степени хорошо, — важно знать, что движет текучестью в вашей организации и, что более важно, как ее уменьшить.

FAQ

Что означает высокая текучесть кадров?

В контексте управления персоналом (высокая) текучесть кадров означает количество работников, покидающих организацию. В большинстве случаев этих уволенных необходимо заменить новыми сотрудниками. Текучесть кадров часто является результатом неправильных решений о найме и плохого управления.

Что такое высокая текучесть кадров?

Высокая текучесть кадров означает, что многие из ваших сотрудников — больше, чем ожидалось в вашей сфере деятельности — уволились из организации.То, что считается высокой текучестью кадров, зависит от отрасли, в которой вы работаете. В разных отраслях и странах ожидаемая текучесть кадров разная.

Что вызывает высокую текучесть кадров?

К факторам текучести кадров относятся стресс, демографические факторы и связанные с работой аспекты, такие как уровень рутинной работы и шансы на продвижение по службе.

Каковы примеры рабочих мест с высокой текучестью кадров?

Вакансии с высокой текучестью включают в себя работу в розничной торговле, гостиничном бизнесе, рабочие места в сфере технологий / ИТ и рабочие места в сфере продаж.

Как снизить высокую текучесть кадров?

Способы снижения высокой текучести кадров включают адаптацию стратегии найма, предложение конкурентоспособных сделок и прислушивание к мнению своих сотрудников.

Систематический анализ белкового обмена в первичных клетках

Выделение и обработка первичных клеток

Первичные гепатоциты человека, приобретенные у KaLy-Cell, хранящиеся в среде Williams E (ThermoFisher, 22551022) с добавлением 10% диализованного FBS и добавкой для поддержания первичных гепатоцитов ( ThermoFisher, CM4000), а также человеческие моноциты, B-клетки и NK-клетки, выделенные из мононуклеарных клеток периферической крови, полученные из лейкоцитов (Красный Крест Германии, Мангейм) с помощью отрицательной селекции на основе магнитных шариков (STEMCELL Technologies), и ресуспендированные в среде RPMI-1640 (ThermoFisher, 21875-034) с добавлением 10% диализованного FBS, культивировали в присутствии легких (L) аминокислот лизина и аргинина SILAC в течение ночи при 37 ° C.Затем клетки подвергали импульсной метке соответствующей средой, содержащей меченые тяжелыми (H) изотопами аминокислоты (лизин, ( 13 C 6 15 N 2 , Sigma-Aldrich, 608041) и аргинин ( 13 C 6 15 N 4 , ThermoFisher, 88434)) на указанные периоды времени (Дополнительные данные 1), промытые, гранулированные и мгновенно замороженные в жидкости N 2 . Осадки клеток лизировали в буфере, содержащем 4% SDS, и расщепляли бензоназой.

Первичная культура нейронов

Кортикальные нейрональные клетки выделяли из пренатальных эмбрионов мышей CD-1 на 15-й день эмбриона (E15). Чтобы диссоциировать ткань коры, ее мелко нарезали скальпелем с последующим перевариванием в Accutase (ThermoFisher, A1110501) в течение 12 минут. Чтобы предотвратить образование комков из-за ДНК мертвых клеток, ткань обрабатывали 250 ед. / Мкл бензоназы (Millipore, 71206-3). Нейроны осторожно растирали с помощью отполированной огнем пипетки Пастера и пропускали через сетчатый фильтр для клеток 40 мкм (BD Falcon, 352340) перед тем, как высеять их на 6-луночный планшет при плотности 1 × 10 6 клеток на лунку.Планшеты были покрыты 0,1 мг / мл поли-D-лизина (Sigma, P0899) и 2,5 мкг / мл ламинина (Sigma, 11243217001). Культуры поддерживали в нейробазальной среде (ThermoFisher, 21103), содержащей 1% пенициллин / стрептомицин (ThermoFisher, 15140122), 1% GlutaMAX (ThermoFisher, 35050) и 2% добавку B27 (ThermoFisher, 12587) при 37 ° C с 5% углерода. диоксид в инкубаторе. После посева через 1 день in vitro (DIV 1) половину среды заменяли свежей предварительно нагретой средой Neurobasal со всеми добавками (см. Выше).На DIV 4 нейроны обрабатывали 1,0 мкМ цитозинарабинозида (Tocris, 4520/50). На DIV 5 эксперименты с динамическим SILAC были начаты с замены одной пятой среды на последний 10-кратный избыток тяжелого лизина ( 13 C 6 15 N 2 , Sigma-Aldrich, 608041) и тяжелого лизина. аргинин ( 13 C 6 15 N 4 , ThermoFisher, 88434). Клетки собирали через 0, 6, 12, 24 или 36 ч после импульса, промывали PBS, включая ингибиторы протеаз (Sigma-Aldrich, CO-RO Roche), и лизировали в 50 мМ TRIS-HCl, pH7.4, с добавлением 4% SDS и бензоназы. Лизаты очищали центрифугированием при 20,000 × g при комнатной температуре с последующим измерением концентрации белка (анализ BCA, ThermoFisher, 23225). Для анализа MS использовали объем 20 мкг белка для каждой временной точки.

Все эксперименты на животных проводились под ветеринарным наблюдением и правилами Европейской лаборатории молекулярной биологии в соответствии с руководящими принципами Европейской комиссии, пересмотренной директивой 2010/63 / EU и директивами AVMA 2007.

Смеси клеток THP-1 SILAC для оценки метода

культур клеток THP-1 (ATCC TIB-202) были созданы в среде SILAC на основе RPMI и дополнены аминокислотами, меченными легкими или тяжелыми изотопами (как указано выше). Для сбора клетки промывали, осаждали и быстро замораживали в жидкости N 2 . Их лизировали 4% SDS в 50 мМ Трис-HCl pH 7,4 и ДНК расщепляли нуклеазой бензоназы (Sigma, E1014-25KU). Три независимых серии разведений (1: 1, 1: 9 и 1:49) были созданы путем смешивания 25, 5 и 1 мкл, соответственно, среды SILAC-H и SILAC-L до конечного объема 50 мкл.

Клеточная линия была проверена на заражение микоплазмами и аутентифицирована с помощью набора Promega MycoAlert.

Подготовка образца для MS

Клетки промывали PBS и супернатант полностью удаляли перед лизированием клеток в 2% SDS в течение 3 минут при 95 ° C в термомиксере (Thermo Fisher Scientific) с последующим расщеплением ДНК бензоназой. при 37 ° С в течение 1,5 ч. Лизат очищали центрифугированием и определяли концентрацию белка в супернатанте с помощью анализа BCA.Белки восстанавливали с помощью DTT и алкилировали йодацетамидом, разделяли на 4-12% NuPAGE (Invitrogen) и окрашивали коллоидным кумасси 36 перед тем, как приступить к расщеплению трипсином и масс-спектрометрическому анализу (см. Ниже). Полоски геля разрезали на три среза, покрывающих весь диапазон разделения (~ 2 см), и подвергали расщеплению в геле 4 . Пептидные экстракты дополнительно фракционировали на Ultimate3000 (Dionex, Sunnyvale, CA) с использованием обращенно-фазовой хроматографии при pH 12, колонка Xbridge 1 мм (Waters, Milford, MA), как описано ранее 37 .

Анализ ЖХ-МС / МС

Образцы сушили в вакууме и ресуспендировали в 0,05% трифторуксусной кислоте (ТФУ) в воде. 50% образца вводили в Ultimate3000 nanoRLSC (Dionex, Sunnyvale, CA), соединенный с Q-Exactive plus (Thermo Fisher Scientific). Пептиды улавливали на колонке C18 5 мм × 300 мкм (Pepmap100, 5 мкм, 300 Å, Thermo Fisher Scientific) в воде с 0,05% TFA при 60 ° C. Разделение выполняли на заказных обращенно-фазовых колонках 50 см × 100 мкМ (ID) (Reprosil) при 55 ° C.Градиентное элюирование проводили от 2% ацетонитрила до 40% ацетонитрила в 0,1% муравьиной кислоте и 3,5% ДМСО в течение 2 часов. Образцы в режиме онлайн вводили в масс-спектрометры Q-Exactive plus, работающие с зависящим от данных методом 10 лучших. Спектры МС получали с разрешением 70 000 и ионной мишенью 3 × 10 6 . Сканирование более высокой энергии столкновительной диссоциации (HCD) выполняли с 25% NCE при разрешении 17 500 (при m / z 200), а установка ионной мишени была фиксированной на 1 × 10 6 .Инструменты работали с Tune 2.3 и Xcalibur 3.0.63

Количественная оценка на основе интенсивности предшественников пептидов

Все собранные необработанные данные были обработаны с использованием модифицированной версии isobarQuant 27 , доступной в репозитории кода Github https: // github .com / protcode / isob / archive / 1.1.0.zip: дополнительную информацию о котором можно найти в руководстве пользователя (см. дополнительную информацию). Файлы конфигурации (cfg) были настроены для SILAC и обрабатывались, как описано ниже.Файл QuantMethod.cfg был снабжен новым методом количественной оценки для SILAC (silac3). Этот метод содержит информацию о массах для СВЕТЛЫХ (K + 0, R + 0), СРЕДНИХ (K + 13 C 6 , R + 13 C 6 ) и ТЯЖЕЛЫХ (K + 13 C) 6 + 15 N 2 , R + 13 C 6 + 15 N 4 ) Модификации SILAC для лизина и аргинина. Источник количественной оценки был установлен на MS1, а количество потоков, в которых запускалось программное обеспечение, было установлено в соответствии с количеством процессоров на рабочей станции.Этот предустановленный метод поставляется с пакетом isobarQuant.

Рабочий процесс до Mascot

На этапе pre-Mascot isobarQuant вся полученная информация MS1 и MS2, а также информация о приборе и времени выполнения ВЭЖХ, а также параметры сбора из исходных файлов Xcalibur были перенесены в файл в формате HDF5 (http: //www.hdfgroup.org). Ионные хроматограммы каждого события MS2 записываются в файл HDF5, а затем используются для пересчета точной массы предшественника, предоставленной Xcalibur, путем выбора массы при наивысшей интенсивности моноизотопного пика.Переназначенные родительские массы были записаны в файл в формате Mascot Generic File (MGF) вместе с соответствующими деизотопированными и деконволютированными спектрами MS2 38,39 и найдены с помощью Mascot 2.5 через Mascot Daemon версии 2.5.1 (Matrix Science, Бостон, США). MA) против выпуска Human Uniprot Proteome в октябре 2014 года, дополненного ложной версией того же самого с использованием толерантности по массе 10 ppm (частей на миллион) для пептидных предшественников и толерантности по массе 20 мДа (милли-Дальтон) для ионов фрагментов (так как высокий данные о разрешении были получены в режиме HCD на орбитальной ловушке).Карбамидометилирование остатков цистеина было выбрано как фиксированная модификация, и следующие были выбраны в качестве вариабельных модификаций: окисление метионина, ацетилирование N-концов белка, тяжелая метка SILAC 13C (6) 15N (4) на аргинине (+10,008269 Да) и Тяжелая метка SILAC 13C (6) 15 N (2) на лизине (+8,014199 Да). После завершения поиска Mascot вспомогательный скрипт Python, доступный как часть пакета isobarQuant, был вызван через опцию Actions / External Processes в Mascot Daemon для передачи файла результата (dat) с сервера Mascot на предоставленный пользователем каталог перед обработкой с использованием рабочего процесса post-Mascot isobarQuant.

