Ип плюсы и минусы 2018: Плюсы и минусы ИП в таблице

Ип плюсы и минусы 2018: Плюсы и минусы ИП в таблице

Плюсы и минусы ип и ооо \ Акты, образцы, формы, договоры \ Консультант Плюс

]]>

Подборка наиболее важных документов по запросу Плюсы и минусы ип и ооо (нормативно–правовые акты, формы, статьи, консультации экспертов и многое другое).

Судебная практика: Плюсы и минусы ип и ооо Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Определение ВАС РФ от 10.09.2009 N ВАС-10883/09 по делу N А19-10607/08-18
В передаче дела по заявлению о признании недействительными решения и требования налогового органа для пересмотра в порядке надзора судебных актов отказано, так как суд, отказывая в удовлетворении заявления, пришел к правильному выводу о нереальности спорных расходов, их документальной неподтвержденности.Инспекция Федеральной налоговой службы по Октябрьскому району города Иркутска (далее — инспекция) провела выездную налоговую проверку деятельности индивидуального предпринимателя Дубосаровой Софьи Валерьевны (далее — предприниматель) за 2005 — 2006 годы, в ходе которой установила, что, применяя упрощенную систему с объектом налогообложения доходы минус расходы, предприниматель необоснованно включила в состав расходов сумму затрат по приобретению товара (оргстекла) у обществ с ограниченной ответственностью «Норм», «Гамма плюс», «НТВЦ», «Мегатон». Указанное обстоятельство явилось основанием для доначисления предпринимателю налога по упрощенной системе налогообложения и начисления пеней за его несвоевременную уплату. Решением от 10.04.2008 N 13-20/27 предприниматель привлечен к налоговой ответственности по пункту 1 статьи 122 Налогового кодекса Российской Федерации. Также ему выставлено требование от 10.07.2008 N 1209 об уплате доначисленных по решению сумм налога, пеней, штрафа.

Статьи, комментарии, ответы на вопросы: Плюсы и минусы ип и ооо Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Статья: Архитекторы и застройщики: когда в согласии жить не получается
(Васильева С.)
(«Жилищное право», 2018, N 9)Минусы: ИП и ООО «К» на этапе перехода проекта по строительству не согласовали вопрос с правообладателем. Можно было заключить договор по отчуждению исключительного права архитектурного бюро к застройщику. Либо при разработке договора между первоначальным застройщиком (ИП) и истцом следовало озадачиться вопросом принадлежности исключительного права на архитектурный проект. Но тогда цена работы архитекторов стала выше, и, скорее всего, застройщик на этом сэкономил. В результате этого возник спор, и оба застройщика понесли солидарную ответственность перед истцом.

Нормативные акты: Плюсы и минусы ип и ооо

Плюсы и минусы ИП

Если после долгого раздумья, нужна ли регистрации ИП, вы все же решили законно заниматься коммерческой деятельностью, предлагаем Вам ознакомиться со всеми плюсами и минусами данной формы регистрации.

Содержимое страницы

• Плюсы ИП
• Минусы ИП

Плюсы ИП

• Работая в качестве индивидуального предпринимателя, вы ведете законную деятельность и не рискуете привлечением к административной или уголовной ответственности;
• Новые партнеры и подрядчики. Многие организации не ведут работу с наличностью и все операции проводят по безналичному расчету. Не имея регистрации в качестве индивидуального предпринимателя, в случае интереса к Вам налоговых органов, будет сложно доказать появление денежных средств на счету;
• Можно ограничиться минимальными вложениями, выбрав регистрацию ИП самостоятельно;
• Прибыль, которая заработана ведения предпринимательской деятельности, сразу становится собственностью ИП. Использовать прибыль можно сразу.
• Стаж работы в качестве индивидуального предпринимателя участвует в подсчете будущей пенсии.

Минусы ИП

• Ежемесячная или ежеквартальная отчетность, которая подразумевает работу с большим количеством документов.
• Уплата налогов. Сумма налогов достигает от 6 до 15% от доходов/прибыли, в зависимости от выбранной формы налогообложения. К тому же, придется производить выплаты в пенсионный фонд для накопления будущей пенсии
• ИП отвечает по обязательствам своим имуществом.
  В соответствии со статьей 24 Гражданского Кодекса РФ. Гражданин отвечает по своим обязательствам всем принадлежащим ему имуществом, за исключением имущества, на которое в соответствии с законом не может быть обращено взыскание.

Мнение эксперта

Юрист Консультант

Бесплатно помогу и отвечу на ваши вопросы

Задать вопрос

Данная статья рассказывает о типовых способах решения юридических вопросов, но каждый случай индивидуален. Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему — обращайтесь к нашему консультанту совершенно БЕСПЛАТНО!

Юридическое лицо или индивидуальный предприниматель?

Многие граждане, задумавшись о создании собственного бизнеса, неизбежно встают перед выбором той формы, в которой этот бизнес будет впоследствии осуществляться. Законодательство предлагает нам два варианта ведения предпринимательской деятельности — либо юридическое лицо, либо индивидуальный предприниматель. Какие преимущества и недостатки у этих форм? Сжатый и в то же время информативный ответ на этот вопрос предлагает ФНС России в своем электронном сервисе «Создай свой бизнес».

Юридическое лицо

Преимущества юридического лица

1.Проще кредитоваться в банках на крупные суммы, открывать кредитные линии или использовать такие формы финансирования, которые просто по требованиям банковской безопасности недоступны для индивидуального предпринимателя (например, зонтичные овердрафты, когда каждая из дочек в группе – а ведь у вас могут появиться и дочки – может допустить перерасход по банку).
2.Проще работать с контрагентами: получать отсрочки, рассрочки платежей или наоборот, настаивать на своих условиях погашения задолженности.
3.Высоки шансы стать узнаваемым на рынке: бренд — великое дело.
4.В дело могут войти частные инвесторы. А со временем бизнес разрастется так, что ваша компания станет акционерным обществом. Выйдет на биржу, а может даже на мировой рынок.

Недостатки юридического лица

1.Сложнее процедура регистрации: и документов требуется больше, и госпошлина выше.
2.Необходимость ведения полноценного бухгалтерского, налогового учета.
3.Объем отчетности, которую нужно представлять разным контролирующим органам, значительно больше, чем у индивидуального предпринимателя.
4.Ответственность по обязательствам – хотя и не личным имуществом, как в случае с индивидуальным предпринимателем.

Индивидуальный предприниматель

Преимущества индивидуального предпринимателя

1.Нет требований к размеру уставного капитала.
2.Не нужно вести полномасштабный бухгалтерский учет – достаточно простой книги учета доходов и расходов.
3.Объем отчетности, которую нужно представлять разным контролирующим органам, значительно меньше, чем у юридического лица.
4.Суммы штрафов за одни и те же нарушения законодательства в большинстве случаев значительно ниже, чем для юридических лиц.

5.Возможно применение патентной системы – одного из самых удобных и лояльных налоговых режимов.
6.Наличие льгот по страховым взносам – фиксированные суммы за индивидуального предпринимателя вместо «привязки» размера взноса к уровню доходов, как у юридических лиц, и пониженные тарифы для наемных работников.
7.Проще процедура регистрации: и документов требуется меньше, и госпошлина ниже.

Недостатки индивидуального предпринимателя

1.Ответственность по обязательствам всем имуществом, даже если оно не участвует в предпринимательской деятельности.
2.Ограничение на ведение некоторых видов деятельности, например банковской или торговлю алкоголем в розницу.
3.Недостаточная проработка законодательной базы. Ряд правил законодатель распространил только на юридические лица, лишив предпринимателей возможности реализовать свои права без обращения в суд (например, применение некоторых льгот по НДС или учет определенных расходов при расчете налога на доходы).

4.Сложнее расширять бизнес: возможны проблемы с контрагентами, кредитованием, привлечением сторонних инвестиций.

//ФНС России

Плюсы и минусы внешнего IP-адреса

Практически у каждого интернет-провайдера есть такая услуга: фиксированный внешний IP-адрес. Его же иногда называют «реальным IP», «белым IP» или «прямым IP». Некоторые подключают ее по принципу «чтобы было», некоторые — с вполне осознанной целью. Однако внешний IP-адрес может таить множество опасностей. Что это за услуга, кому она может понадобиться и чем вы рискуете, подключив ее, — расскажем прямо сейчас.

Что такое IP-адрес и как это все работает

Если вы хотите отправить другу открытку из путешествия, вам нужно знать его адрес. Без этого почтовая система никак не сможет узнать, где искать вашего друга. Интернет работает примерно так же: все действия в Интернете, от проверки почты до просмотра смешных видеороликов, требуют обмена данными между вашим устройством и серверами, и у каждого участника должен быть свой адрес, по которому его можно идентифицировать.

Например, чтобы открыть страницу в браузере, компьютер должен обратиться к серверу по его адресу, а тот, в свою очередь, отправит эту страницу обратно — тоже по адресу. Передача и запросов, и ответов происходит при помощи пакетов, которые, как и обычные бумажные письма, содержат адреса отправителя и получателя. Такие адреса называются IP-адресами и записываются в виде четырех чисел от 0 до 255, разделенных точками: например 92.162.36.203. Всего возможных комбинаций немногим более 4 миллиардов, а это гораздо меньше, чем устройств, подключенных к Интернету.

Поэтому IP-адреса решили экономить и придумали механизм NAT (Network address translation) — «трансляцию сетевых адресов». Работает этот механизм следующим образом: интернет-провайдер использует один внешний IP-адрес для всех своих абонентов, а самим им присваивает внутренние.

Это похоже на офисную АТС: когда вам звонят из какой-нибудь фирмы, то всегда определяется один и тот же номер, а телефоны разных сотрудников имеют дополнительные, внутренние номера. Дозвониться до конкретного человека напрямую нельзя, но можно набрать общий номер — и секретарь соединит вас с нужным абонентом.

В роли такого «секретаря» и выступает NAT: получив пакет для внешнего сервера, он запоминает, какое устройство его отправило (чтобы знать, куда передавать ответ), и подставляет вместо его адреса-номера свой, общий для всех, после чего пересылает пакет дальше. Соответственно, при получении ответного пакета, который изначально был отправлен на общий адрес, NAT подставляет в него адрес во внутренней сети провайдера, и «письмо» летит дальше, к тому устройству, которому оно в действительности адресовано.

Механизм NAT может работать по цепочке — например, ваш домашний Wi-Fi-роутер создает локальную сеть со своими IP-адресами и переадресует пакеты, направляемые в сеть провайдера и из нее. При этом он может даже не знать, что сам находится за NAT провайдера. Казалось бы, все прекрасно, зачем тогда внешний IP-адрес?

Дело в том, что с NAT все отлично работает до тех пор, пока все соединения инициируются именно из внутренней сети. То есть если это вы открываете сайты, скачиваете файлы и смотрите видео. Но если к вашему устройству нужно подключиться из Интернета, то через NAT это реализовать невозможно: все пакеты, которые поступят на IP-адрес провайдера, уйдут в никуда, потому что они не являются ответом на чей-то внутренний запрос, и кому их слать дальше — непонятно.

Поэтому для тех случаев, когда к своей сети нужен доступ извне, используют внешний IP-адрес — уникальный и неповторимый. Это примерно как телефону директора в офисе присвоить отдельный прямой городской номер, чтобы те, кто его знает, могли позвонить сразу ему, минуя секретаря.

Зачем нужен внешний IP

Дома это может пригодиться, например, если вы хотите получать доступ к файлам на домашнем компьютере с работы или, скажем, из гостей, вместо того чтобы держать их в облачных хранилищах.

Очень популярны внешние IP-адреса у геймеров: можно создать собственный сервер для многопользовательской игры со своими правилами, модами, картами и приглашать друзей играть. А еще внешний IP-адрес нужен для стриминга игр с удаленных устройств типа Xbox, Playstation или вашего игрового компьютера на ноутбук, когда вы, допустим, решили поиграть в гостях или в поездке.

Иногда внешний IP-адрес требуется для работы сервисов видеонаблюдения и прочих охранных систем, решений для «умного дома» и так далее, однако преимущественно старых. Большинство современных систем — облачные. Это значит, что вы регистрируете свои домашние устройства на специальном доверенном сервере.

После этого все команды устройствам вы отправляете не напрямую им, а на этот сервер. В свою очередь, устройства периодически обращаются к нему и спрашивают, не поступило ли для них команд. При таком подходе реальный IP не требуется — на всех этапах система NAT понимает, куда возвращать пакеты. Заодно через этот же сервер вы можете получать информацию с устройств и управлять ими из любой точки мира.

Чем опасен внешний IP

Главная опасность внешнего IP-адреса заключается в том же, в чем и его преимущество: он позволяет подключиться к вашему устройству напрямую из Интернета. Из любой точки мира, кому угодно — то есть и злоумышленникам тоже. Затем, используя те или иные уязвимости, киберпреступники вполне могут добраться до ваших файлов и украсть какую-нибудь конфиденциальную информацию, которую потом можно или продать, или вас же ею и шантажировать.

Кроме того, злоумышленник может изменить настройки вашего доступа в Интернет, например, заставить роутер вместо некоторых сайтов подсовывать вам их фишинговые копии — тогда у вас очень быстро украдут все логины и пароли.

Как хакеры узнают, на кого нападать? Во-первых, есть общедоступные интернет-сервисы, которые регулярно проверяют все IP-адреса подряд на предмет уязвимостей и позволяют буквально в пару кликов найти тысячи устройств, имеющих ту или иную дырку, через которую их можно взломать. Во-вторых, при желании злоумышленники могут узнать именно ваш IP — например, через запущенный Skype. Еще ваш адрес видно, когда вы просто заходите на страницы сайтов.

Кстати, по реальному IP-адресу можно не только взломать вашу домашнюю сеть, но и устроить на вас DDoS-атаку, отправляя вам одновременно множество пакетов с разных устройств и перегружая интернет-канал и роутер. У вашего интернет-провайдера от этого есть защита, а у вас? Такие атаки часто проводят против геймеров и стримеров — например, чтобы «выкинуть» сильного противника из соревнования, «подвесив» ему Интернет.

Как защититься

Лучший способ защиты — это, конечно, вообще не использовать внешний IP-адрес, особенно если вы не уверены, что он вам необходим. Не ведитесь на рекламу интернет-провайдеров, как бы убедительна она ни была.

Если же уверены, что прямой IP вам нужен, то первым делом поменяйте используемый по умолчанию пароль от роутера. Это не защитит вас от хакеров, эксплуатирующих уязвимости конкретной модели устройства, но спасет от менее квалифицированных злоумышленников. Хорошей идеей будет использовать роутер той модели, в которой меньше известных и популярных среди хакеров дырок — правда, чтобы это понять, придется как следует порыться в Интернете.

Прошивку роутера желательно регулярно обновлять — в более свежих версиях прошивок, как правило, устраняют ошибки, которые были найдены в ранних версиях. И, конечно, в роутере нужно включить все имеющиеся встроенные средства защиты — в домашних моделях это не самые эффективные решения, но хоть что-то.

Кроме того, желательно использовать VPN — например, Kaspersky Secure Connection. Тогда ваш внешний IP-адрес, по крайней мере, не будет виден везде, где вы бываете в Интернете: вместо него будет отображаться адрес VPN-сервера.

Наконец, не пренебрегайте защитными решениями как на компьютерах, так и на мобильных устройствах. Сегодня они не просто ловят зловредов, но и позволяют защититься от другого рода атак вроде перенаправления на зловредные сайты или добавления вредоносной рекламы — а именно такие атаки наиболее вероятны при взломе роутера.

Отзывы автовладельцев о Volkswagen Tiguan компактный кроссовер

Volkswagen Tiguan 1.4 RT

Какой-то кошмар. Ни за что взяться невозможно. Все скрипит, как в Ладе Гранте. Расход по городу 20 литров. По трассе честные 7. Залагала зимой медиа-система. Прошёл баг после перезапуска двигателя. Задняя щетк…

Volkswagen Tiguan — Все скрипит, трещит. Медиа лагает https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/4065/ Какой-то кошмар. Ни за что взяться невозможно. Все скрипит, как в Ладе Гранте. Расход по городу 20 литров. По трассе честные 7. Залагала зимой медиа-система. Прошёл баг после перезапуска двигателя. Задняя щетк…

Nikolas Keyn

31 августа 2021 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 2.7

Volkswagen Tiguan 1.4 RT

И так, став счастливым обладателем народного авто ровно 3 месяца назад обнаружил, что купил продукт некоего автоВАЗа, работающего под прикрытием Volkswagen. Проехав около 2000 км выявил вой под капотом, нет не…

Volkswagen Tiguan — «Ода» про Тигуан https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/3324/ И так, став счастливым обладателем народного авто ровно 3 месяца назад обнаружил, что купил продукт некоего автоВАЗа, работающего под прикрытием Volkswagen. Проехав около 2000 км выявил вой под капотом, нет не…

Vladislav Kazanov

22 мая 2021 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 2.8

Volkswagen Tiguan 1.4 RT

В 2018 г решил себе подарок на днюху и обменял CRV на Тигу II не глядя. Побаивался 1.4 двигателя, турбины и робота. Но абсолютно зря оказалось. Тяги хватает с лихвой выстреливать и на светофорах и на скорости 13…

Volkswagen Tiguan — Прекрасный агрегат https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/3294/ В 2018 г решил себе подарок на днюху и обменял CRV на Тигу II не глядя. Побаивался 1.4 двигателя, турбины и робота. Но абсолютно зря оказалось. Тяги хватает с лихвой выстреливать и на светофорах и на скорости 13…

Рустем Тальдаев

12 апреля 2021 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan 1.4 RT City

Автомобиль 3й, до этого были подержанная тойота королла 2008г.в. и новый сузуки sx4 2014 г.в. Салон алькантара, зимний пакет, полуавтоматич парковка, датчики по кругу. Езжу 90% по городу, изредка за город и раз…

Volkswagen Tiguan — Владею 1,5 года https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/3198/ Автомобиль 3й, до этого были подержанная тойота королла 2008г.в. и новый сузуки sx4 2014 г.в. Салон алькантара, зимний пакет, полуавтоматич парковка, датчики по кругу. Езжу 90% по городу, изредка за город и раз…

Оксана Семенова

17 января 2021 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.7

Volkswagen Tiguan. Кроссовер на все времена

Фарит Валиуллов

19 февраля 2020 г.

Volkswagen Tiguan 1.4 MT Trendline

Здравствуйте. Я хочу тоже немного написать о тигуане. Купил в мае 2020 год. Недоволен машиной. Ветровой шум с водительской стороны. И никто ничего не может найти. Михаил….

Volkswagen Tiguan — Фольсваген тигуан. https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/3183/ Здравствуйте. Я хочу тоже немного написать о тигуане. Купил в мае 2020 год. Недоволен машиной. Ветровой шум с водительской стороны. И никто ничего не может найти. Михаил….

Михаил Привалов

20 декабря 2020 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 3.2

Volkswagen Tiguan 1.4 RT Offroad

За год эксплуатации проблем не выявлено,все работает исправно,масло не жрёт.Пробег 13 тысяч. Максимальная комплектация offroad, есть все,что можно было дооснастить.Технические характеристики соответствуют заявле…

Volkswagen Tiguan — Тигуан 1.4 оффроуд 150 л.с. https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/2972/ За год эксплуатации проблем не выявлено,все работает исправно,масло не жрёт.Пробег 13 тысяч. Максимальная комплектация offroad, есть все,что можно было дооснастить.Технические характеристики соответствуют заявле…

Андрей Егоров

8 апреля 2020 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan

Владею авто чуть больше месяца, поэтому сугубо первые впечатления опишу. Выбирал долго, изначально целился на Skoda Karoq, но все местные форумы преваритились в ждунов (спасибо Шкода…). На сегодня выбора мног…

Volkswagen Tiguan — Приятно — это про Tiguan https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/2862/ Владею авто чуть больше месяца, поэтому сугубо первые впечатления опишу. Выбирал долго, изначально целился на Skoda Karoq, но все местные форумы преваритились в ждунов (спасибо Шкода…). На сегодня выбора мног…

Ванёк Воронцов

19 ноября 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan

Тигуан стал моей первой новой машиной, до этого покупал подержанные, с небольшим пробегом. Но тут уж решил, что пора почувствовать новый автомобиль, никем доселе не эксплуатируемый. Volkswagen выбирал осознанно,…

Volkswagen Tiguan — Нормальны автомобиль https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/2741/ Тигуан стал моей первой новой машиной, до этого покупал подержанные, с небольшим пробегом. Но тут уж решил, что пора почувствовать новый автомобиль, никем доселе не эксплуатируемый. Volkswagen выбирал осознанно,…

Евгений Борисов

25 октября 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.5

Volkswagen Tiguan

Год назад искали с женой удобный семейный автомобиль и выбор пал на Volkswagen Tiguan. Объём двигателя составляет 1984 куб.см., мощность 180 л.с. У авто имеется специальный бампер, который помогает активнее зае…

Volkswagen Tiguan — Добротный семейный автомобиль https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/2685/ Год назад искали с женой удобный семейный автомобиль и выбор пал на Volkswagen Tiguan. Объём двигателя составляет 1984 куб.см., мощность 180 л.с. У авто имеется специальный бампер, который помогает активнее зае…

Виталий Вавринюк

21 октября 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan

Свою вторую машину выбирал с ориентацией на безопасность и хорошие ходовые качества. Именно поэтому на смену старенькому Opel пришёл Volkswagen Tiguan Comfortline. Конечно же, автомобиль отличается высоким качес…

Volkswagen Tiguan — Тигуан: моя вторая машина https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/2527/ Свою вторую машину выбирал с ориентацией на безопасность и хорошие ходовые качества. Именно поэтому на смену старенькому Opel пришёл Volkswagen Tiguan Comfortline. Конечно же, автомобиль отличается высоким качес…

Виталий Кравченко

12 октября 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.7

Volkswagen Tiguan 1.4 RT Highline

Выбирал автомобиль долго и нудно, так как надолго и чтобы без разочарований. В результате взял в салоне Volkswagen Tiguan внедорожник, чему очень рад сегодня. Отличная машина с хорошим двигателем, КПП без пробле…