Количественная оценка пептидов и расчет их интенсивности.

Рабочий процесс isobarQuant после маскота был запущен в режиме «слияния результатов» для объединения данных, полученных на нескольких этапах автономного фракционирования. Первая часть этого рабочего процесса извлекла соответствующие данные из файлов данных и сопоставила их с полученными необработанными данными с помощью идентификатора сканирования Xcalibur. После интернализации количественная оценка на основе интенсивности предшественников (MS1) проходила следующим образом:

  1. 1.

    На основании пептидной последовательности, состояния заряда и любых модификаций, не связанных с количественной оценкой (например, тяжелый аргинин SILAC), все SSM, идентифицированные Mascot из этого поиска этого исходного файла, объединяются в группы, причем SSM с наивысшей оценкой Mascot представляет каждую группу как единственная запись. Эта отдельная запись называется PCM (для пептида, состояния заряда, строки модификации)

  2. 2.

    PCM обрабатывали в порядке возрастания времени удерживания (RT). Теоретические массы изотопов были рассчитаны для каждого состояния метки. Необработанные хроматограммы экстрагированных ионов (XIC), присутствующие в пределах одноминутного окна около времени удерживания PCM, были извлечены из исходных данных для каждой массы изотопа.

  3. 3.

    Хроматографические пики в каждом XIC были обнаружены и сгруппированы для образования изотопных кластеров для каждого состояния метки.Группирование включало отображение перекрывающихся пиков, идентифицированных от каждого изотопа XIC, с пиками, идентифицированными из моноизотопного XIC. Пики считаются перекрывающимися только тогда, когда RT разброс между двумя 50% точками интенсивности пиков перекрывается. Все возможные кластеры генерируются перед удалением тех, где отсутствует первый изотоп 13 C. Кластеры изотопов также генерируются из предыдущего обзорного спектра (PS) непосредственно перед получением спектра MS2 (PCM), а также из обзорного сканирования на вершине (AS).

  4. 4.

    Согласно данному PCM, была построена точная модель интенсивностей теоретической изотопической оболочки, основанная на ее элементном составе. Это изображено на дополнительном рисунке 1A и выполняется для всех доступных этикеток (здесь: тяжелая и легкая версии PCM SILAC).

  5. 5.

    Метод наименьших квадратов был использован для поиска изотопного кластера, наиболее подходящего для точной модели из списка кандидатов в данных XIC. Это дает два значения: подобранную интенсивность, используемую для количественной оценки, и меру качества соответствия, рассчитываемую как сумму квадратов остаточных значений. Если соответствие наилучшего из кластеров XIC больше 0,1, оно сравнивается с подбором, полученным из AS и PS, и выбирается наилучший результат из трех.

  6. 6.

    Количественное значение, зарегистрированное и сохраненное в файле HDF5, представляет собой сумму теоретических интенсивностей, рассчитанных для этикетки, умноженных на подобранную интенсивность.

Для простоты понимания используемые выше PCM в остальной части рукописи называются просто пептидами.

Расчет отношения предшествующих ионов

Мы определяем «предшествующий ион» как пик, возникающий при m / z , соответствующий потере одного нейтрона из моноизотопного иона. Ожидается, что этот пик не будет присутствовать в легких пептидах и будет иметь низкую интенсивность для тяжелых пептидов, потому что он обычно является результатом неполного включения тяжелых атомов в тяжелую метку SILAC; это показано на левой панели дополнительного рисунка 1B. Если в этом месте присутствует интенсивный пик, это указывает на то, что присутствует совместно элюирующий (мешающий) кластер изотопов и что подобранная интенсивность, вероятно, будет завышена (правая панель дополнительного рисунка 1B).Мы используем термин «предшествующее ионное соотношение» для описания отношения между интенсивностью «предшествующего иона» и суммой всех подобранных интенсивностей в соответствующем изотопном кластере. Это значение было рассчитано для всех подгонок, определенных на предыдущем этапе, и его влияние на точность и точность было исследовано в ходе этого исследования.

Определение белков

Группы белков были выведены из высококачественного подмножества идентификаций пептидов, сделанных Mascot. Все пептиды должны соответствовать критерию 1% (пептид) ложных обнаружений (FDR).Кроме того, в группе должен присутствовать по крайней мере один пептид минимальной длины семь с разницей по шкале Mascot по сравнению со следующей по величине неидентичной пептидной последовательностью по крайней мере в 10 баллов. Любые группы, состоящие только из пептидов, присутствующих в других группах с более высокими общими баллами (светло-красные пептиды Mascot), удаляли, и все группы, состоящие из пептидов, полностью включенных в другие группы белков, объединяли. Эти белковые группы, имеющие общий идентификатор гена Uniprot, были объединены вместе (опция в isobarQuant).Пептиды, прошедшие границу отсечения FDR (1%), назывались уникальными, если их пептидная последовательность была идентифицирована в одной отдельной группе белков.

FDR на основе белков были рассчитаны с использованием подхода FDR с выбранным белком 40 , который был разработан, чтобы избежать переоценки количества ложноположительных (ложных) совпадений в наборе данных и включен в этот выпуск isobarQuant. Этот простой метод позволяет избежать завышения количества попаданий-ловушек в наборе данных путем «выбора» образца белка, соответствующего наивысшему баллу, когда пара (цель и ловушка одного и того же образца) идентифицирована и автоматически рассчитывается с помощью isobarQuant.

Количественное определение белка

Уникальные пептиды, определенные количественно в предыдущей части рабочего процесса и связанные с каждой группой белков, были отобраны и отфильтрованы (если не указано иное) в соответствии с настройками, указанными в соответствующем файле конфигурации (proteinquantfication.cfg): Оценка талисмана> 15, длина пептида ≥6, FDR по шкале Mascot <1%, максимальное соответствие по методу наименьших квадратов обоих пептидов в паре легкий / тяжелый ≤0,1 и максимальное предшествующее ионное соотношение обоих пептидов в паре легкий / тяжелый ≤0.2. Остальные фильтры количественной оценки в isobarQuant, относящиеся к стратегиям количественной оценки на основе MS2, не были включены (установлены на -1). Изменения кратности белка рассчитывали с использованием медианы всех допустимых количественных соотношений пептидов (подобранная интенсивность тяжелого SILAC к легкому SILAC), связанных с группой белков. Для белковых групп, где присутствовал минимум один пептид с положительным соотношением, любые пептиды с неопределенным соотношением исключались из расчета медианы. Описанные здесь параметры установлены как настройки по умолчанию в isobarQuant и были оптимизированы в ходе этого исследования (см. Результаты).

Изменения кратности белка, определенные в различные моменты времени, были извлечены из выходных данных isobarQuant и использованы для расчета периодов полураспада белка.

Сравнение isobarQuant и MaxQuant

Чтобы сравнить точность количественного определения с широко используемым программным обеспечением, мы также проанализировали смеси THP-1 SILAC как с IsobarQuant, так и с MaxQuant. Полученные данные обрабатывались с помощью MaxQuant (версия 1.5.8.0) с использованием настроек, обычно рекомендуемых для количественного анализа SILAC 22 .Поиск был выполнен в той же базе данных поиска, что и выше, с использованием карбамидометилирования цистеина в качестве фиксированной модификации и окисления метионина и ацетила (N-конец белка) в качестве изменяемых модификаций. Допуск по массе для прекурсора составлял 4,5 ppm и 20 ppm для ионов фрагмента, опция «повторного количественного определения» была включена 22 , (также был проведен отдельный анализ с отключенной опцией «повторного количественного определения»), в в разделе «Параметры, специфичные для группы» было выбрано два, причем Arg10 и Lys8 были выбраны в качестве «тяжелых меток».2}}} $$

, где k dp — константа скорости распада белка, m — количество моментов времени ( t i ) считается и r ti — кратность изменения (тяжелая / легкая) конкретного белка в каждый момент времени. Затем рассчитывается период полужизни белка ( T 1/2 ) по формуле

$$ T_ {1 {\ mathrm {/ 2}}} = \ frac {{\ log _e2}} {{k_ {\ mathrm {dp}}}} $$

Для каждого белка была подогнана линейная модель к динамике логарифмических кратных изменений белка [log e ( r ti + 1)] и коэффициент детерминации ( R 2 ) для линейной регрессии (дополнительный рисунок 1).Значение QC было установлено на «слабое», если было возможно определить кратное изменение по крайней мере в трех из четырех временных точек, «хорошее», если кратное изменение белка в трех из четырех временных точек было основано на минимальном трех количественно определенных пептидов и «плохой» для остальных.

Анализ вариабельности периода полужизни в белковых комплексах

Все белки, идентифицированные в любом из типов клеток, были сопоставлены с комплексами с использованием базы данных CORUM 41 . Комплексы фильтровали, чтобы содержать по крайней мере пять количественно определенных белковых членов в данном типе клеток, и вычисляли стандартное отклонение log 10 трансформированных периодов полураспада среди членов комплекса.Чтобы создать эталон, который указывал на вариабельность периода полужизни, как ожидалось случайно, случайные представители были взяты из списка белков, связанных с комплексами в данном типе клеток, и помещены в группы, представляющие различное количество истинных членов комплекса. Таким образом, в конечном итоге случайная группа белков, связанных с комплексом, будет иметь то же количество белков, что и исходная, истинная комплексная группа. Как и ранее, вычисляли стандартное отклонение log 10 трансформированных периодов полураспада среди этих белков в каждой группе.Различия в логарифме периодов полураспада 10 истинных членов белкового комплекса и случайных выборок белков в данном типе клеток оценивали с помощью рангового критерия Вилкоксона (уровни значимости кодировались как *** p <0,001, * * p <0,01, * p <0,05).

Картирование периодов полураспада белков на комплексных структурах белков

Для каждого типа клеток среднее время полужизни белка, рассчитанное из двух повторов, было нанесено на карту структур белкового комплекса в виде линейного трехцветного градиента.Чтобы избежать искажения градиента выбросами с исключительно высоким или низким периодом полураспада, средняя точка градиента была установлена ​​на средний период полураспада субъединиц комплекса, а нижние и верхние значения периода полураспада для линейной интерполяции были установлены на 15 и 85 процентиль соответственно. Периоды полураспада за пределами этого процентильного диапазона были обрезаны. Медиана и процентили рассчитывались как среднее значение соответственно медианы и процентили каждой биологической повторности.Для окрашивания комплекса Nup214, который представлен в структуре как сегмент с одной плотностью, состоящий из трех субъединиц, использовали средний период полужизни трех субъединиц. Все расчеты были выполнены с использованием периодов полураспада с R 2 не менее 0,25.

Доступность кода

Код isobarQuant находится в свободном доступе в репозитории кода Github: https://github.com/protcode/isob/archive/1.1.0.zip

Доступность данных

Все данные масс-спектрометрии (571 необработанное files) и соответствующие им файлы поиска Mascot были загружены в базу данных Proteomics Identifications (PRIDE) по адресу http: // www.ebi.ac.uk/pride/ и под номерами доступа PXD008511 (B-клетки), PXD008512 (гепатоциты), PXD008513 (моноциты), PXD008514 (нейроны мыши), PXD008515 (NK-клетки) и PXD008516 (клетки THP-1). . Все остальные данные доступны у соответствующих авторов по обоснованному запросу.

Модель Михаэлиса-Ментен учитывает кинетические свойства многих ферментов — биохимия

Основная функция ферментов — увеличивать скорость реакций, чтобы они были совместимы с потребностями организма.Чтобы понять, как функционируют ферменты, нам необходимо кинетическое описание их активности. Для многих ферментов скорость катализа V 0 , которая определяется как количество молей продукта, образующихся за секунду, изменяется в зависимости от концентрации субстрата [S], как показано на. Скорость катализа линейно возрастает по мере увеличения концентрации субстрата, а затем начинает выравниваться и приближается к максимуму при более высоких концентрациях субстрата. Прежде чем мы сможем точно интерпретировать этот график, нам нужно понять, как он создается.Рассмотрим фермент, который катализирует преобразование S в P следующим образом:

Рисунок 8.11

Michaelis-Menten Kinetics. График скорости реакции ( V 0 ) как функции концентрации субстрата [S] для фермента, который подчиняется кинетике Михаэлиса-Ментен, показывает, что максимальная скорость ( V max ) приближается асимптотически. Константа Михаэлиса (подробнее …)

Степень образования продукта определяется как функция времени для ряда концентраций субстрата ().Как и ожидалось, в каждом случае количество образованного продукта увеличивается со временем, хотя в конечном итоге наступает время, когда нет чистого изменения концентрации S или P. Фермент все еще активно превращает субстрат в продукт, и наоборот. , но равновесие реакции достигнуто. иллюстрирует изменения концентрации, наблюдаемые у всех участников реакции со временем до достижения равновесия.

Рисунок 8.12

Определение начальной скорости.Количество продукта, образовавшегося при различных концентрациях субстрата, отображается как функция времени. Начальная скорость ( V 0 ) для каждой концентрации субстрата определяется по наклону кривой в начале (подробнее …)

Рисунок 8.13

Изменения в концентрации участников реакции фермента- Катализированная реакция со временем. Концентрация изменяется в (A) стационарных условиях и (B) в предварительных стационарных условиях.

К кинетике ферментов легче подойти, если мы можем игнорировать обратную реакцию.Мы определяем V 0 как скорость увеличения продукта со временем, когда [P] низкое; то есть временами близкие к нулю (отсюда V 0 ) (). Таким образом, для графика в V 0 определяется для каждой концентрации субстрата путем измерения скорости образования продукта в ранние моменты времени до накопления фосфора (см.).

Мы начинаем кинетическое исследование активности ферментов с графика, показанного на. При фиксированной концентрации фермента V 0 почти линейно пропорционален [S], когда [S] мало, но почти не зависит от [S], когда [S] велик.В 1913 году Леонор Михаэлис и Мод Ментен предложили простую модель для объяснения этих кинетических характеристик. Важнейшей особенностью их лечения является то, что определенный комплекс ES является необходимым промежуточным продуктом в катализе. Предложенная модель, которая является самой простой, которая учитывает кинетические свойства многих ферментов, представляет собой

Фермент E объединяется с субстратом S с образованием комплекса ES с константой скорости k 1 . У комплекса ES есть две возможные судьбы. Он может диссоциировать на E и S с константой скорости k -1 , или он может перейти к образованию продукта P с константой скорости k 2 .Опять же, мы предполагаем, что почти ни один продукт не возвращается в исходный субстрат, условие, которое выполняется на начальной стадии реакции до того, как концентрация продукта станет заметной.

Нам нужно выражение, которое связывает скорость катализа с концентрациями субстрата и фермента и скоростью отдельных стадий. Наша отправная точка состоит в том, что каталитическая скорость равна произведению концентрации комплекса ES и k 2 .

Теперь нам нужно выразить [ES] через известные величины.Скорости образования и распада ES даны по формуле:

Для упрощения мы будем работать с предположением об установившемся состоянии . В установившемся состоянии концентрации промежуточных продуктов, в данном случае [ES], остаются неизменными, даже если концентрации исходных материалов и продуктов меняются. Это происходит, когда скорости образования и разрушения комплекса ES равны. Приравнивая правые части уравнений 11 и 12, получаем

Переставляя уравнение 13, получаем

Уравнение 14 можно упростить, определив новую константу, K M , которая называется константой Михаэлиса :

Обратите внимание, что K M имеет единицы концентрации. K M является важной характеристикой взаимодействий фермент-субстрат и не зависит от концентраций фермента и субстрата.

Подставляя уравнение 15 в уравнение 14 и решая для [ES], получаем

Теперь давайте рассмотрим числитель уравнения 16. Концентрация несоединенного субстрата [S] почти равна общей концентрации субстрата, при условии, что концентрация фермента намного ниже, чем у субстрата. Концентрация несвязанного фермента [E] равна общей концентрации фермента [E] T за вычетом концентрации комплекса ES.

Подстановка этого выражения для [E] в уравнение 16 дает

Решение уравнения 18 для [ES] дает

или

. Подставляя это выражение для [ES] в уравнение 10, мы получаем

Максимальная скорость, V max , достигается, когда каталитические центры фермента насыщены субстратом, то есть когда [ES] = [E] T . Таким образом,

Подстановка уравнения 22 в уравнение 21 дает уравнение Михаэлиса-Ментен :

Это уравнение учитывает кинетические данные, приведенные в.При очень низкой концентрации субстрата, когда [S] намного меньше K M , V 0 = ( V max / K M ) [S]; то есть скорость прямо пропорциональна концентрации субстрата. При высокой концентрации субстрата, когда [S] намного больше, чем K M , V 0 = V max ; то есть скорость максимальна, независимо от концентрации субстрата.

Значение K M очевидно из уравнения 23. Когда [S] = K M , тогда V 0 = V max /2. Таким образом, K M равно концентрации субстрата, при которой скорость реакции составляет половину ее максимального значения . K M — важная характеристика реакции, катализируемой ферментами, и важна для ее биологической функции.

Физиологические последствия K M иллюстрируются чувствительностью некоторых людей к этанолу.У таких людей наблюдается покраснение лица и учащенное сердцебиение (тахикардия) даже после приема небольшого количества алкоголя. В печени алкогольдегидрогеназа превращает этанол в ацетальдегид.

Обычно ацетальдегид, который при высоких концентрациях является причиной симптомов, превращается в ацетат ацетальдегиддегидрогеназой.

У большинства людей есть две формы ацетальдегиддегидрогеназы: митохондриальная форма с низким содержанием K M и цитозольная форма с высоким уровнем K M .У восприимчивых людей митохондриальный фермент менее активен из-за замены одной аминокислоты, а ацетальдегид обрабатывается только цитозольным ферментом. Поскольку этот фермент имеет высокий показатель K M , меньшее количество ацетальдегида превращается в ацетат; избыток ацетальдегида попадает в кровь и отвечает за физиологические эффекты.

8.4.1. Значимость

K M и V max Значения

Концептуальные идеи, стабильная ферментная кинетика

Узнайте, как кинетические параметры K M и V max могут быть определены экспериментально с помощью моделирования в лаборатории кинетики ферментов в этом модуле среды.

Константа Михаэлиса, K M , и максимальная скорость, V max , могут быть легко получены из скоростей катализа, измеренных при различных концентрациях субстрата, если фермент действует по простой схеме. приведено в уравнении 23. Получение значений K M и V max чаще всего достигается с использованием программ построения кривой на компьютере (альтернативные способы определения K см. в приложении к этой главе. M и V макс ).Значения ферментов K M варьируются в широких пределах (). Для большинства ферментов K M находится между 10 -1 и 10 -7 M. Значение K M для фермента зависит от конкретного субстрата и условий окружающей среды, таких как pH, температура. , и ионная сила. Константа Михаэлиса, K M , имеет два значения. Во-первых, K M — это концентрация субстрата, при которой заполнена половина активных центров.Таким образом, K M обеспечивает меру концентрации субстрата, необходимой для значительного катализа. Фактически, для многих ферментов экспериментальные данные свидетельствуют о том, что K M обеспечивает приблизительную концентрацию субстрата in vivo. Когда K M известен, доля заполненных сайтов, f ES , при любой концентрации субстрата может быть рассчитана из

Во-вторых, K M связана с константами скорости отдельные этапы каталитической схемы приведены в уравнении 9.В уравнении 15 K M определяется как ( k -1 + k 2 ) / k 1 . Рассмотрим предельный случай, в котором k -1 намного больше, чем k 2 . В таких условиях комплекс ES диссоциирует на E и S гораздо быстрее, чем образуется продукт. В этих условиях ( k -1 >> k 2 ),

Константа диссоциации комплекса ES равна

Другими словами, K M равна Константа диссоциации комплекса ES, если k 2 намного меньше, чем k 1 .Когда это условие выполняется, K M является мерой силы комплекса ES: высокий K M указывает на слабое связывание; низкий K M указывает на сильное связывание. Следует подчеркнуть, что K M указывает на сродство к комплексу ES только тогда, когда k -1 намного больше, чем k 2 .