Volkswagen Tiguan — Покупка Тигуан после долгих мук выбора https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1012/ Выбирал автомобиль долго и нудно, так как надолго и чтобы без разочарований. В результате взял в салоне Volkswagen Tiguan внедорожник, чему очень рад сегодня. Отличная машина с хорошим двигателем, КПП без пробле…

Тимур

29 июня 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan 1.4 MT Trendline

Около 4 лет назад я приобрёл в автосалоне официального дилера Volkswagen Tiguan. После осмотра и прохождения тест драйва, остался доволен первыми впечатлениями об авто. Машина реально порадовала динамикой и плав…

Volkswagen Tiguan — Тигуан хорош за свои деньги, но не идеален https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1008/ Около 4 лет назад я приобрёл в автосалоне официального дилера Volkswagen Tiguan. После осмотра и прохождения тест драйва, остался доволен первыми впечатлениями об авто. Машина реально порадовала динамикой и плав…

German

3 июня 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.3

Volkswagen Tiguan 1.4 MT Trendline

Давно хотел полноприводный кроссовер, поэтому выбрал Фольксваген Тигуан. Машина меня более чем устраивает. Хотя мотор зимой съедает почти 14 литров за сотку по городу, а на трассе 10 литров, это недостаток пере…

Volkswagen Tiguan — Полноприводный кроссовер Фольксваген Тигуан https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1013/ Давно хотел полноприводный кроссовер, поэтому выбрал Фольксваген Тигуан. Машина меня более чем устраивает. Хотя мотор зимой съедает почти 14 литров за сотку по городу, а на трассе 10 литров, это недостаток пере…

Ринат Каюмов

16 мая 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.5

Volkswagen Tiguan 2 RT Comfortline

Решила поменять свой Гольф на более презентабельное авто. Признаюсь честно, я фанат Фольтсвагенов. Выбирала между Туарегом и Тигуаном. Тигр победил и то, его спасло дело случая. Проходила мимо салона, увидела за…

Volkswagen Tiguan — Тигуан устроил во всем https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1004/ Решила поменять свой Гольф на более презентабельное авто. Признаюсь честно, я фанат Фольтсвагенов. Выбирала между Туарегом и Тигуаном. Тигр победил и то, его спасло дело случая. Проходила мимо салона, увидела за…

Luda

14 мая 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.8

Volkswagen Tiguan 1.4 MT Comfortline

Купил Фольксваген Тигуан полгода назад и доволен, за это время машина показала себя только с лучшей стороны. Во-первых, удобная коробка автомат, хороший двигатель, комфортная подвеска. Во-вторых, автомобиль с по…

Volkswagen Tiguan — Опыт после покупки Тигуана https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1011/ Купил Фольксваген Тигуан полгода назад и доволен, за это время машина показала себя только с лучшей стороны. Во-первых, удобная коробка автомат, хороший двигатель, комфортная подвеска. Во-вторых, автомобиль с по…

Влад Смолянов

8 мая 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.8

Volkswagen Tiguan 1.4 RT Comfortline

После наступления нового года решила купить новый автомобиль. До этого каталась на Шкода Йети. Стала счастливой обладательницей Фольксвагена Тигуан. Выбрала комплектацию Сити, пакет Инновации. Но это всё не так…

Volkswagen Tiguan — Tiguan свой просто обожаю! https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1009/ После наступления нового года решила купить новый автомобиль. До этого каталась на Шкода Йети. Стала счастливой обладательницей Фольксвагена Тигуан. Выбрала комплектацию Сити, пакет Инновации. Но это всё не так…

Андрей Л

3 мая 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 5

Volkswagen Tiguan 2 RT Highline

Если вы понимаете в автомобилях, то знаете, что в классе кроссоверов есть Тигуан и все остальные. Ультракачественный, быстрый, рулежный, просторный автомобиль со всеми опциями премиум- машин. Я покупал вообще не…

Volkswagen Tiguan — Спустя полтора года владения доволен, как в день покупки https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1006/ Если вы понимаете в автомобилях, то знаете, что в классе кроссоверов есть Тигуан и все остальные. Ультракачественный, быстрый, рулежный, просторный автомобиль со всеми опциями премиум- машин. Я покупал вообще не…

MashaVW

30 апреля 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.8

Volkswagen Tiguan 1.4 RT Comfortline

Машину выбирал головой, нужен был небольшой паркетник, желательно с полным приводом и коробкой автомат. На эту роль подходило очень много автомобилей, но я остановил свой выбор на Тигуане. Понравился салон, внеш…

Volkswagen Tiguan — Отличный паркетник на каждый день https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1005/ Машину выбирал головой, нужен был небольшой паркетник, желательно с полным приводом и коробкой автомат. На эту роль подходило очень много автомобилей, но я остановил свой выбор на Тигуане. Понравился салон, внеш…

Ольга Викторивна

8 апреля 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.7

Volkswagen Tiguan 1.4 RT Connect Plus

Внедорожник Volkswagen Tiguan у меня уже второй. Мне он нравится во всем – дизайном, комфортом, ходовыми качествами. Как знать, возможно и третье авто тоже будет Тигуан. Ну пока речь о втором. Робот, дизель, 150…

Volkswagen Tiguan — Мой второй Volkswagen Tiguan https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1016/ Внедорожник Volkswagen Tiguan у меня уже второй. Мне он нравится во всем – дизайном, комфортом, ходовыми качествами. Как знать, возможно и третье авто тоже будет Тигуан. Ну пока речь о втором. Робот, дизель, 150…

VeryVeryGood

7 марта 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.8

Volkswagen Tiguan 2 RT Sportline

Хочу поделиться с вами впечатлениями пользования Фольцом Тигуаном. Покупал я его с 1.4 литровым двигателем с 125 лошадками и с 6-ступенчатой механической коробкой передач. Езжу на нем второй год и поэтому уже ес…

Volkswagen Tiguan — Презентабельно и дорого это про Фолькс https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/review/1015/ Хочу поделиться с вами впечатлениями пользования Фольцом Тигуаном. Покупал я его с 1.4 литровым двигателем с 125 лошадками и с 6-ступенчатой механической коробкой передач. Езжу на нем второй год и поэтому уже ес…

Виктор Андропов

2 марта 2019 г.

Volkswagen

Tiguan 2021 Volkswagen Tiguan 2021 2016 – 2020, II https://autospot.ru/brands/volkswagen/tiguan/suv/spec/

5.0 0.1 4.7

Арендный карантин. Плюсы и минусы для предпринимателей

Беспрецедентные ограничительные меры, принятые государством в целях борьбы с распространением коронавирусной инфекции COVID-19, напрямую затронули множество компаний. Ограничения коснулись в том числе тех, кто осуществляет свою деятельность в арендованных зданиях и помещениях. Чтобы снизить потери арендаторов Правительство и Президент предусмотрели ряд мер поддержки.

Сначала предпринимателям дали возможность отсрочить уплату арендных платежей за пользование государственным имуществом (Распоряжение Правительства от 19.03.2020 № 670-р «О мерах поддержки субъектов малого и среднего предпринимательства»). Позднее Президент подписал Федеральный закон от 01.04.2020 № 98-ФЗ «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации по вопросам предупреждения и ликвидации чрезвычайных ситуаций», далее — закон № 98. Данный закон касается и договоров аренды частного имущества. Принятые властями решения демонстрируют небывалое вмешательство публичной власти в гражданско-правовые отношения частных лиц, последствия которого для гражданского оборота пока трудно оценить. В частности, арендаторы недвижимости, которые пострадали от пандемии, вправе требовать от арендодателя, даже если это частное лицо, отсрочку уплаты арендных платежей, а в некоторых случаях, уменьшения размера арендной платы за 2020 год (ч. 1, 3 ст. 19 Закона № 98).

Для арендаторов также существует проблема — льготой смогут воспользоваться не все. Кроме того, задолженность все равно придется оплатить. 

Подробнее о минусах и плюсах арендного карантина — читайте в статье.

Отсрочка по уплате арендных платежей

Арендатор вправе обратиться с просьбой об отсрочке внесения арендной платы. В таком случае арендодатель обязан заключить с ним соглашение об этом (ч.1 ст. 19 Закона № 98). При этом арендатор освобождается от ответственности за неуплату арендных платежей в период отсрочки.

Однако подобное правовое регулирование вызывает вопросы с точки зрения соответствия его общим принципам гражданского права: принципу свободы договора и его обязательности, принципу равенства участников гражданских правоотношений. В данном случае законодатель своей волей полностью переносит связанные с пандемией риски арендатора на арендодателя, что вряд ли обеспечивает баланс интересов сторон договора. Конституционный Суд неоднократно отмечал, что свобода договора, как и иные конституционные права и свободы, может быть ограничена федеральным законом. Но это можно сделать только в той мере, в какой это необходимо в целях защиты основ конституционного строя, нравственности, здоровья, прав и законных интересов других лиц, обеспечения обороны страны и безопасности государства. Кроме того, такие ограничения должны отвечать требованиям справедливости, быть адекватными, пропорциональными и соразмерными (постановления КС от 18.07.2003 № 14-П, от 23.01.2007 № 1-П, от 12.07.2007 № 10-П, от 28.01.2010 № 2-П, от 16.07.2018 № 32-П).

Минусы для арендатора. Воспользоваться правом на отсрочку уплаты платежей смогут не все арендаторы. Эта мера поддержки распространяется только на юридических лиц и ИП, которые осуществляют деятельность в отраслях, наиболее пострадавших в результате распространения коронавируса (определены постановлением Правительства от 03.04.2020 № 434). Кроме того, договор аренды должен быть заключен до введения органами государственной власти субъектов РФ режима повышенной готовности или чрезвычайной ситуации в связи с коронавирусной инфекцией. Такие требования установило Правительство в постановлении от 03.04.2020 № 439 «Об установлении требований к условиям и срокам отсрочки уплаты арендной платы по договорам аренды недвижимого имущества», далее — постановление № 439.

Также в этом документе прописали, что отсрочку в размере всей арендной платы, предусмотренной договором, арендодатель должен предоставить только на период действия режима повышенной готовности или чрезвычайной ситуации. Когда действие особого режима закончится, арендатор может рассчитывать на отсрочку только половины суммы арендной платы, сроком до 1 октября 2020 года. Задолженность, которая образовалась таким образом, необходимо погасить в период с 1 января 2021 года до 1 января 2023 года равными платежами, не более половины ежемесячной арендной платы по договору, не чаще одного раза в месяц. При этом отсрочка не распространяется на платежи за коммунальные услуги, которые арендатор должен вносить в обычном порядке.

Минусы для арендодателя. Предусмотренная законом № 98 отсрочка фактически лишает арендодателей доходов от аренды на полгода. При этом в качестве поддержки арендодателей в период кризиса Правительство лишь упоминает о неких временных послаблениях в уплате налога на имущество, земельного налога и арендной платы за публичную землю. Причем в постановлении № 439 это сформулировано в виде рекомендаций региональным властям. Федеральный законодатель не устанавливает никаких гарантий или условий такой поддержки. Поэтому утверждать, что предоставленные арендодателям льготы в денежном выражении соразмерны их фактическим финансовым потерям, по меньшей мере преждевременно.