Максимальная скорость, V max , показывает число оборотов фермента , что составляет количество молекул субстрата, превращенных в продукт молекулой фермента за единицу времени, когда фермент полностью насыщен субстратом. .Он равен кинетической постоянной k 2 , которая также называется k cat . Максимальная скорость, V max , показывает число оборотов фермента, если известна концентрация активных центров [E] T , потому что

и, следовательно,

. Например, раствор 10 -6 M раствора карбоангидраза катализирует образование 0,6 MH 2 CO 3 в секунду, когда она полностью насыщена субстратом. Следовательно, k 2 равно 6 × 10 5 s -1 .Этот показатель оборота — один из самых известных. Каждая катализируемая реакция происходит за время, равное 1/ k 2 , что составляет 1,7 мкс для карбоангидразы. Число оборота большинства ферментов с их физиологическими субстратами находится в диапазоне от 1 до 10 4 в секунду ().

Таблица 8.6

Максимальное число оборотов некоторых ферментов.

8.4.2. Кинетическое совершенство в ферментативном катализе:

k cat / K M Критерий

Когда концентрация субстрата намного больше, чем K M , скорость катализа равна k cat , номер оборота, как описано в Разделе 8.4.1. Однако большинство ферментов обычно не насыщаются субстратом. В физиологических условиях соотношение [S] / K M обычно составляет от 0,01 до 1,0. Когда [S] << K M , ферментативная скорость намного меньше, чем k cat , потому что большая часть активных центров не занята. Есть ли число, которое характеризует кинетику фермента в этих более типичных клеточных условиях? Действительно, существует, как можно показать, объединив уравнения 10 и 16, чтобы получить

Когда [S] << K M , концентрация свободного фермента, [E], почти равна общей концентрации фермента. [E T ], поэтому

Таким образом, когда [S] << K M , скорость фермента зависит от значений k cat / K M , [S] и [E] T .В этих условиях k cat / K M является константой скорости взаимодействия S и E и может использоваться в качестве меры каталитической эффективности. Например, используя значения k cat / K M , можно сравнить предпочтение фермента для разных субстратов. показаны значения k cat / K M для нескольких различных субстратов химотрипсина (раздел 9.1.1).Химотрипсин явно предпочитает расщепление рядом с объемными гидрофобными боковыми цепями.

Таблица 8.7

Субстратные предпочтения химотрипсина.

Насколько эффективным может быть фермент? Мы можем подойти к этому вопросу, определив, существуют ли какие-либо физические ограничения на значение k cat / K M . Обратите внимание, что это соотношение зависит от k 1 , k -1 и k cat , как можно показать, заменив K M .

Предположим, что скорость образования продукта ( k cat ) намного выше, чем скорость диссоциации комплекса ES ( k -1 ). Тогда значение k cat / K M приближается к k 1 . Таким образом, конечный предел значения k cat / K M установлен на k 1 , скорость образования комплекса ES. Эта скорость не может быть выше, чем контролируемая диффузией встреча фермента и его субстрата . Распространение ограничивает значение k 1 , так что оно не может быть выше, чем между 10 8 и 10 9 с -1 M -1 . Следовательно, верхний предел для k cat / K M находится между 10 8 и 10 9 s -1 M -1 .

k cat / K M Соотношение ферментов супероксиддисмутазы, ацетилхолинэстеразы и триозофосфат-изомеразы составляет от 10 8 до 10 9 с -1 M .Такие ферменты, которые имеют отношения k cat / K M в верхних пределах, достигли кинетического совершенства . Их каталитическая скорость ограничена только скоростью, с которой они сталкиваются с субстратом в растворе (). Дальнейшее увеличение каталитической скорости может быть достигнуто только за счет уменьшения времени диффузии. Помните, что активный центр — это лишь небольшая часть общей структуры фермента. Тем не менее, для каталитически совершенных ферментов каждое столкновение между ферментом и субстратом является продуктивным.В этих случаях на фермент могут действовать электростатические силы притяжения, которые притягивают субстрат к активному центру. Эти силы иногда поэтически называют , эффекты Цирцеи .

Эффект Цирцеи —

Использование сил притяжения для привлечения субстрата к участку, в котором он претерпевает структурную трансформацию, как определил Уильям П. Дженкс, энзимолог, придумавший термин.

Богиня греческой мифологии, Цирцея заманила мужчин Одиссея в свой дом, а затем превратила их в свиней.

Таблица 8.8

Ферменты, для которых k cat / K M близок к контролируемой диффузией скорости встречи.

Предел, налагаемый скоростью диффузии в растворе, также может быть частично преодолен путем заключения субстратов и продуктов в ограниченный объем мультиферментного комплекса. Действительно, некоторые серии ферментов связаны в организованные сборки (раздел 17.1.9), так что продукт одного фермента очень быстро обнаруживается другим ферментом.Фактически, продукты передаются от одного фермента к другому, как на конвейере.

8.4.3. Большинство биохимических реакций включает несколько субстратов

Большинство реакций в биологических системах обычно включают два субстрата и два продукта и могут быть представлены реакцией бисубстрата:

Большинство таких реакций влечет за собой перенос функциональной группы, такой как фосфорил или аммониевая группа, от одного субстрата к другому. В окислительно-восстановительных реакциях электроны переносятся между субстратами.Множественные реакции субстрата можно разделить на два класса: последовательное смещение и двойное смещение .

Последовательное смещение

В последовательном механизме все субстраты должны связываться с ферментом до того, как будет выпущен какой-либо продукт. Следовательно, в реакции бисубстрата образуется тройной комплекс , фермента и обоих субстратов. Последовательные механизмы бывают двух типов: упорядоченные, при которых субстраты связывают фермент в определенной последовательности, и случайные.

Многие ферменты, которые имеют NAD + или NADH в качестве субстрата, демонстрируют последовательный упорядоченный механизм. Рассмотрим лактатдегидрогеназу, важный фермент метаболизма глюкозы (раздел 16.1.9). Этот фермент восстанавливает пируват до лактата, окисляя НАДН до НАД + .

В упорядоченном последовательном механизме кофермент всегда связывается первым, а лактат всегда высвобождается первым. Эта последовательность может быть представлена ​​следующим образом в обозначениях, разработанных У. Уоллесом Клеландом:

Фермент существует в виде тройного комплекса: сначала он состоит из фермента и субстратов, а после катализа — фермента и продуктов.

В случайном последовательном механизме порядок добавления субстратов и выпуска продуктов является случайным. Последовательные случайные реакции иллюстрируются образованием фосфокреатина и АДФ из АТФ и креатина, реакцией, катализируемой креатинкиназой (раздел 14.1.5).

Фосфокреатин — важный источник энергии в мышцах. Последовательные случайные реакции также могут быть изображены в нотации Клеланда.

Хотя порядок некоторых событий случайный, реакция все же проходит через тройные комплексы, включая сначала субстраты, а затем продукты.

Реакции двойного вытеснения (пинг-понг)

В реакциях двойного вытеснения или пинг-понга один или несколько продуктов высвобождаются до того, как все субстраты свяжут фермент. Определяющей особенностью реакций двойного замещения является наличие замещенного промежуточного фермента , в котором фермент временно модифицирован. Реакции, которые перемещают аминогруппы между аминокислотами и α-кетокислотами, являются классическими примерами механизмов двойного замещения. Фермент аспартатаминотрансфераза (Раздел 23.3.1) катализирует перенос аминогруппы от аспартата к α-кетоглутарату.

Последовательность событий можно изобразить в виде следующей диаграммы.

После связывания аспартата с ферментом фермент удаляет аминогруппу аспартата с образованием замещенного промежуточного фермента. Впоследствии уходит первый продукт, оксалоацетат. Второй субстрат, α-кетоглутарат, связывается с ферментом, принимает аминогруппу из модифицированного фермента и затем высвобождается в виде конечного продукта, глутамата.В обозначениях Клеланда субстраты, кажется, отскакивают от фермента аналогично тому, как мяч для пинг-понга подпрыгивает на столе.

8.4.4. Аллостерические ферменты не подчиняются кинетике Михаэлиса-Ментен

Модель Михаэлиса-Ментен в значительной степени способствовала развитию химии ферментов. Его достоинства — простота и широкая применимость. Однако модель Михаэлиса-Ментен не может объяснить кинетические свойства многих ферментов. Важная группа ферментов, которые не подчиняются кинетике Михаэлиса-Ментен, включает аллостерических ферментов .Эти ферменты состоят из множества субъединиц и множества активных центров.

Аллостерические ферменты часто отображают сигмоидальные графики () скорости реакции V 0 в зависимости от концентрации субстрата [S], а не гиперболические графики, предсказанные уравнением Михаэлиса-Ментен (уравнение 23). В аллостерических ферментах связывание субстрата с одним активным центром может влиять на свойства других активных центров в той же молекуле фермента. Возможный результат этого взаимодействия между субъединицами состоит в том, что связывание субстрата становится кооперативным; , то есть связывание субстрата с одним активным сайтом фермента облегчает связывание субстрата с другими активными сайтами.Как будет рассмотрено в главе 10, такая кооперативность приводит к сигмоидальному графику V 0 в зависимости от [S]. Кроме того, активность аллостерического фермента может быть изменена регуляторными молекулами, которые обратимо связаны со специфическими сайтами, отличными от каталитических сайтов. Таким образом, каталитические свойства аллостерических ферментов можно отрегулировать для удовлетворения насущных потребностей клетки (глава 10). По этой причине аллостерические ферменты являются ключевыми регуляторами метаболических путей в клетке.

Рис. 8.14

Кинетика аллостерического фермента. Аллостерические ферменты демонстрируют сигмоидальную зависимость скорости реакции от концентрации субстрата.

Машинное обучение, примененное к числам оборота ферментов, выявляет структурные корреляты белков и улучшает метаболические модели

Расчет состояний потока с использованием экономичного FBA

Мы вычисляем экономичный FBA 27 растворов для i ML1515, GEM E. coli K -12 MG1655 26 .Задачи линейного программирования были построены с использованием пакетов sybil 46 и sybilccFBA 47 R 45 , а проблемы были решены с использованием IBM CPLEX версии 12.7. Одна итерация этого алгоритма отбора проб выполняется следующим образом: поглощение кислорода было разрешено с вероятностью 1/2, и окружающая среда всегда содержала по крайней мере один случайно выбранный источник каждого углерода, азота, серы и фосфата. Несколько дополнительных источников для каждого элемента были взяты из бинома размера 2 с вероятностью успеха 1/2.Скорости поглощения углерода были нормированы на количество атомов углерода в выбранных подложках. Этот процесс повторяли до тех пор, пока не была найдена среда, поддерживающая рост, и не было записано распределение потока, завершая итерацию. Используя этот алгоритм, мы смоделировали 10 000 сред и усреднили эти распределения потоков по средам, чтобы получить характеристику потока.

Расчет состояний потока с ограничениями MFA

В качестве альтернативы отбору проб с использованием экономичного FBA были использованы экспериментальные данные по метаболическому потоку, полученные из анализа метаболического потока (MFA) (представлены на дополнительном рисунке 5). 2 \: {\ rm s.т.} $$

(1)

$$ {\ mathbf {Sv}} _ {{\ mathrm {FBA}}} = 0 $$

$$ v _ {{\ mathrm {lb}}, i}

Для каждого условия корреляция Пирсона между оцененными MFA и вычисленными FBA потоками была больше 0,99, что указывает на общее соответствие между моделью, используемой для оценки потоков MFA, и i ML1515.

Затем измеренные потоки были ограничены их значениями, оптимизированными для QP, и FBA снова был запущен с целью максимизации ATP (называемой реакцией поддержания ATP или ATPM) 49 путем решения задачи линейного программирования (LP):

$ $ {\ mathrm {Max}} \, v _ {\ mathrm {ATPM}} \: \ rm s.\ ast $$

, где v lb * и v ub * — стандартные границы потока, дополненные значениями, оптимизированными для QP из уравнения. (1).

Наконец, целевая реакция производства АТФ была установлена ​​на расчетное оптимальное значение, а общий поток был минимизирован с учетом всех предыдущих ограничений в качестве цели экономии, основанной на идее, что клетка обычно не будет переносить большие количества ненужного потока из-за стоимость поддержания необходимого уровня ферментов 50 .\ # $$

, где v lb # и v ub # — те же ограничения потока, которые используются в задаче, определенной в уравнении. (2), но теперь дополнено ограничением на оптимальное значение v ATPM , определенное в формуле. (2).

Окончательные решения для потоков показывают хорошее согласие с оцененными MFA состояниями потоков, включая измеренные скорости роста, при максимальном производстве АТФ и сохранении экономии в качестве второстепенных целей.Среднее значение окончательных решений потока в восьми условиях роста использовалось в качестве характеристики потока для анализа чувствительности, показанного на дополнительном рисунке 5. Задачи были созданы с помощью набора инструментов COBRA версии 2.0 в Matlab 2016b и решены с помощью решателей Gurobi 8.0.1.

Универсальное свойство

На основе соотношений GPR, предоставленных i ML1515, мы используем максимальное количество раз, когда генные продукты, катализирующие данную реакцию, используются в других реакциях, чтобы количественно оценить универсальный признак.Количество субстратов для данной реакции было извлечено из стехиометрической матрицы ML1515, исключая воду и протоны.

Расчеты свойств последовательности и структуры белка

Для сбора специфичных для белка свойств были рассчитаны общие свойства каталитических ферментов и локальные свойства их активных центров с использованием пакета ssbio Python 51 . Во-первых, модельные реакции в i ML1515 были сопоставлены с их белковыми последовательностями и трехмерными структурами на основе сохраненных правил GPR.Это было сделано с использованием службы картирования UniProt, позволяющей картировать идентификаторы локусов генов (например, b0008) в соответствующие записи последовательностей белка UniProt (например, P0A870) и аннотированные признаки последовательности 52 . Затем идентификаторы UniProt были сопоставлены со структурами как в Protein Data Bank , 29, , так и в моделях гомологии из конвейера моделирования I-TASSER 31 . Затем эти структуры были оценены и ранжированы 53 , чтобы выбрать единственную репрезентативную структуру на основе параметров разрешения и покрытия последовательности.Для случаев, когда были доступны только структуры PDB, API лучших структур PDBe запрашивался на предмет структуры с наивысшей оценкой. Если не более 10% концов отсутствовало вместе с отсутствием вставок и только точечными мутациями в ядре последовательности, структура считалась репрезентативной. В противном случае модель гомологии была выбрана по проценту идентичности последовательностей или поставлена ​​в очередь для моделирования 53 . Важно отметить, что протокол выбора структуры приводит к получению конечной структуры, которая является мономерной, и, таким образом, параметры, на которые может повлиять образование четвертичного комплекса, в настоящее время не рассматриваются.Это ограничение как экспериментальных данных, так и методов моделирования, так как сложные структуры по-прежнему сложно прогнозировать. Кроме того, для глобальных и локальных расчетов (описанных ниже) все небелковые молекулы (т.е. молекулы воды, простетические группы) были удалены перед вычислением описанной характеристики. Из 1515 белков в расчетах свойств использовались 729 экспериментальных белковых структур и 784 модели гомологии. Наконец, мы добавили аннотированные местоположения активных сайтов из базы данных Catalytic Site Atlas SQL 32 для любого совпадающего идентификатора PDB в анализе.

Глобальные свойства белка были классифицированы как свойства, которые были получены из всей последовательности или структуры белка (например, процент неупорядоченных остатков), а локальные свойства были такими, которые описывали аннотированный каталитический сайт (например, средняя глубина активного сайта от поверхности). На основе последовательности белка были рассчитаны общие свойства с использованием пакета EMBOSS pepstats 54 и модуля Biopython ProtParam 55 . Локальные свойства вторичной структуры и доступность растворителя были предсказаны на основе последовательности с использованием набора инструментов SCRATCH 56 и дополнительно рассчитаны на основе набора репрезентативных структур с использованием DSSP 57 и MSMS 58 .Прогнозируемая гидрофобность аминокислот была рассчитана с использованием шкалы Кайт-Дулиттла для гидрофобности со скользящим окном из семи аминокислот 59 . Полный список полученных свойств см. В дополнительной таблице 2.

Биохимические характеристики

Номера ЕС реакций были получены из базы данных Bigg 60 и дополнены дополнительными данными по номерам ЕС из KEGG 61 и MetanetX 62 , где доступный.

Для оценки энергии Гиббса реакции, данные метаболитов для восьми условий роста для E.coli был получен из литературы 48 . Константы равновесия реакции ( К, экв. с) оценивали с использованием последнего метода группового вклада 63 . Затем была решена термодинамическая задача FBA 64 , ограничивающая только реакции с высоким потоком (> 0,1 ммоль / гДВт / ч) с учетом неопределенности. После определения возможного набора потоков, концентраций метаболитов ( x ) и K eq s, выпуклая выборка использовалась для получения распределения x и K eq значений, которые учитывают измерения. пробелы и неопределенность.{S_i} $$

, где Q — коэффициент реакции, определяемый как произведение концентраций (или активностей) метаболитов на степень их стехиометрического коэффициента в реакции ( S ). Параметр термодинамической эффективности η об. , используемый в этом исследовании, был затем рассчитан на основе этого Δ G с использованием его определения 65:

$$ \ eta _ {\ mathrm {rev}} = 1 — {\ mathrm {exp}} \ left ({\ Delta G / {\ rm RT}} \ right) = 1 — Q / K _ {\ mathrm {eq}} $$

Обратите внимание, что это выражение ограничено между 0 и 1 для реакций в прямом направлении ( η об. равно 0 в состоянии равновесия и 1 при идеальной эффективности вперед).Для согласованности мы рассматривали каждую реакцию как стехиометрию прямого направления для этого расчета. Среднее значение η об. по восьми условиям роста использовалось в качестве входной характеристики модели.

константы Михаэлиса ( K м с) были извлечены из ресурсов BRENDA 33 и Uniprot 52 и обработаны вручную. Когда существует несколько значений для одной и той же константы, условия, подобные in vivo, недавность исследования и совпадение значений использовались в качестве критериев для выбора наилучшего значения.

Средние концентрации метаболитов по восьми упомянутым выше условиям роста 48 использовались как характеристики для концентраций субстрата и продукта.

Обобщение данных по генам

Мы суммировали все характеристики и результаты на уровне реакции, как указано в метаболическом представлении метаболической сети E. coli i ML1515. В случае структурных признаков, которые были получены на уровне генов, мы использовали связи GPR, предоставленные моделью, чтобы суммировать признаки.Подробности перечислены в дополнительной таблице 1.

Линеаризация

Элементы и выходы были преобразованы для поддержки линейных отношений между элементами и выходами. Поток, молекулярная масса фермента, K m , концентрации метаболитов, k cat in vitro и k app, max были преобразованы логарифмически. Обратная величина температуры использовалась в соответствии с соотношением Аррениуса.

Imputation

Набор признаков не содержит данных обо всех характеристиках для всех реакций в i ML1515 (см. Дополнительный рисунок 2).Чтобы сделать возможным прогнозирование GEM, мы используем различные стратегии вменения: вменение помеченных данных, т. Е. Данных, которые связаны только с выходными данными, вменение только немаркированных данных, вменение как помеченных, так и немаркированных данных и отсутствие вменения. Недостающие наблюдения были вменены с использованием прогнозирующего среднего сопоставления для непрерывных данных, логистической регрессии для двоичных данных и политомической регрессии для категориальных данных более чем двух категорий (подробности см. В дополнительной таблице 1). Эта процедура была реализована с использованием пакета мышей в среде R 45,66 .Выходные данные не использовались для условного исчисления, чтобы предотвратить оптимистическую ошибку в оценках ошибок.

Данные по

к cat in vitro

Мы извлекли in vitro k cat значений ферментов, присутствующих в модели E.coli K-12 MG1655 i ML1515 модели BRENDA 33 , Sabio 34 и Metacyc 35 баз данных. Всего было загружено 6812 k значений cat на основе номеров ЕС.Мы удалили избыточные точки данных, возникшие в результате одного и того же эксперимента в одной публикации в разных базах данных. При удалении избыточных данных мы отдали предпочтение BRENDA и базе данных Metacyc именно в таком порядке. Затем мы удалили все данные, явно относящиеся к мутировавшим ферментам.

Основная проблема при использовании данных из этих трех баз данных заключается в том, что многие значения k cat были измерены в присутствии неестественных субстратов, которые вряд ли возникнут в физиологических условиях.Мы используем модель i ML1515 в качестве ресурса для естественных метаболических реакций. Чтобы использовать этот список в качестве фильтра, мы сопоставили реакции из наших тщательно подобранных наборов данных с реакциями модели. Это отображение реакции было реализовано с использованием списков синонимов субстратов, предоставленных ресурсом MetRxn 67 . Шестьсот шестьдесят четыре записи в базе данных не содержали полных формул реакций, и мы сопоставили их на основе чисел EC и информации о субстрате. Мы вручную проверили все записи в наборе данных Metacyc с ключевым словом «ингибитор» в примечаниях к экспериментам и опустили данные, которые были измерены в присутствии ингибиторов.Наконец, в случаях, когда было доступно несколько литературных источников, мы вручную отбирали источники, отдавая предпочтение условиям, подобным in vivo, давности исследования и согласованности между значениями, дополнительно используя данные из ресурса Uniprot Resource 52 . В итоге у нас осталось 497 используемых значений k cat in vitro, которые охватывают 412 метаболических реакций.