Уклонение от заключения соглашения об отсрочке грозит арендодателю судебным разбирательством. Арендатор вправе обратиться в суд с иском о понуждении к заключению такого соглашения (п. 38 постановления Пленума ВС от 25.12.2018 № 49 «О некоторых вопросах применения общих положений Гражданского кодекса Российской Федерации о заключении и толковании договора»). Арбитражный суд при рассмотрении такого спора в условиях существующего правового регулирования, скорее всего, встанет на сторону арендатора.

По этой причине арендодателям следует учитывать новую обстановку при коммерческом планировании в текущем году, а также изучить льготы, предоставляемые арендодателям в соответствующем регионе. Если потери окажутся непосильными, то можно попробовать досрочно расторгнуть договор аренды в связи с существенным изменением обстоятельств (ст. 451 ГК). Однако необходимо иметь в виду, что судебная практика по применению данной статьи Гражданского кодекса до настоящего времени остается весьма противоречивой.

Уменьшение арендной платы

Арендатор вправе потребовать уменьшения арендной платы за 2020 год в случае невозможности использования имущества в связи с предпринимаемыми государством мерами по борьбе с пандемией. Такая возможность предусмотрена в части 3 статьи 19 закона № 98. Однако не вполне ясно, что понимается под невозможностью использования имущества. Также законодатель не установил границы и условия уменьшения арендной платы, что может создать проблемы на практике.

Минусы для арендатора. Арендатор не сможет рассчитывать на уменьшение арендной платы, если он продолжает свою деятельность в помещении, пусть и в урезанном виде. Так, арендатор может изменить порядок обслуживания клиентов и продолжить работу. Например, арендатор помещения под ресторан может продолжить обслуживать клиентов, если организует доставку. Это значит, что в арендуемом помещении продолжает работать кухня. Поэтому в данном случае арендатор может требовать только отсрочки уплаты арендных платежей в соответствии с частью 1 статьи 19 закона № 98. Если арендатор в такой ситуации полностью закрыл ресторан, хотя имел возможность просто изменить условия работы, то прекращение им деятельности может быть расценено как его собственное коммерческое решение. В таком случае арендатору также может быть отказано в уменьшении арендной платы. Теоретически данную логику можно применить и к иным видам деятельности, ограниченным в связи с пандемией. Например, в закрытом для посетителей магазине одежды продолжает храниться товар, в кинотеатре или любом ином объекте также остается имущество арендатора. Следовательно, какое-то ограниченное использование арендованного помещения всегда имеет место, пока оно не освобождено арендатором и не возвращено арендодателю. То есть, арендатору необходимо обосновать и доказать факт невозможности использования арендованного имущества.

Минусы для арендодателя. Если коммерческая деятельность арендатора в связи с решением властей по факту приостановлена, арендодателю будет довольно сложно опровергнуть довод о невозможности использования арендованного помещения. Даже когда в помещении остается имущество арендатора. Ведь хранение — это не та цель использования арендованного помещения, на которую вправе был рассчитывать арендатор при заключении договора. Особенно, если в договоре назначение арендованного имущества четко прописано. Дополнительные вопросы создает отсутствие критериев уменьшения арендной платы.

Полностью освободиться от платы за аренду не получится Когда использование объекта аренды в определенных договором целях невозможно по обстоятельствам, за которые арендатор не отвечает, арендатор освобождается от уплаты арендной платы за этот период. На допустимость такого подхода указывал Верховный Суд (п. 4 Обзора судебной практики ВС № 2 за 2015 год, утв. Президиумом ВС от 26.06.2015). Аналогичные выводы содержатся в целом ряде судебных актов, например, п. 5 Обзора судебной практики ВС № 3 за 2017, утв. Президиумом ВС от 12.07.2017, постановлениях АС Дальневосточного округа от 15.05.2018 № Ф03-824/2018 по делу № А73-8485/2017; от 09.09.2014 № Ф03-3907/2014 по делу № А73-14050/2013.

Однако данная позиция судов была сформирована по спорам, где невозможность использования арендованного имущества была связана с тем или иным изменением характеристик самого объекта аренды: по вине арендодателя, по вине третьих лиц либо в силу воздействия случайных обстоятельств. Но в период пандемии качества объекта аренды не меняются. Приостановление его использования вызвано исключительно той деятельностью, которую в нем ведет арендатор. В этой связи более обоснованным выглядит не полное освобождение арендатора от арендной платы на время действия ограничительных мер, а уменьшение ее размера, как это буквально и указано в части 3 статьи 19 закона № 98.

Конкретную сумму уменьшения стороны могут определить своим соглашением, а в случае спора — передать данный вопрос на рассмотрение суда. При этом суд встанет перед сложной задачей определения баланса интересов сторон с учетом всех фактических обстоятельств конкретного дела. В данной категории дел может оказаться полезным опыт судебного применения пункта 4 статьи 614 ГК. В этой норме законодатель установил право арендатора требовать уменьшения арендной платы, если в силу обстоятельств, за которые он не отвечает, условия пользования, предусмотренные договором аренды, или состояние имущества существенно ухудшились.

В российской IP-АТС по просьбе военных заменили Intel на «Эльбрусы»

14 Июня 2018 10:1814 Июн 2018 10:18 | Поделиться

НИИ «Масштаб» выпустил версию своей IP-АТС «Александрит», в которой вместо стандартных процессоров Intel использованы отечественные «Эльбрусы» — военным потребовался более полный уровень импортозамещения.

От Intel к «Эльбрусам»

Входящий в «Ростех» санкт-петербургский НИИ «Масштаб» выпустил вариант своей цифровой автоматической телефонной станции (АТС) «Александрит» на российских четырехъядерных процессорах «Эльбрус 4С». В организации рассказали CNews, что в стандартной комплектации данная АТС оснащается чипами Intel, и ее адаптация под российское «железо» была осуществлена по просьбе военных, для которых актуальным является полное импортозамещение в используемом ими оборудовании.

«Александрит» был представлен в 2014 г., а о теоретической возможности задействовать в нем отечественные микропроцессоры (в том числе «Байкалы») разработчики, в частности, заверяли в марте 2015 г. Законченная версия на «Эльбрусах» была показана в начале июня 2018 г. на конференции «Цифровая индустрия промышленной России» (ЦИПР) в татарстанском Иннополисе.

«Александрит» представляет собой аппаратно-программное решение в виде сервера (в новой версии — «Эльбрус 4.4») с IP-АТС, хотя софт может продаваться и отдельно. Станция управляется через веб-интерфейс и поддерживает все основные функции: переадресацию, запись разговора и т. д. Для переговоров могут использоваться не только IP-телефоны, но и обычные аппараты.

Базовая версия «Александрита» на Intel

Несмотря на специфичность вышеупомянутого «заказчика», потенциальными потребителями разработчики считают не только госсектор. Модификацию на российских чипах в сравнении с базовой в «Масштабе» называют более простой. Ее цену не сообщают, однако, по данным CNews, на рынке она будет восприниматься как высокая.

Возможности «Александрита»

В базовой версии «Александрита» на процессорах Intel помимо передачи голосового трафика и данных по протоколам IP-телефонии реализовано свыше 30 различных сервисов для индивидуальной настройки под конкретные задачи организации-пользователя.

Среди ее опций и возможностей — система прямого доступа к ресурсам IP-АТС (DISA), автосекретарь (IVR), конференцсвязь трех типов, передача факса с возможностью отправки на e-mail, перехват вызова, автоматический выбор канала связи, модификация номера, выбор одного из 16 уровней классов обслуживания абонентов, музыка на удержании и фоновая музыка, обратный вызов, объединение нескольких IP-АТС в сеть, импорт и экспорт настроек, эхоподавление, повторный набор до 10 последних номеров, удаленное абонентское управление, ограничение и блокировка вызовов, интеллектуальная маршрутизация, поддержка видео, персональная и глобальная телефонная книга, запрет определения номера.

Идеальный шторм на рынке полупроводников: вызовы и возможности

Бизнес

Из документации к АТС можно заключить, что базовой операционной системой для нее выступает отечественный Astra Linux Special Edition — защищенная ОС специального назначения для работы с информацией ограниченного доступа.

«Эльбрусы» для телефонии

Представленная АТС является не первым отечественным решением этого класса на «Эльбрусах». В частности, в конце июля 2017 г. стало известно о том, что на эти чипы свой программно-аппаратный комплекс для IP-телефонии портировал новосибирский производитель ИКТ-оборудования «Элтекс», входящий в число доверенных поставщиков «Ростелекома».

По итогам первых испытаний данного решения его разработчики заявили о производительности системы Softswitch ECSS-10 на уровне не менее 25 вызовов в секунду при емкости свыше 25 тыс. абонентов. Также система продемонстрировала способность поддерживать видеовызовы и транскодировать медиапотоки, доказала возможности масштабирования решения, резервирования в режиме active-active и построения систем с поддержкой географического резервирования.

Денис Воейков

Плюсы и минусы различных терапевтических форматов антител для разработки рекомбинантных противоядий

https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2018.03.004Получить права и контент

Основные моменты

•

Полный обзор зарегистрированных антител против животных токсины.

•

Обсуждаются плюсы и минусы форматов антител.

•

Фармакокинетика и фармакодинамика антител и их фрагментов.

•

Представлены тенденции развития рекомбинантных противоядий.

Реферат

Антител-технологии все шире применяются в области токсинологии. Благодаря многочисленным достижениям в иммунологии, синтетической биологии и исследованиях антител, исследуются различные подходы и форматы антител на предмет способности нейтрализовать токсины животных. Каждый из этих различных молекулярных форматов имеет свои терапевтические характеристики.В этом обзоре мы представляем обзор достижений, достигнутых в разработке антител, нацеленных на токсины, и обсуждаем преимущества и недостатки различных форматов антител в отношении их способности нейтрализовать токсины, фармакокинетических характеристик, склонности вызывать побочные реакции, состава , и выражение для целей исследований и разработок (НИОКР) и крупномасштабного производства. По-видимому, появляется тенденция исследований в отношении использования форматов человеческих антител, а также фрагментов антител с тяжелыми доменами верблюдовых из-за их совместимости с иммунной системой человека, полезных терапевтических свойств и способности производить эти молекулы с минимальными затратами.

Ключевые слова

Противоядие

Яд

Яд

Рекомбинантное противоядие

Антитела

Укус змеи

Укус скорпиона

Укус паука

Укус животного

000

000

Фармакология

0009 Дизайн противоядия

Побочные реакции

Забытые тропические болезни

Биотехнология

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2018 Авторы.Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

Xenopus: недооцененный модельный организм для изучения и моделирования генетических заболеваний человека — FullText — Cells Tissues Organs 2018, Vol. 205, № 5-6

Аннотация

Функция нормальных и дефектных генов-кандидатов для генетических заболеваний человека, которые быстро идентифицируются в большом количестве генетиками и биомедицинским сообществом в целом, будет лучше всего изучена на соответствующих модельных организмах, которые позволяют проводить высокоскоростную проверку и анализ. лежащих в основе онтогенетических, клеточных и молекулярных механизмов, а также создание моделей болезней для проверки терапевтических возможностей.Мы описываем и обсуждаем плюсы и минусы лягушки Xenopus , которая в прошлом широко использовалась для раскрытия механизмов развития, но недостаточно используется в качестве биомедицинской модели. Мы утверждаем, что Xenopus дополняет более часто используемых мышей и рыбок данио в качестве экономичной по времени и стоимости животной модели для изучения аллелей и механизмов заболеваний человека.

© 2018 S. Karger AG, Базель

---

Введение

Первые исследователи, изучающие эмбриологию земноводных, собирали образцы в дикой природе.Они зависели от параметров окружающей среды, которые они не могли контролировать, таких как погода весной, когда земноводные откладывают яйца в прудах и лужах [Hamburger, 1988; Гэрдон и Хопвуд, 2000]. Лягушка Xenopus впервые появилась в качестве эмбриологического лабораторного животного в Великобритании в начале 1900-х годов, когда впервые привлекла внимание зоологов, которые обнаружили, что они могут разводить экземпляры в аквариумах. Его прославление произошло в 1940-х и 1950-х годах, когда тестирование на беременность проводилось путем инъекции мочи потенциально беременных женщин под кожу самок лягушек: если присутствовал гонадотропин, самки реагировали откладыванием яиц [Gurdon and Hopwood, 2000]. Xenopus лягушки в исследования биологии развития были введены в начале 1950-х годов; Самым известным и знаменитым экспериментом этого периода, несомненно, была демонстрация Джоном Гардоном плюрипотентности соматического ядра [Gurdon et al., 1958]. Гурдон клонировал самое первое позвоночное животное путем переноса ядра в безъядерную оплодотворенную зиготу, эксперимент, получивший Нобелевскую премию примерно 54 года спустя в 2012 году. В последние три десятилетия 20-го века Xenopus широко использовался в лабораториях по всему миру, и очень много фундаментальных концепций клеточной биологии и развития были получены в результате работы с эмбрионами лягушки, в первую очередь молекулярной регуляции клеточного цикла [обзор в Philpott and Yew, 2008], первой идентификации многочисленных ключевых генов развития позвоночных, в том числе экспрессируемых в Организатор Спеманна [обзор в De Robertis et al., 2000] и основы многих сигнальных путей, в первую очередь передачи сигналов Wnt и BMP [rev. Cruciat and Niehrs, 2013; Бир и Де Робертис, 2015]. Таким образом, ценность и универсальность Xenopus в качестве модельного организма для механизмов развития позвоночных была доказана и никогда не обсуждалась.

Однако, когда дело доходит до оценки аллелей болезней человека, большинство клиницистов и генетиков обращаются к мышам и рыбкам данио, которые считаются настоящими модельными организмами для изучения механизмов заболеваний человека.Оба были созданы с самого начала как генетические модели, тогда как Xenopus — и земноводные в целом — превосходны как экспериментальные модели. Однако с развитием диплоида X. tropicalis в качестве лабораторного животного, полное секвенирование геномов X. laevis и X. tropicalis [Hellsten et al., 2010; Session et al., 2016], а также с появлением редактирования генома Xenopus также стал членом семейства генетических модельных организмов.Ряд трансгенных линий уже доступен в ресурсных центрах США и Европы (Xenbase.org; xenopusresource.org), а новые можно создать довольно быстро [Aslan et al., 2017; Морено-Матеос и др., 2017]. Гены-кандидаты и аллели генетических заболеваний человека выявляются с огромной скоростью: такие анализы, как исследования ассоциаций на уровне всего генома, GWAS, полное экзомное секвенирование, WES, а также секвенирование ДНК и РНК из здоровых и больных тканей, генерируют длинные списки генов-кандидатов. и аллели, которые заставляют биомедицинских исследователей быстро оценивать большие массивы данных с умеренными затратами [MacArthur et al., 2014; Самоча и др., 2014; Getwan, Lienkamp, ​​2017]. Требуются модели для проверки или исключения генов-кандидатов, а также для создания прогностических моделей, в которых можно разработать и протестировать варианты лечения.

У каждой модельной системы, конечно же, есть свои преимущества и свои ограничения. Мышь, например, как млекопитающее, имеет геном, очень похожий на человеческий, и имеет огромный набор инструментов для генетических манипуляций. Однако мышиные модели требуют дорогостоящих вложений в содержание и содержание животных, размеры помета небольшие, в среднем 8 потомков, только часть из которых будет нести мутантный аллель, а анализ мутантных мышей требует много времени.Рыбки данио производят большое количество потомства, дешевле в содержании, имеют хорошо развитые генетические подходы и множество доступных мутантных и репортерных линий. Однако дупликация генома костистых тел приводит к субфункционализации многих биомедицинских генов и потере синтении по сравнению с млекопитающими [Garcia de la Serrana et al., 2014]. Возможность прямого наблюдения за эмбриональным развитием и даже визуализации живых клеток широко использовалась с большим успехом у рыбок данио.Однако это не уникальная особенность рыбок данио; развитие почек и миграция клеток нервного гребня, например, были непосредственно визуализированы у живых эмбрионов лягушки с большим временным и пространственным разрешением [Lienkamp et al., 2010, 2012; Сабо и др., 2016; Getwan, Lienkamp, ​​2017]. У рыбок данио также есть определенные ограничения, связанные с конкретными органами. Например, они не могут моделировать человеческие синдромы, которые влияют на конечности или пальцы, легкие или диафрагму, структуры, которые участвуют во многих врожденных синдромах человека, но отсутствуют у рыб.Кроме того, хотя сердце рыбок данио было отличной моделью для изучения регенерации, наличие только одного предсердия и одного желудочка не может полностью моделировать пороки развития четырехкамерного сердца человека. Лягушка Xenopus , как описано ниже, имеет большой потенциал для дополнения более известных мышей и рыбок данио и, таким образом, для значительного расширения репертуара моделей животных для прогнозирования болезней человека. В этом обзоре описаны многие экспериментальные характеристики Xenopus , которые позволяют проводить подробные исследования генов-кандидатов, с целью предупредить клинических ученых и генетиков о потенциале этой установленной и все еще актуальной, исходной модели на животных.

Африканская лягушка,

Xenopus

В настоящее время в исследованиях используются два вида лягушек: X. laevis (южноафриканская когтистая лягушка), которая использовалась десятилетиями, и X. tropicalis (западная). когтистая лягушка), который недавно был введен во многие лаборатории [Tandon et al., 2017]. X. tropicalis — генетически диплоидный вид, выращиваемый при температуре 24–26 ° C, тогда как X. laevis , который предпочитает более холодные воды с температурой 18 ° C, является продуктом плодородной гибридизации двух видов, i .е., содержит дублированный набор генов и хромосом. Лягушки как земноводные, конечно, далеки от людей генетически, но у них есть общая родословная четвероногих, более близкая по времени эволюции, чем костистые рыбы. Полное секвенирование генома и тщательная аннотация обоих видов показывают удивительно высокую степень синтении с людьми; даже в дублированном геноме X. laevis , поскольку два набора хромосом не перекрещиваются, субфункционализация дублированных копий была меньше [Hellsten et al., 2010; Session et al., 2016; Харланд и Гилкрист, 2017]. Около 90% генов болезней человека имеют гомологи как у , так и у Xenopus видов, и сохранность последовательностей обычно высока, что является необходимым условием для любой прогнозирующей модели на животных. Многие лаборатории используют оба вида параллельно, т. Е. Используют X. tropicalis для редактирования генома и X. laevis для большинства других исследований.

Главной особенностью этой модели, которая делала ее привлекательной в прошлом и показывает большие перспективы для будущего использования, является простота доступа к яйцам и эмбрионам: самки откладывают большие кладки из тысяч яиц, а откладка яиц индуцируется за счет гормональный прайминг; В наши дни исследователи используют тот же принцип, который сделал лягушку системой для тестирования на беременность.Яйца можно оплодотворять путем естественного спаривания или искусственно путем добавления сперматозоидов из семенников, которые в случае X. laevis можно хранить в течение нескольких дней в холодильнике без потери способности к оплодотворению. Кроме того, яйца крупные, диаметром 1,2 и 0,8 мм у X. laevis и X. tropicalis соответственно. Это позволяет легко вводить внутриклеточные микроинъекции либо в зиготу, либо в определенные бластомеры на ранних стадиях развития, вплоть до стадии примерно до 64 клеток, когда клетки становятся слишком маленькими, чтобы их можно было легко нацелить.Более того, происхождение отдельных клеток хорошо известно [Jacobson and Moody, 1984; Moody, 1987, 2000], т.е. инъекции могут быть очень точно нацелены на ткани и органы на более поздних стадиях развития, вплоть до поздней стадии головастика, непосредственно перед метаморфозом, который достигается через 5 дней развития и при котором органогенез в основном завершается. (Рисунок 1). Таким образом, точные манипуляции могут выполняться на ранних стадиях расщепления в первые несколько часов развития, а их последствия можно отслеживать непрерывно в течение следующих нескольких дней на протяжении всего развития органа.Таким образом, можно манипулировать большим количеством эмбрионов, которые очень быстро развиваются до желаемых стадий органогенеза, что позволяет получать результаты в короткие сроки. Поскольку самки откладывают яйца высокого качества много раз в год, а содержание в них относительно недорогое, затраты на животных намного ниже, особенно по сравнению с мышами.

Рис. 1.

Развитие эмбрионов X. laevis от оплодотворенного яйца до 5-дневного головастика. Показаны стадии развития, время и ключевые моменты времени для дифференциации лево-правой асимметрии, почки, желудочка мозга и кожных ресничек.Масштабная линейка, 250 мкм.

Уникальной особенностью, которой нет ни в одной другой модели животных, используемых в наши дни для оценки генетического заболевания человека, является возможность односторонних инъекций, что означает, что манипулируют только одной стороной эмбриона, а противоположная сторона служит внутренний контроль (рис. 2). Этот атрибут, который является следствием первого деления дробления, разделяющего левую и правую стороны эмбриона, очень важен при оценке фенотипических последствий экспериментальных манипуляций, поскольку вариации в экспрессии генов дикого типа иногда могут быть значительными для разных кладки эмбрионов.Возможность манипулировать очень большим количеством эмбрионов за эксперимент и возможность выбора образцов для анализа на основе нормального развития на контрольной стороне добавляет высокий уровень строгости, статистической значимости и воспроизводимости каждому исследованию.

Рис. 2.

Точное нацеливание инъекций на левую и правую сторону развивающегося эмбриона Xenopus . Зеленый и красный флуоресцентный краситель вводили в левый и правый бластомеры на стадии 4 клеток соответственно (схема слева и фотография на второй панели).Это разделение сохраняется на протяжении всего развития, как показано на эмбрионе на стадии бластулы в конце деления дробления, на эмбрионе нейрулы и головастике. Это позволяет выполнять односторонние манипуляции, то есть сторона, которой не манипулируют, может использоваться в качестве внутреннего контроля. Масштабная линейка, 250 мкм.