Перекрестная проверка и настройка гиперпараметров

Статистические модели скорости текучести были обучены с использованием пакета Caret 68 и, в случае нейронных сетей, пакета h3o 69 .Гиперпараметры модели были оптимизированы путем выбора набора, который минимизирует перекрестную проверку RMSE при пятикратном повторении (одно повторение в случае нейронных сетей) 5-кратной перекрестной проверке. В случае нейронных сетей гиперпараметры были оптимизированы с использованием 3000 итераций случайного дискретного поиска и 5-кратной перекрестной проверки. Подробные сведения о реализации и диапазонах гиперпараметров приведены в дополнительной таблице 2.

Прогнозирование изобилия белков с помощью механистической модели

Чтобы проверить способность различных векторов скорости каталитического оборота объяснять количественные данные о белках, распределение протеома было предсказано с использованием алгоритма MOMENT. .Мы рассчитываем решения MOMENT для i ML1515 с использованием показателей текучести, полученных из соответствующего источника данных или модели машинного обучения. В случае мембранных белков, которые не входили в объем модели ML, использовалось значение по умолчанию 65 с -1 . Задачи линейного программирования были построены с использованием пакетов sybil 46 и sybilccFBA 47 R 45 , а проблемы были решены с использованием IBM CPLEX версии 12.7. Молекулярные массы ферментов рассчитывались на основе E.coli K-12 MG1655 (эталонная последовательность NCBI NC_000913.3), а общий вес метаболического протеома был установлен на 0,32 г белка / г DW в соответствии с фракцией метаболического белка E. coli в различных условиях роста 5,44 . Аэробный рост на каждом субстрате в Schmidt et al. 37 моделировали, устанавливая нижнюю границу, соответствующую поглощению субстрата и кислорода, равной -1000 ммоль gDW -1 ч -1 , эффективно оставляя скорость поглощения неограниченной.

В дополнение к MOMENT, GEM метаболизма и экспрессии генов (модель ME) 8,9 применялся для проверки предсказанных скоростей оборота ферментов. Для этих симуляций использовалась ME-модель i JL1678b E. coli K-12 MG1655 70 . Как и в прогнозах MOMENT, значение по умолчанию 65 с -1 использовалось для k eff с мембранных белков и аэробного роста на каждом субстрате в Schmidt et al. 37 моделировали, устанавливая нижнюю границу, соответствующую поглощению субстрата и кислорода, равной -1000 ммоль gDW 1 h 1 , эффективно оставляя поглощение неограниченным. k eff s для всех процессов в i JL1678b-ME, которые выходили за рамки i ML1515, также были установлены на 65 s −1 . Модель была оптимизирована с использованием алгоритма деления пополам и решателя qMINOS, решателя, способного выполнять линейную оптимизацию с четырехкратной точностью 71,72 , чтобы найти максимально возможную скорость роста в пределах допуска 10 –14 . Фракция немоделированного белка, параметр для учета экспрессируемых белков, которые либо выходят за рамки модели, либо недостаточно используются в модели, была установлена ​​на 0.Кроме того, процессы деградации мРНК были исключены из ME-модели для этих симуляций, чтобы предотвратить высокие нагрузки АТФ при низких скоростях роста.

Гены, которые являются субъединицами в мембранно-локализованных ферментных комплексах, и гены, участвующие в процессах экспрессии белков, были вне рамок подходов k app, max и k cat in vitro. Таким образом, эти гены не учитывались при сравнении прогнозируемого и измеренного содержания белка (рис. 4).Прогнозы in silico, которые имели численность больше нуля, были сопоставлены с экспериментальной численностью белка, если последняя содержала более 0 копий на клетку. Весовые доли метаболического протеома оценивали путем нормализации на сумму масс для предсказаний in silico и экспериментальных данных, соответственно.

Статистика

Статистическая значимость корреляций Спирмена ρ была протестирована с использованием алгоритма AS 89 73 , как реализовано в кор.test () среды R 45 . Тесты на перестановку важности признаков в моделях случайного леса проводились с использованием пакета R rfPermute с использованием 500 перестановок соответствующей переменной отклика для каждой модели.

Доступность кода

Код R для обучения и анализа модели и код Python для ME-моделирования доступны у авторов по запросу.

Одноразовые рабочие Amazon: высокие травмы и текучесть кадров в центрах выполнения заказов в Калифорнии

Amazon полагается на модель с чрезвычайно высоким оттоком сотрудников, постоянно заменяя рабочих, чтобы поддерживать опасный и изнурительный темп работы

Краткое содержание

Amazon неоднократно заявляла о своей приверженности обеспечению качественных рабочих мест, но растущее количество данных о травмах и текучести кадров на их предприятиях говорит о другом.

рабочих Amazon по всей стране сообщили, что к ним предъявляются чрезмерно высокие требования к производительности, что приводит к травмам и истощению. Рабочие описывают, как они доводят свое тело до крайности, чтобы избежать автоматического увольнения за пропущенные квоты. [1] Данные из собственных записей компании подтвердили их отчеты, показывающие, что на складах Amazon потрясающе высокий уровень травматизма. [2]

Высокая текучесть кадров — норма на предприятиях Amazon. Наш анализ данных переписи на уровне округа Калифорнии показывает, что, когда Amazon открывает центр выполнения заказов, текучесть кадров в этом округе резко возрастает.

В округах

, в которых размещены центры исполнения Amazon, текучести кадров, что намного выше, чем средняя текучесть кадров для складских рабочих в Калифорнии и рабочих в других отраслях в целом по штату .

Мы находим, что:

  • Средняя текучесть кадров складских рабочих в округах, где есть центры исполнения Amazon, составила 100,9% в 2017 году , последнем году, по которому доступны данные [3]. Другими словами, каждый год со складов покидает больше рабочих, чем общее количество складских рабочих, занятых в этих округах.
  • Это значительно выше, чем текучесть кадров для складских рабочих в Калифорнии и США, которые составляют 83,0% и 69,8% соответственно [4].
  • Оборачиваемость резко выросла в округах после того, как там расположился Amazon. Средняя текучесть кадров для складских рабочих в этих округах «Амазонки» увеличилась более чем вдвое: подскочили с 38,1% до 100,9%.
  • За тот же период текучесть кадров всех складских рабочих Калифорнии (включая Amazon) также выросла с 42,1 процента в 2011 году до 83 процентов в 2017 году. Напротив, общая текучесть кадров во всех отраслях Калифорнии выросла лишь незначительно, с 63,9 процента до 69,8 процента. .
  • Работники складов в Калифорнии — это преимущественно цветные люди, подавляющее большинство из которых — латиноамериканцы. 54% складских рабочих в Калифорнии в 2017 году были латиноамериканцами. Азиатские и черные рабочие представлены 9.5 процентов и 9 процентов соответственно. [5]

Возникает тревожная картина бизнес-модели Amazon, в которой компания рассматривает своих сотрудников как одноразовых сотрудников и строит свои операции таким образом, чтобы способствовать высокой текучести кадров.

Рабочих, которые не могут идти в ногу с экстремальными целями производительности, увольняют или побуждают уволиться. Многие рабочие вынуждены увольняться с работы из-за травм.

Бесчеловечный темп работы Amazon и повторяющиеся рабочие задачи требуют определенного уровня физических нагрузок и напряжения , которые со временем серьезно сказываются на физическом здоровье работников, поэтому компании необходимо постоянно пополнять свой персонал свежими телами.

Вместо того, чтобы воспитывать сотрудников, чтобы они оставались в компании на долгое время, Amazon полагается на модель с высоким оттоком, которая использует и увольняет работников без учета ущерба для их здоровья или возможных нарушений их жизни, их семей и их жизни. сообщества.

Текучесть кадров склада вырастает до 100%, когда Amazon приезжает в город

NELP проанализировал общедоступные данные Бюро переписи населения для пяти округов Калифорнии, где центры исполнения Amazon имели значительное присутствие в складском секторе в период с 2012 по 2017 год, последний год, по которому доступны данные.

В 2017 году средний годовой оборот складских рабочих в округах, где есть центры исполнения Amazon, превысил 100 процентов (, таблица 1, ). Другими словами, в этих округах каждый год увольняется с работы по крайней мере столько же рабочих, сколько работает на складах.

Оборачиваемость складских рабочих в этих округах с объектами Amazon также намного выше, чем в среднем по Калифорнии и стране для складских рабочих, которые в 2017 году составили 83 процента и 68,8 процента соответственно.Это также намного выше, чем общая текучесть кадров Калифорнии во всех отраслях промышленности, которая в 2017 году составляла 69,8%.

Таблица 1. Уровень текучести складских рабочих в округах с центрами исполнения Amazon
Округ Центры обслуживания клиентов Amazon Среднегодовая занятость Всего увольнений за год Оборачиваемость
Сан-Бернардино ONT2, ONT3, ONT4, ONT7, ONT9, LGB4, LGB7, SN7, SNA8, LGB5, KRB1, PCA2, SNA4, LAX9 * 34 410 33 159 96.4%
Риверсайд ONT6, SNA6, SNA9, LGB3, LGB6, XUSO 26 928 28 685 106,5%
Сан-Хоакин SJC7, PCA1, OAK4, OAK6, SMF3 *, SCK1 * 15,611 16 302 104,4%
Станислав ДУБ3 3 058 2 731 89,3%
Сакраменто SMF1 1,762 1,635 92.8%
Среднее значение по вышеуказанным округам ~ ~ 100,9%
Все склады в Калифорнии 130 282 108,117 83,0%
Все отрасли Калифорнии 16 624 231 11 595 692 69.8%
Источник: MWPVL International, NELP анализ данных квартальных показателей рабочей силы Бюро переписи населения. Примечание. Округ Лос-Анджелес исключен, так как Amazon представляет здесь небольшую долю складского сектора. Средняя текучесть кадров в перечисленных округах взвешена по занятости. * обозначает фулфилмент-центр, открытый после 2017 года, последней даты, по которой доступны данные.