Большой размер яиц и эмбрионов, который отличает Xenopus лягушек как от рыбок данио, так и от мышей, по крайней мере, в течение первой трети эмбрионального развития, предлагает еще одно уникальное преимущество: достаточно материала для проведения протеомного анализа с управляемым количеством образцов. [Нагасава и др., 2013; Амин и др., 2014; Wühr et al., 2014, 2015; Пешкин и др., 2015]. С быстрым развитием протеомики эта характеристика, безусловно, станет более заметной в ближайшем будущем и, например, позволит проводить сравнительные исследования взаимодействия белков дикого типа и мутировавших белков. Следует упомянуть последнюю особенность, поскольку для многих, кто не знаком с лягушкой, она оказывается неожиданной: есть стволовые клетки, и они могут быть легко дифференцированы, чтобы развиться в определенные ткани и органы (рис. 3). Эти наивные клетки могут быть легко удалены из эмбриона в конце делений дробления, до начала гаструляции и спецификации зародышевых листков.Они находятся на анимальном полюсе, то есть на полюсе, направленном в противоположную сторону от вектора гравитации. Изолированные так называемые шапочки животных дифференцируются в неопределенные атипичные эктодермоподобные клетки при культивировании в чашке. Однако добавление или инъекция определенных факторов роста, факторов транскрипции или других индукторов, таких как ретиноевая кислота, трансформирует эти клетки во все виды тканей, будь то почки, сердце или поджелудочная железа (рис. 3) [обзор в Asashima et al. , 2009; Курисаки и др., 2010; Хосоя и др., 2012]). Кроме того, можно изучать морфогенетические движения, поскольку эксплантаты могут подвергаться так называемому расширению конвергенции [Keller et al., 2000; Keller, 2002], т. Е. Удлинение из-за интеркаляции клеток (рис. 3), процесс, который находится под контролем неканонической передачи сигналов Wnt, имеющий отношение ко многим заболеваниям человека [обзор в Xiao et al., 2017] .

Рис. 3.

Системы культивирования эксплантатов для изучения морфогенетических движений (конвергентное расширение). Слева: так называемые эксплантаты Келлера, которые содержат область организатора Спемана и поэтому удлиняются (расширяются и сходятся) в культуре. В этой системе неканоническая передача сигналов Wnt может быть изучена и обработана путем инъекции, например, мРНК в эту область на стадии 4 клеток и эксплантации в начале гаструляции.Справа: эксплантаты кепки животных могут быть дифференцированы путем инъекции или культивирования с индукторами, чтобы стать тканями поджелудочной железы, сердца и почек, среди других вариантов, доступных исследователю [см. Asashima et al., 2009].

Внутриклеточные микроинъекции — самый важный метод при использовании модели лягушки. Установка довольно проста: рассекающий микроскоп, оснащенный гибким источником света и устройством для удержания и направления инъекционной иглы. Сотни эмбрионов можно вводить в любой день.В большинстве лабораторий имеется ряд установок для инъекций, позволяющих оптимально использовать сцепления яиц, которые развиваются синхронно и, следовательно, должны вводиться в течение ограниченного периода времени в 30–45 минут или около того. Во многих случаях манипуляции касаются экспрессии генов; антисмысловые морфолиноолигомеры (МО), то есть одноцепочечные нуклеотидные цепи, несущие морфолино-кольцо вместо рибозы или дезоксирибозы, связываются с мРНК и препятствуют трансляции, если они связываются в начале AUG (блокирующие трансляцию МО или TBMO), или со сплайсингом, когда они покрывают донорный или акцепторный сайт сплайсинга (блокирование сплайсинга, или SBMO) [Heasman, 2002].Правильное нацеливание на интересующую ткань или орган обычно отслеживается путем совместного введения индикаторов клонов, например, флуоресцентного декстрана или GFP, нацеленного на мембрану, которые позволяют отбрасывать образцы с ошибочным направлением, просто глядя в микроскоп. Специфичность МО, конечно, необходимо тщательно контролировать, поскольку нецелевые эффекты не могут быть исключены априори, как и при любых манипуляциях, требующих взаимодействия со специфическими нуклеотидными последовательностями, будь то геномные или на уровне РНК. Контроль включает использование более чем одного МО, дозозависимость и спасение фенотипов путем совместной инъекции спасательных мРНК, которые не являются мишенью для МО.Споры о специфике нацеливания на гены и мРНК являются давними и продолжаются и должны напоминать каждому исследователю о необходимости оставаться критичным и осторожным при интерпретации конкретного результата [Eisen and Smith, 2008; Блюм и др., 2015; Кок и др., 2015; Моултон, 2017; Gentsch et al., 2018]. В Xenopus редактирование генома с помощью технологии CRISPR / Cas9 легко выполняется и может служить для проверки использования МО, а также может использоваться в качестве действительного генетического инструмента в его собственных правах [Garfinkel and Khokha, 2017; Naert et al., 2017; Тандон и др., 2017; Блиц, 2018; Naert, Vleminckx, 2018]. Что касается анализа генов-кандидатов болезней человека и аллелей, оба метода успешно используются (см. Ниже). Однако взаимодействие генов, которое имеет центральное значение при изучении молекулярных механизмов, лежащих в основе заболеваний, с большой легкостью изучается с помощью МО [Blum et al., 2015]: дозы выбираются для двух или трех рассматриваемых генов, которые сами по себе не вызывают каких-либо фенотипических изменений в развитии.Дефекты, возникающие в результате их комбинированных инъекций, свидетельствуют о генетических взаимодействиях во многом таким же образом, как анализ сложных гетерозигот у мышей и рыбок данио (или моделей беспозвоночных, таких как Drosophila ). Кроме того, дозирование фенотипических эффектов дает преимущество предотвращения ранней эмбриональной летальности и, таким образом, изучения генов на стадиях развития, на которых соответствующие мутанты недоступны для анализа. Многие врожденные синдромы человека вызваны комбинацией гетерозиготных гипоморфных аллелей и поэтому лучше изучены за счет снижения уровня белка по сравнению с генетическими нулевыми аллелями.Кроме того, мутантные аллели человека можно легко экспрессировать в эмбрионах Xenopus , просто путем микроинъекции мутантных мРНК. Таким образом, аллели болезней могут быть функционально оценены либо в эмбрионах дикого типа, либо в образцах, в которых эндогенный ген был нокаутирован антисмысловыми МО [Blum et al., 2015].

Пригодность

Xenopus для изучения пороков развития и заболеваний человека

За последнее десятилетие международное сообщество Xenopus стало свидетелем смены акцентов с изучения основных биологических механизмов развития и клеточных биологических механизмов на анализ связанных с ними процессов. механизмам болезни в более широком смысле.Это может отражать политику финансирующих агентств, таких как США, где трансляционные исследования с большей вероятностью получат финансирование, чем чистая фундаментальная наука, или просто из-за биомедицинской задачи и потому, что у лягушки есть потенциал для существенного добавления знаний. Полный отчет о деятельности и успехах выходит за рамки данного обзора. Примеры случаев, в которых механизмы заболевания были выяснены в исследованиях на Xenopus , подробно описаны на веб-сайте сообщества (http: // www.xenbase.org/community/static/xenopuswhitepaper/2016/2016-XenopusWhitePaper-Final.pdf), который, кроме того, предоставляет обширную информацию для исследователей Xenopus в целом. Однако стоит привести несколько примеров, таких как, среди прочего, работа Бруно Реверсейда из Института медицинской биологии в Сингапуре, который использует Xenopus вместе с другими модельными организмами, будь то позвоночные или беспозвоночные, для раскрытия механизмов их развития. болезни человека. Например, аутосомно-рецессивная кутис-лакса, синдром, связанный, среди прочего, с дряблой и морщинистой кожей, вызывается мутациями в PYCR1 , который кодирует фермент, участвующий в метаболизме пролина.Нокдаун ортологичного гена в Xenopus привел к гипоплазии и появлению морщин на коже головастика, то есть смог смоделировать человеческое заболевание [Reversade et al., 2009]. Мутации в гомеодоменном факторе транскрипции IRX5 нарушают черепно-лицевое развитие и миграцию зародышевых клеток у людей. Когда ортолог Xenopus был отключен, миграция клеток-предшественников в жаберных дугах и гонадах была нарушена, что точно воспроизводило человеческое заболевание [Bonnard et al., 2012]. Последний и впечатляющий пример из лаборатории Reversade касается мутаций в SMCHD1 , который кодирует эпигенетический регулятор. Пациенты страдают крайне редким синдромом, при котором полностью отсутствует нос. Биохимические исследования эмбрионов Xenopus продемонстрировали, что мутации при заболеваниях приводят к аллелям увеличения функции, открытие, которое было бы невозможно, если бы просто следовали подходам с потерей функции [Gordon et al., 2017]. Педиатры Мартина Брюкнер и Мустафа Хоха из Йельского университета систематически идентифицировали гены и аллели у детей, страдающих врожденным пороком сердца (ВПС) [Fakhro et al., 2011; Босковски и др., 2013; Эндикотт и др., 2015; дель Визо и др., 2016; Griffin et al., 2018]. Серия громких публикаций продемонстрировала, что анализ генов-кандидатов на ИБС в Xenopus не только подтвердил гены болезни и мутации, но и привел к довольно неожиданным и впечатляющим открытиям, таким как идентификация протеазы, которая расщепляет рецептор Notch в процесс определения подвижных и неподвижных ресничек, необходимых для нарушения симметрии и асимметричного морфогенеза сердца [Boskovski et al., 2013]. Заболевание почек — еще одна очень многообещающая область, в которой Xenopus предлагает большой потенциал, потому что головастик различает один полностью функциональный нефрон с обеих сторон, что идеально подходит для изучения различных этапов развития почек от тубулогенеза до сегментации и активной фильтрации, опять же за один раз. -сторонний способ с его внутренним контролем [Lienkamp et al., 2012; Hoff et al., 2013; Лиенкамп, 2016]. Оба этих примера недавно были охвачены прекрасными обзорами, к которым отсылается заинтересованный читатель [Garfinkel, Khokha, 2017; Getwan, Lienkamp, ​​2017].

Большая группа разнообразных генетических заболеваний, которая особенно хорошо подходит для изучения в X enopus , представлена ​​так называемыми цилиопатиями [Fliegauf et al., 2007; Митчисон и Валенте, 2017]. Реснички, выступающие из поверхности клетки, могут действовать как антенны и укрывать рецепторы для всех видов внеклеточных сигналов (первичные реснички), или они могут быть подвижными, чтобы продвигать саму клетку (например, сперматозоид) или внеклеточные жидкости, окружающие ресничную ткань [ Маршалл и Нонака, 2006].Очень многие заболевания вызваны дефектными ресничками того или иного типа [Gerdes et al., 2009; Brown and Witman, 2014], с оценочной распространенностью до одного пациента на каждые 300–500 здоровых людей. Эти цифры предварительные, так как связь ресничек с болезнями продолжает обнаруживаться. Далее мы сосредоточимся на подвижных ресничках, так как это область наших собственных исследований и опыта. Нарушения у человека, вызванные дефектами подвижности ресничек, обобщаются как первичная цилиарная дискинезия (ПЦД) [Knowles et al., 2016; Бустаманте-Марин, Островски, 2017]. В основном они касаются очищения от слизи в дыхательных путях, где многоцелевые клетки (MCC) скоординированно бьются, транспортируя слизь, к которой прилипают вдыхаемые частицы и патогены, вверх по направлению к глотке (рис. 4). На сегодняшний день идентифицировано около 40 генов болезней, которые объясняют около двух третей PCD у пациентов. Ожидается, что до сих пор необъяснимые случаи вызваны дополнительным большим количеством генов. Такие гены-кандидаты на заболевание необходимо оценивать, и Xenopus является идеальной моделью для этого [Walentek and Quigley, 2017].

Рис. 4.

Сводка фенотипов PCD. За исключением подвижности сперматозоидов, все остальные легко исследуются на эмбрионах Xenopus .

Несмотря на то, что кожа личинок водная и не имеет дыхательных путей, она работает так же и выполняет ту же функцию, что и дыхательные пути человека: в эпителии находятся МКЦ и клетки, которые продуцируют слизь [Dubaissi and Papalopulu, 2011; Брукс и Уоллингфорд, 2014, 2015; Dubaissi et al., 2014; Валентек и др., 2014]. Кожа служит первой линией защиты, т.е.То есть патогены, прилипшие к слизи, переносятся скоординированными движениями ресничек, которые переносят слизь вдоль образца, от головы к хвосту и от головастика (рис. 4). Дефектные реснички делают личинок восприимчивыми к бактериальным инфекциям, состоянию, которое является летальным во время развития [Dubaissi et al., 2014]. Кожные МКК могут быть легко визуализированы гистологически путем окрашивания аксонем ресничек и функционально с помощью высокоскоростной видеографии (рис. 5; онлайн-приложение 1; все материалы онлайн-приложений см. На ww.karger.com/doi/10.1159/0004

). Подвижностью также можно легко манипулировать, например, сбивая dnah9 , аксонемальный динеин, который критически необходим для многих подвижных ресничек [Vick et al., 2009] (онлайн-приложение, фильм 2). Дефекты ресничек, такие как те, которые возникают в результате нокдауна dnah9 , сразу становятся очевидными у личинок, прежде чем мышцы полностью функционируют. Личинки, лежащие на одной стороне, перемещаются парящими движениями по покрытой агаром чашке, в которой они выращиваются, из-за биения ресничек их кожных МКЦ.Измеряя скорость парящего движения на контрольной стороне, а затем переворачивая индивидуума и выполняя те же измерения на экспериментальной стороне, можно обнаруживать дефекты ресничек без сложного и дорогого оборудования [Vick et al., 2009]. Просто наблюдая за поведением эмбриона в парении, можно определить, за какими манипуляциями следует следовать более трудоемкими и дорогостоящими дополнительными экспериментами, такими как гистологическая оценка параметров ресничек (количество, длина, ориентация и подвижность) или высокоскоростные покадровая видеосъемка для непосредственного анализа ритма.Подвижность должна быть восстановлена ​​при совместной инъекции мРНК дикого типа, не нацеленной на МО. Любой аллель гена, который влияет на подвижность ресничек при потере функции, может быть протестирован в тех же условиях, то есть путем совместной инъекции рассматриваемого аллеля вместе с блокирующим MO. Xenopus — единственная модель позвоночных, которая позволяет проводить быструю и неинвазивную оценку аллелей болезни PCD человека in vivo, избегая артефактов, которые могут возникнуть в культивируемых клетках, таких как межфазные культуры воздух-жидкость. Градуированный ответ также может стать видимым с помощью этих типов анализа, например, аллели, которые приводят не к полному параличу движения ресничек, а к измененным паттернам биений или более медленной моторике.

Рис. 5.

Мукоцилиарный эпителий личиночной кожи. Вверху: иммунофлуоресцентный анализ эпидермиса личинок, совместно окрашенного на границы клеток (актин) фаллоидином и на реснички с помощью антитела, направленного против ацетилированного α-тубулина. Внизу: подвижность ресничек, отображаемая на горизонтальном кимограмме эпидермального ресничного пучка у эмбриона морфанта дикого типа (слева) или dnah9 (справа) для визуализации биения ресничек в течение 0,5 с. Масштабная линейка 25 мкм.

Пациенты с PCD, в зависимости от мутировавших генов и характера мутаций, также могут страдать от неподвижных ресничек на других участках и органах. Для некоторых из них, таких как неподвижность сперматозоидов, которая часто встречается у людей [Inaba and Mizuno, 2016], использование метода микроинъекций Xenopus не рекомендуется, поскольку манипуляции не переносятся на следующее поколение без использования трансгенного подхода. (что возможно, но потребуются месяцы и обширные разрешения).Однако дефекты, которые легко изучаются с помощью быстрых и эффективных подходов Xenopus , включают дефекты латеральности и гидроцефалию [Blum et al., 2009; Hagenlocher et al., 2013; Блюм, Отт, 2018b]. Оба они заметны у пациентов с PCD и вызваны дефектами ресничек в лево-правом организаторе (LRO) и в желудочках эмбрионального мозга, соответственно [Zariwala et al., 2007].

LRO — первая ткань в развивающемся эмбрионе, в которой необходимы подвижные реснички [Blum et al., 2014b; Шинохара и Хамада, 2017]. Моноцилифицированный эпителий формируется во время гаструляции и располагается на дорсальной средней линии эмбриона нейрулы, в задней хорде («узле») мышей, в пузырьке Купфера у рыбок данио и на крыше примитивного кишечника или архентерона у лягушек [Blum et al., 2007]. Хотя LROs несколько различаются по своей морфологии, они являются гомологичными структурами и включают гомологичные гены для своей функции [Blum et al., 2014a]. В Xenopus последовательность событий, ведущих к асимметричному морфогенезу органа и его размещению в головастике, особенно хорошо изучена и доступна для манипуляций и анализа на всех этапах, от foxj1 -зависимой спецификации ткани-предшественника LRO до левой жидкости. поток в LRO и к лево-асимметричной индукции сигнального каскада Nodal в мезодерме левой латеральной пластинки, что в конечном итоге приводит к асимметрии органов [Blum et al., 2014b]. Мутации в генах PCD человека могут приводить или не приводить к лево-правым дефектам; если они возникают, они легко обнаруживаются вместе с другими дефектами в ходе того же эксперимента: нокдаун соответствующего гена. Этот анализ выявит еще один дефект, если он присутствует, а именно гидроцефалию, то есть расширенные желудочки головного мозга, которые — среди других причин — могут возникать из-за дефектных МСС головного мозга (рис. 4). Мозговый поток, продуцируемый этими MCC, можно визуализировать у головастиков Xenopus [Hagenlocher et al., 2013], и параметры ресничек, такие как длина и поляризация, одинаково доступны. Таким образом, за исключением подвижности сперматозоидов, весь спектр дефектов PCD доступен для анализа у головастиков Xenopus в течение нескольких дней, как только инструменты для манипуляции будут доступны и будут протестированы на специфичность.

Функция ресничек, связанная с PCD, в большинстве случаев (дыхательные пути, LRO, мозг) требует ориентированного расположения ресничек, чтобы производить направленный поток внеклеточной жидкости. Ориентация ресничек регулируется путём планарной полярности клеток под контролем неканонической передачи сигналов Wnt [Shinohara and Hamada, 2017].Ориентация вектора PCP, однако, находится под биомеханическим контролем, а именно под физическим напряжением, вызываемым конвергентным движением вытягивания, которое формирует развивающийся эмбрион во время гаструляции [Shook et al., 2018]. Эта связь только недавно была установлена ​​в исследованиях Xenopus . Chien et al. [2018] эксплантировали презумптивную кожу или ткани LRO и применили искусственную деформацию к эксплантам, т.е. они засасывали эксплантаты в стеклянные капилляры, чтобы имитировать силы деформации гаструляции , , что было бы невозможно в любой другой модели позвоночных [Chien et al., 2015; Блюм, Отт, 2018а]. Их работа красиво и убедительно показала, что напряжение требуется для генерации вектора PCP, для удлинения ресничек и подвижности. Эти силы, по всей вероятности, также влияют на цилиопатии, такие как PCD. Ни один ген-кандидат еще не был оценен таким способом, но такой анализ легко выполнить в Xenopus.

Мы находимся в процессе анализа набора генов-мишеней foxj1 , которые лаборатория Gossler в Ганновере (Германия) определила у мышей как гены-кандидаты PCD [Weidemann et al., 2016; Stauber et al., 2017]. Интересно, что нокдаун некоторых из этих генов демонстрирует четкие фенотипы, связанные с ресничками у Xenopus , хотя генетически нулевые мыши полностью нормальны [unpubl. данные Achim Gossler, T.O. и М.Б.]. Эти находки указывают на генетическую компенсацию нуль-мутаций членами семьи, феномен, впервые описанный у рыбок данио [Rossi et al., 2015] и широко признанный у мышей. Этот вывод также подчеркивает, что для оценки механизмов генетических заболеваний человека следует использовать более одного модельного организма для осторожной интерпретации экспериментальных данных.

Заключение и перспективы

Лягушка Xenopus внесла значительный вклад в наше понимание основных эмбриологических и клеточно-биологических принципов развития, от плюрипотентности ядра соматической клетки до выяснения организатора Спемана и основных сигнальных путей. Экспериментальный и молекулярный репертуар, доступный для точного и контролируемого манипулирования взаимодействиями, связанными с развитием, и генами, имеющими отношение к развитию, позволяет этим видам стать полноправными членами небольшой группы прогнозирующих животных моделей для изучения механизмов заболеваний человека.Мы предполагаем, что лягушка будет играть критически важную роль в биомедицинских исследованиях, и призываем клинические и генетические сообщества использовать эту модель вместе с более распространенными мышами и рыбками данио. Задача быстрой и надежной оценки генов-кандидатов требует параллельного использования всех моделей и тщательного сравнения результатов. Сообщество лягушек готово удовлетворить спрос и готово сотрудничать и вносить свой вклад. Выгода будет обоюдной для науки и пациентов — этот шанс нельзя упускать.

Заявление о раскрытии информации

Мы подтверждаем отсутствие конфликта интересов.