Более того, данные показывают, что текучесть кадров для складских рабочих в этих округах резко возрастает за годы после того, как Amazon начинает там свою деятельность (, рис. 1 ):

  • В округе Сан-Бернардино Amazon открыла центры выполнения заказов в 2012 и 2016 годах.С 2012 по 2017 год занятость в складском секторе утроилась, а оборот удвоился с 48,2 процента до 98,6 процента, что является самым высоким уровнем за последние 20 лет по данным, которые мы исследовали.
  • В округе Риверсайд Amazon открыла фулфилмент-центр в 2014 году. С 2014 по 2017 год оборот там увеличился с 68,4 до 107 процентов.
  • В округе Станислав Amazon открыла фулфилмент-центр в 2013 году, и оборот вырос с 38,3 процента в 2013 году до 89,3 процента в 2017 году.
  • В округе Сан-Хоакин Amazon открыла центры выполнения заказов в 2013 и 2016 годах.Оборот увеличился с 40,3 процента в 2013 году до 104,4 процента в 2017 году.
  • В округе Сакраменто Amazon открыла фулфилмент-центр в 2017 году, и товарооборот подскочил с 35,2 процента в 2016 году до 92,8 процента в 2017 году.

Изменения оборачиваемости могут быть связаны с различными факторами, включая колебания бизнес-цикла. Однако особенно высокий показатель для этой группы работников по сравнению с показателем для аналогичных работников говорит о том, что присутствие Amazon имело уникальное влияние.

Во всех пяти округах текучесть рабочих складов в 2017 году была на самом высоком уровне с 2000 года и существенно выше текучести, достигнутой на пике последнего экономического цикла в 2006 году (, рисунок 1, ).

Напротив, оборот в целом по всем отраслям в Калифорнии оставался относительно стабильным в течение этого периода, колеблясь между 60 и чуть более 70 процентами в период с 2012 по 2017 год.

Более того, динамика текучести кадров в центрах выполнения заказов Amazon по всей стране подтверждает, что эта проблема присуща бизнес-модели одноразового работника Amazon.В округе Гуадалупе, штат Техас, и округе Скотт, штат Миннесота, до того, как Amazon построила свои объекты (в Шерце, штат Техас и Шакопи, штат Миннесота), существовало очень мало или совсем не существовало других складов, что позволяло нам более непосредственно оценивать текучесть кадров на складах Amazon путем изучения уровня округа данные об обороте:

  • В округе Гуадалупе, штат Техас, где Amazon является единственным складом, товарооборот в 2017 году составил 186,4%.
  • В округе Скотт, штат Миннесота, где на момент появления Amazon в 2015 году на складах работало всего около 100 человек, товарооборот в 2017 году составил 193 человека.2 процента; а количество рабочих мест на складах выросло почти до 5000, что отражает занятость на предприятиях Amazon.
  • Эти цифры представляют собой наилучшие доступные правительственные данные об истинном уровне товарооборота на складах Amazon.
Невероятно высокий уровень серьезных травм на Amazon подвергает рабочих риску пожизненных проблем со здоровьем

Рабочие складов Amazon получают тревожно высокий уровень травм, особенно серьезных травм. Недавний отчет десятка организаций, использующий собственные записи Amazon о травмах и заболеваниях, показал, что рабочие получают серьезные травмы (те, которые связаны с более чем оказанием первой помощи), причем показатели в два раза выше, чем в среднем на других складах.

Кроме того, работников Amazon получили наиболее серьезные травмы. — те, которые потребовали перевода на легкую работу или пропуска работы — в пять раз больше, чем в среднем по стране для всех частных предприятий.

Раненые работники Amazon были вынуждены пропустить в среднем пять с половиной недель работы , чтобы оправиться от травм на рабочем месте.

Подавляющее большинство серьезных травм на складах Amazon связаны с травмами опорно-двигательного аппарата: растяжениями, растяжениями и разрывами плеча, спины, колена, запястья и стопы.

Подавляющее большинство серьезных травм на складах Amazon связаны с травмами опорно-двигательного аппарата: растяжениями, растяжениями и разрывами плеча, спины, колена, запястья и стопы. Эти травмы связаны с работой, которая включает в себя повторяющиеся, сильные нагрузки — сгибание, скручивание и неудобные позы, — которые характерны для большинства работ на складах Amazon.

Кроме того, типы тяжелых травм, от которых страдают рабочие, — это травмы, которые могут оставаться у рабочих на всю оставшуюся жизнь, приводящие к хронической боли и повышенному риску повторных травм и длительной нетрудоспособности.

Перспектива пожизненной травмы особенно тревожит молодых работников, которые составляют большую часть предприятий складской и электронной торговли. Согласно данным переписи населения США, 27 процентов работников складской отрасли моложе 25 лет, а 56 процентов работников складских помещений моложе 35 лет.

Еще более тревожным является тот факт, что рабочие-латиноамериканцы сильно представлены в рабочей силе, составляя более половины (54%) складской рабочей силы Калифорнии.

The Atlantic опросил бывшего работника Amazon, который рассказал о своем опыте:

«[Один рабочий] потерял 30 фунтов, работая в Amazon, потому что он очень много стоял на ногах, собирая товары с полок и складывая их в мусорные ведра, а также упаковывая товары в коробки. Его перерывы составляли всего 15 минут, но чтобы добраться до комнаты отдыха, требовалось 10 минут, поэтому он сидел на лестнице, ожидая, пока работа начнется снова. [Он] работал на почте, диск-жокеем и в U.S. Census, но работа на Amazon «была самой жестокой и нанесла самый большой урон моему телу », — сказал он ». [Курсив мой.] [6]

Исследования показали связь между плохими условиями труда и текучестью кадров. Работники, работающие в опасных условиях на рабочем месте, например, на складах Amazon, действительно с большей вероятностью уйдут. [7]

Уволен или вынужден уволиться: одноразовая рабочая сила как бизнес-модель

На протяжении десятилетий руководство Amazon культивировало культуру обращения с рабочими как с одноразовыми деталями в большой машине, заставляя их разум и тело работать до тех пор, пока они перестают быть полезными, а затем отпускать их.

Согласно опросу PayScale, у Amazon один из самых высоких показателей текучести кадров среди компаний из списка Fortune 500: человек работают в компании менее одного года. Текущие и бывшие сотрудники на всех уровнях описывают в Amazon культуру «оттока и сжигания», и даже генеральный директор Джефф Безос с гордостью заявляет: «Здесь нелегко работать». [8]

Алгоритмы и системы отслеживания Amazon постоянно отслеживают продуктивность сотрудников в течение рабочего дня.В распределительных центрах работники обязаны идти в ногу с постоянно растущей «скоростью», вытаскивая сотни предметов каждый час в течение своей смены.

Когда рабочие отстают, программное обеспечение Amazon для управления автоматически генерирует предупреждающие письма , нацеливает работников на «переподготовку» и даже увольняет работников без участия какого-либо человека-менеджера в этом процессе. [9]

Компания также активно поощряет увольнение работников. Якобы одна из целей этой практики — открыть рабочие места для новых сотрудников, которые приносят свежую энергию и неповрежденные тела.

Раз в год Amazon предлагает платить штатным сотрудникам, проработавшим не менее одного года в центрах выполнения заказов Amazon, до 10 000 долларов за увольнение с работы. Компромисс для работников состоит в том, что, если они примут предложение, им больше не будет возможности работать в Amazon. [10]

Заключение

Помимо негативного воздействия на здоровье и безопасность работников, система с высоким оттоком сотрудников Amazon создает другие расходы, которые не несет компания, потенциально создавая нагрузку на государственные службы, такие как страхование по безработице, государственную помощь и программы государственного медицинского страхования, и создавая нестабильность. для рабочих, их семей и их сообществ.

Директивным органам следует действовать незамедлительно, чтобы обеспечить разумные и устойчивые ожидания рабочей нагрузки для складских рабочих Калифорнии, которые в подавляющем большинстве являются цветными. Принятие мер по этому вопросу является решающим шагом на пути к обеспечению здоровых и безопасных условий труда для работников важной и растущей отрасли в Калифорнии.

Amazon полагается на модель с чрезвычайно высоким оттоком сотрудников, постоянно заменяя рабочих, чтобы поддерживать опасный и изнурительный темп работы

Краткое содержание

Amazon неоднократно заявляла о своей приверженности обеспечению качественных рабочих мест, но растущее количество данных о травмах и текучести кадров на их предприятиях говорит о другом.

рабочих Amazon по всей стране сообщили, что к ним предъявляются чрезмерно высокие требования к производительности, что приводит к травмам и истощению. Рабочие описывают, как они доводят свое тело до крайности, чтобы избежать автоматического увольнения за пропущенные квоты. [1] Данные из собственных записей компании подтвердили их отчеты, показывающие, что на складах Amazon потрясающе высокий уровень травматизма. [2]

Высокая текучесть кадров — норма на предприятиях Amazon. Наш анализ данных переписи на уровне округа Калифорнии показывает, что, когда Amazon открывает центр выполнения заказов, текучесть кадров в этом округе резко возрастает.

В округах

, в которых размещены центры исполнения Amazon, текучести кадров, что намного выше, чем средняя текучесть кадров для складских рабочих в Калифорнии и рабочих в других отраслях в целом по штату .

Мы находим, что:

  • Средняя текучесть кадров складских рабочих в округах, где есть центры исполнения Amazon, составила 100,9% в 2017 году , последнем году, по которому доступны данные [3]. Другими словами, каждый год со складов покидает больше рабочих, чем общее количество складских рабочих, занятых в этих округах.
  • Это значительно выше, чем текучесть кадров для складских рабочих в Калифорнии и США, которые составляют 83,0% и 69,8% соответственно [4].
  • Оборачиваемость резко выросла в округах после того, как там расположился Amazon. Средняя текучесть кадров для складских рабочих в этих округах «Амазонки» увеличилась более чем вдвое: подскочили с 38,1% до 100,9%.
  • За тот же период текучесть кадров всех складских рабочих Калифорнии (включая Amazon) также выросла с 42,1 процента в 2011 году до 83 процентов в 2017 году. Напротив, общая текучесть кадров во всех отраслях Калифорнии выросла лишь незначительно, с 63,9 процента до 69,8 процента. .
  • Работники складов в Калифорнии — это преимущественно цветные люди, подавляющее большинство из которых — латиноамериканцы. 54% складских рабочих в Калифорнии в 2017 году были латиноамериканцами. Азиатские и черные рабочие представлены 9.5 процентов и 9 процентов соответственно. [5]

Возникает тревожная картина бизнес-модели Amazon, в которой компания рассматривает своих сотрудников как одноразовых сотрудников и строит свои операции таким образом, чтобы способствовать высокой текучести кадров.

Рабочих, которые не могут идти в ногу с экстремальными целями производительности, увольняют или побуждают уволиться. Многие рабочие вынуждены увольняться с работы из-за травм.

Бесчеловечный темп работы Amazon и повторяющиеся рабочие задачи требуют определенного уровня физических нагрузок и напряжения , которые со временем серьезно сказываются на физическом здоровье работников, поэтому компании необходимо постоянно пополнять свой персонал свежими телами.

Вместо того, чтобы воспитывать сотрудников, чтобы они оставались в компании на долгое время, Amazon полагается на модель с высоким оттоком, которая использует и увольняет работников без учета ущерба для их здоровья или возможных нарушений их жизни, их семей и их жизни. сообщества.

Текучесть кадров склада вырастает до 100%, когда Amazon приезжает в город

NELP проанализировал общедоступные данные Бюро переписи населения для пяти округов Калифорнии, где центры исполнения Amazon имели значительное присутствие в складском секторе в период с 2012 по 2017 год, последний год, по которому доступны данные.

В 2017 году средний годовой оборот складских рабочих в округах, где есть центры исполнения Amazon, превысил 100 процентов (, таблица 1, ). Другими словами, в этих округах каждый год увольняется с работы по крайней мере столько же рабочих, сколько работает на складах.

Оборачиваемость складских рабочих в этих округах с объектами Amazon также намного выше, чем в среднем по Калифорнии и стране для складских рабочих, которые в 2017 году составили 83 процента и 68,8 процента соответственно.Это также намного выше, чем общая текучесть кадров Калифорнии во всех отраслях промышленности, которая в 2017 году составляла 69,8%.

Таблица 1. Уровень текучести складских рабочих в округах с центрами исполнения Amazon
Округ Центры обслуживания клиентов Amazon Среднегодовая занятость Всего увольнений за год Оборачиваемость
Сан-Бернардино ONT2, ONT3, ONT4, ONT7, ONT9, LGB4, LGB7, SN7, SNA8, LGB5, KRB1, PCA2, SNA4, LAX9 * 34 410 33 159 96.4%
Риверсайд ONT6, SNA6, SNA9, LGB3, LGB6, XUSO 26 928 28 685 106,5%
Сан-Хоакин SJC7, PCA1, OAK4, OAK6, SMF3 *, SCK1 * 15,611 16 302 104,4%
Станислав ДУБ3 3 058 2 731 89,3%
Сакраменто SMF1 1,762 1,635 92.8%
Среднее значение по вышеуказанным округам ~ ~ 100,9%
Все склады в Калифорнии 130 282 108,117 83,0%
Все отрасли Калифорнии 16 624 231 11 595 692 69.8%
Источник: MWPVL International, NELP анализ данных квартальных показателей рабочей силы Бюро переписи населения. Примечание. Округ Лос-Анджелес исключен, так как Amazon представляет здесь небольшую долю складского сектора. Средняя текучесть кадров в перечисленных округах взвешена по занятости. * обозначает фулфилмент-центр, открытый после 2017 года, последней даты, по которой доступны данные.

Более того, данные показывают, что текучесть кадров для складских рабочих в этих округах резко возрастает за годы после того, как Amazon начинает там свою деятельность (, рис. 1 ):

  • В округе Сан-Бернардино Amazon открыла центры выполнения заказов в 2012 и 2016 годах.С 2012 по 2017 год занятость в складском секторе утроилась, а оборот удвоился с 48,2 процента до 98,6 процента, что является самым высоким уровнем за последние 20 лет по данным, которые мы исследовали.
  • В округе Риверсайд Amazon открыла фулфилмент-центр в 2014 году. С 2014 по 2017 год оборот там увеличился с 68,4 до 107 процентов.
  • В округе Станислав Amazon открыла фулфилмент-центр в 2013 году, и оборот вырос с 38,3 процента в 2013 году до 89,3 процента в 2017 году.
  • В округе Сан-Хоакин Amazon открыла центры выполнения заказов в 2013 и 2016 годах.Оборот увеличился с 40,3 процента в 2013 году до 104,4 процента в 2017 году.
  • В округе Сакраменто Amazon открыла фулфилмент-центр в 2017 году, и товарооборот подскочил с 35,2 процента в 2016 году до 92,8 процента в 2017 году.

Изменения оборачиваемости могут быть связаны с различными факторами, включая колебания бизнес-цикла. Однако особенно высокий показатель для этой группы работников по сравнению с показателем для аналогичных работников говорит о том, что присутствие Amazon имело уникальное влияние.

Во всех пяти округах текучесть рабочих складов в 2017 году была на самом высоком уровне с 2000 года и существенно выше текучести, достигнутой на пике последнего экономического цикла в 2006 году (, рисунок 1, ).

Напротив, оборот в целом по всем отраслям в Калифорнии оставался относительно стабильным в течение этого периода, колеблясь между 60 и чуть более 70 процентами в период с 2012 по 2017 год.

Более того, динамика текучести кадров в центрах выполнения заказов Amazon по всей стране подтверждает, что эта проблема присуща бизнес-модели одноразового работника Amazon.В округе Гуадалупе, штат Техас, и округе Скотт, штат Миннесота, до того, как Amazon построила свои объекты (в Шерце, штат Техас и Шакопи, штат Миннесота), существовало очень мало или совсем не существовало других складов, что позволяло нам более непосредственно оценивать текучесть кадров на складах Amazon путем изучения уровня округа данные об обороте:

  • В округе Гуадалупе, штат Техас, где Amazon является единственным складом, товарооборот в 2017 году составил 186,4%.
  • В округе Скотт, штат Миннесота, где на момент появления Amazon в 2015 году на складах работало всего около 100 человек, товарооборот в 2017 году составил 193 человека.2 процента; а количество рабочих мест на складах выросло почти до 5000, что отражает занятость на предприятиях Amazon.
  • Эти цифры представляют собой наилучшие доступные правительственные данные об истинном уровне товарооборота на складах Amazon.
Невероятно высокий уровень серьезных травм на Amazon подвергает рабочих риску пожизненных проблем со здоровьем

Рабочие складов Amazon получают тревожно высокий уровень травм, особенно серьезных травм. Недавний отчет десятка организаций, использующий собственные записи Amazon о травмах и заболеваниях, показал, что рабочие получают серьезные травмы (те, которые связаны с более чем оказанием первой помощи), причем показатели в два раза выше, чем в среднем на других складах.

Кроме того, работников Amazon получили наиболее серьезные травмы. — те, которые потребовали перевода на легкую работу или пропуска работы — в пять раз больше, чем в среднем по стране для всех частных предприятий.

Раненые работники Amazon были вынуждены пропустить в среднем пять с половиной недель работы , чтобы оправиться от травм на рабочем месте.

Подавляющее большинство серьезных травм на складах Amazon связаны с травмами опорно-двигательного аппарата: растяжениями, растяжениями и разрывами плеча, спины, колена, запястья и стопы.

Подавляющее большинство серьезных травм на складах Amazon связаны с травмами опорно-двигательного аппарата: растяжениями, растяжениями и разрывами плеча, спины, колена, запястья и стопы. Эти травмы связаны с работой, которая включает в себя повторяющиеся, сильные нагрузки — сгибание, скручивание и неудобные позы, — которые характерны для большинства работ на складах Amazon.

Кроме того, типы тяжелых травм, от которых страдают рабочие, — это травмы, которые могут оставаться у рабочих на всю оставшуюся жизнь, приводящие к хронической боли и повышенному риску повторных травм и длительной нетрудоспособности.

Перспектива пожизненной травмы особенно тревожит молодых работников, которые составляют большую часть предприятий складской и электронной торговли. Согласно данным переписи населения США, 27 процентов работников складской отрасли моложе 25 лет, а 56 процентов работников складских помещений моложе 35 лет.

Еще более тревожным является тот факт, что рабочие-латиноамериканцы сильно представлены в рабочей силе, составляя более половины (54%) складской рабочей силы Калифорнии.

The Atlantic опросил бывшего работника Amazon, который рассказал о своем опыте:

«[Один рабочий] потерял 30 фунтов, работая в Amazon, потому что он очень много стоял на ногах, собирая товары с полок и складывая их в мусорные ведра, а также упаковывая товары в коробки. Его перерывы составляли всего 15 минут, но чтобы добраться до комнаты отдыха, требовалось 10 минут, поэтому он сидел на лестнице, ожидая, пока работа начнется снова. [Он] работал на почте, диск-жокеем и в U.S. Census, но работа на Amazon «была самой жестокой и нанесла самый большой урон моему телу », — сказал он ». [Курсив мой.] [6]

Исследования показали связь между плохими условиями труда и текучестью кадров. Работники, работающие в опасных условиях на рабочем месте, например, на складах Amazon, действительно с большей вероятностью уйдут. [7]

Уволен или вынужден уволиться: одноразовая рабочая сила как бизнес-модель

На протяжении десятилетий руководство Amazon культивировало культуру обращения с рабочими как с одноразовыми деталями в большой машине, заставляя их разум и тело работать до тех пор, пока они перестают быть полезными, а затем отпускать их.

Согласно опросу PayScale, у Amazon один из самых высоких показателей текучести кадров среди компаний из списка Fortune 500: человек работают в компании менее одного года. Текущие и бывшие сотрудники на всех уровнях описывают в Amazon культуру «оттока и сжигания», и даже генеральный директор Джефф Безос с гордостью заявляет: «Здесь нелегко работать». [8]

Алгоритмы и системы отслеживания Amazon постоянно отслеживают продуктивность сотрудников в течение рабочего дня.В распределительных центрах работники обязаны идти в ногу с постоянно растущей «скоростью», вытаскивая сотни предметов каждый час в течение своей смены.

Когда рабочие отстают, программное обеспечение Amazon для управления автоматически генерирует предупреждающие письма , нацеливает работников на «переподготовку» и даже увольняет работников без участия какого-либо человека-менеджера в этом процессе. [9]

Компания также активно поощряет увольнение работников. Якобы одна из целей этой практики — открыть рабочие места для новых сотрудников, которые приносят свежую энергию и неповрежденные тела.

Раз в год Amazon предлагает платить штатным сотрудникам, проработавшим не менее одного года в центрах выполнения заказов Amazon, до 10 000 долларов за увольнение с работы. Компромисс для работников состоит в том, что, если они примут предложение, им больше не будет возможности работать в Amazon. [10]

Заключение

Помимо негативного воздействия на здоровье и безопасность работников, система с высоким оттоком сотрудников Amazon создает другие расходы, которые не несет компания, потенциально создавая нагрузку на государственные службы, такие как страхование по безработице, государственную помощь и программы государственного медицинского страхования, и создавая нестабильность. для рабочих, их семей и их сообществ.

Директивным органам следует действовать незамедлительно, чтобы обеспечить разумные и устойчивые ожидания рабочей нагрузки для складских рабочих Калифорнии, которые в подавляющем большинстве являются цветными. Принятие мер по этому вопросу является решающим шагом на пути к обеспечению здоровых и безопасных условий труда для работников важной и растущей отрасли в Калифорнии.

.

Об авторе

alexxlab administrator

Оставить ответ