Список литературы

1. Амин Н.М., Т.М. Греко, Л.М. Кученброд, М. Ригни, М.-И. Чанг, Дж.Б.Уоллингфорд, И.М.Криста, Ф.Л. Конлон (2014) Протеомное профилирование сердечной ткани путем выделения ядер, помеченных в определенных типах клеток (INTACT). Развитие 141: 962–973.
2. Asashima, M., Y. Ito, T. Chan, T. Michiue, M. Nakanishi, K. Suzuki, K. Hitachi, K. Okabayashi, A. Kondow, T. Ariizumi (2009) Органогенез in vitro из недифференцированных клеток в Xenopus.Дев Дин 238: 1309–1320.
3. Аслан Ю., Таджуидже Э. Zorn, S.-W. Cha (2017) Высокоэффективная немозаичная CRISPR-опосредованная knock-in и indel мутация в F0 Xenopus. Развитие 144: 2852–2858.
4. Бир, Э., E.M. De Robertis (2015) Развитие эмбриона. Градиенты BMP: парадигма морфоген-опосредованного формирования паттерна развития. Наука 348: aaa5838.
5. Блиц, И. (2018) Первичная трансплантация зародышевых клеток для рывка на основе CRISPR / Cas9 в Xenopus. J Vis Exp 132: e56035.
6. Блюм, М., П. Андре, К. Мудерс, А. Швейкерт, А. Фишер, Э. Битцер, С. Богуш, Т. Бейер, H.W.M. van Straaten, C. Viebahn (2007) Реснички и экспрессия генов различают узел и заднюю хорду у эмбриона млекопитающих. Дифференциация 75: 133–146.
7. Блюм, М., Бейер Т., Т.Вебер, П. Вик, П. Андре, Э. Битцер, А. Швейкерт (2009) Xenopus, идеальная модельная система для изучения лево-правой асимметрии позвоночных. Дев Дин 238: 1215–1225.
8. Блюм, М., Э.М. Де Робертис, Дж. Б. Валлингфорд, К. Нирс (2015) Морфолинос: антисмысловые и чувствительные. Dev Cell 35: 145–149.
9. Блюм, М., К. Фейстель, Т. Тумбергер, А. Швейкерт (2014a) Эволюция и сохранение механизмов формирования левого-правого паттерна. Развитие 141: 1603–1613.
10. Блюм, М., T. Ott (2018a) Сила напряжения: организация левых и правых ресничек. Dev Cell 45: 277–279.
11. Блюм М., Отт Т. (2018b) Лево-правая асимметрия животных. Curr Biol 28: R301 – R304.
12. Блюм, М., A. Schweickert, P. Vick, C.V.E. Райт, М. Данильчик (2014б) Нарушение симметрии у эмбриона позвоночного: когда это происходит и как работает? Дев Биол 393: 109–123.
13. Боннар, К., А.С. Штробл, М. Шбоул, Х. Ли, Б. Мерриман, С.Ф. Нельсон, О. Абабне, Э. Уз, Т. Гюран, Х., Kayseriliet al. (2012) Мутации в IRX5 нарушают черепно-лицевое развитие и миграцию зародышевых клеток через SDF1. Нат Генет 44: 709–713.
14. Босковски, М.Т., С. Юань, Н.Б. Педерсен, К. Гот, С. Макова, Х. Клаузен, М. Брюкнер, М.К. Khokha (2013) Ген гетеротаксии GALNT11 гликозилирует Notch для управления типом и латеральностью ресничек.Природа 504: 456–459.
15. Брукс, Э.Р., Дж.Б. Уоллингфорд (2014) Многослойные клетки. Curr Biol 24: R973 – R982.
16. Брукс, Э.R., J.B. Wallingford (2015) Исследование структуры и функции ресничек in vivo с использованием Xenopus. Методы Cell Biol 127: 131–159.
17. Браун, Дж. М., Дж. Б. Витман (2014) Реснички и болезни. Биология 64: 1126–1137.
18. Бустаманте-Марин, X.М., Л. Островски (2017) Реснички и мукоцилиарный клиренс. Cold Spring Harb Perspect Biol 9: a028241.
19. Чиен, Ю.-Х., Р. Келлер, К. Кинтнер, Д. Shook (2015) Механическая деформация определяет ось планарной полярности в мерцательном эпителии. Curr Biol 25: 2774–2784.
20. Чиен, Ю.Х., С. Сринивасан, Р. Келлер, К. Кинтнер (2018) Механическое напряжение определяет длину, подвижность и плоское положение ресничек в лево-правом органайзере. Dev Cell 45: 316–330.
21. Cruciat, C.-M., C. Niehrs (2013) Секретированные и трансмембранные ингибиторы и активаторы Wnt. Cold Spring Harb Perspect Biol 5: a015081.
22. De Robertis, E.M., J. Larraín, M. Oelgeschläger, O. Wessely (2000) Создание организатора Spemann и формирования паттерна эмбриона позвоночных. Нат Рев Генет 1: 171–181.
23. дель Визо, Ф., F. Huang, J. Myers, M. Chalfant, Y. Zhang, N. Reza, J. Bewersdorf, C.P. Ласк, М. Khokha (2016) Генетика врожденных пороков сердца раскрывает контекстно-зависимую организацию и функцию нуклеопоринов в ресничках. Dev Cell 38: 478–492.
24. Dubaissi, E., N. Papalopulu (2011) Эмбриональный эпидермис лягушки: модель для изучения межклеточных взаимодействий в развитии мукоцилиарного заболевания.Dis Model Mech 4: 179–192.
25. Dubaissi, E., K. Rousseau, R. Lea, X. Soto, S. Nardeosingh, A. Schweickert, E. Amaya, D.J. Thornton, N. Papalopulu (2014) Тип секреторных клеток развивается вместе с мультицилийными клетками, ионоцитами и бокаловидными клетками и обеспечивает защитную, противоинфекционную функцию в мукоцилиарном эпидермисе эмбриона лягушки.Развитие 141: 1514–1525.
26. Eisen, J.S., J.C. Smith (2008) Управление экспериментами с морфолино: не прекращайте делать антисмысловые. Развитие 135: 1735–1743.
27. Эндикотт, С.J., B. Basu, M. Khokha, M. Brueckner (2015) NIMA-подобная киназа Nek2 является ключевым переключателем, балансирующим биогенез и резорбцию ресничек при развитии лево-правой асимметрии. Разработка 142: 4068–4079.
28. Фахро, К.А., М. Чой, С.М. Уэр, Дж. Бельмонт, Дж. Таубин, Р.П.Лифтон, М.К. Хоха, М. Брюкнер (2011) Редкие вариации числа копий у пациентов с врожденными пороками сердца позволяют идентифицировать уникальные гены в формировании паттерна слева направо. Proc Natl Acad Sci USA 108: 2915–2920.
29. Fliegauf, M., T. Benzing, H. Omran (2007) Когда реснички портятся: дефекты ресничек и цилиопатии.Nat Rev Mol Cell Biol 8: 880–893.
30. Гарсиа де ла Серрана, Д., Э.А. Мареко, И.А. Johnston (2014) Систематические вариации в паттерне сохранения генных паралогов между надотрядами костистых Ostariophysi и Acanthopterygii. Genome Biol Evol 6: 981–987.
31. Гарфинкель, А.М., М.К. Khokha (2017) Межвидовая беседа по душам: использование Xenopus для раскрытия генетической основы врожденного порока сердца. Curr Pathobiol Rep 5: 187–196.
32. Генч, Г.Е., Спрус Т., Р.С. Монтейро, Н.Д.Л. Оуэнс, С. Мартин, Дж. С. Смит (2018) Врожденный иммунный ответ и неправильное сплайсинг вне мишени являются распространенными побочными эффектами, индуцированными морфолино, у Xenopus.Dev Cell 44: 597–610.e10.
33. Гердес, Дж. М., Э. Дэвис, Н. Кацанис (2009) Первичная ресничка позвоночных в развитии, гомеостазе и болезни. Ячейка 137: 32–45.
34. Гетван, М., S.S. Lienkamp (2017) Набор инструментов у головастика: Xenopus для исследования почек. Cell Tissue Res 369: 143–157.
35. Гордон, К.Т., С. Сюэ, Г. Йигит, Х. Филали, К. Чен, Н. Розин, К.-И. Йошиура, М. Уфадем, Т.Дж. Бек, Р. Макгоуэн и др. (2017) Мутации de novo в SMCHD1 вызывают синдром микрофтальмии bosma arhinia и препятствуют развитию носа.Нат Генет 49: 249–255.
36. Гриффин, Д.Н., Ф. дель Визо, А.Р. Дункан, А. Робсон, В. Хванг, С. Кулкарни, К.Дж. Лю, М. Khokha (2018) RAPGEF5 регулирует ядерную транслокацию β-катенина. Dev. Ячейка 44: 248–260.e4.
37. Гурдон, Дж.Б., Т. Элсдейл, М. Фишберг (1958) Половозрелые особи Xenopus laevis в результате трансплантации одиночных соматических ядер. Nature 182: 64–65.
38. Гурдон, Дж. Б., Н. Хопвуд (2000). Введение Xenopus laevis в биологию развития: империя, тестирование на беременность и рибосомные гены.Int J Dev Biol 44: 43–50.
39. Hagenlocher, C., P. Walentek, C. Müller, T. Thumberger, K. Feistel (2013) Цилиогенез и поток спинномозговой жидкости в развивающемся мозге Xenopus регулируются foxj1. Реснички 2:12.
40. Гамбургер, В.(1988) Наследие экспериментальной эмбриологии — Ганс Шпеманн и организатор. Нью-Йорк, издательство Оксфордского университета.
41. Харланд Р.М., М.Дж. Гилкрист (2017) Редакция: Геном Xenopus laevis. Дев Биол 426: 139–142.
42. Хисман, Дж.(2002) Морфолино-олигонуклеотиды: смысл антисмысловой составляющей? Дев Биол 243: 209–214.
43. Hellsten, U., R.M. Harland, M.J. Gilchrist, D. Hendrix, J. Jurka, V. Kapitonov, I. Ovcharenko, N.H. Putnam, S. Shu, L. Taheret al. (2010) Геном западной когтистой лягушки Xenopus tropicalis.Наука 328: 633–636.
44. Hoff, S., J. Halbritter, D. Epting, V. Frank, T.-M.T. Nguyen, J. van Reeuwijk, C. Boehlke, C. Schell, T. Yasunaga, M. Helmstädter et al. (2013) ANKS6 является центральным компонентом модуля нефронофтиза, связывающего NEK8 с INVS и NPHP3. Нат Генет 45: 951–956.
45. Хосоя, М., Ю. Кунисада, А. Курисаки, М. Асашима (2012) Индукция дифференцировки недифференцированных клеток в бета-клетки поджелудочной железы у позвоночных. Int J Dev Biol 56: 313–323.
46. Инаба, К., К. Мизуно (2016) Дисфункция спермы и цилиопатия. Репрод Мед Биол 15: 77–94.
47. Якобсон, М., С.А.Муди (1984) Количественный анализ происхождения нервной системы лягушки. I. Происхождение нейронов Рохона-Бороды и первичных мотонейронов. J Neurosci 4: 1361–1369.
48. Келлер, Р.(2002) Формирование плана тела позвоночных с помощью поляризованных движений эмбриональных клеток. Science 298: 1950–1954.
49. Келлер, Р., Л. Дэвидсон, А. Эдлунд, Т. Элул, М. Эзин, Д. Шук, П. Скоглунд (2000) Механизмы конвергенции и расширения за счет интеркаляции клеток. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 355: 897–922.
50. Ноулз, М.Р., М. Заривала, М. Ли (2016) Первичная цилиарная дискинезия. Clin Chest Med 37: 449–461.
51. Кок, Ф.О., Шин М., Ч.-В. Ни, А. Гупта, А.С. Grosse, A. van Impel, B.C. Кирчмайер, Дж. Петерсон-Мадуро, Дж. Куркулис, И. Мале и др. (2015) Обратный генетический скрининг показывает слабую корреляцию между морфолино-индуцированным и мутантным фенотипами у рыбок данио. Dev Cell 32: 97–108.
52. Курисаки, А., Y. Ito, Y. Onuma, A. Intoh, M. Asashima (2010) Органогенез in vitro с использованием мультипотентных клеток. Hum Cell 23: 1–14.
53. Лиенкамп, С.С. (2016) Использование Xenopus для изучения генетических заболеваний почек. Semin Cell Dev Biol 51: 117–124.
54. Лиенкамп, С., А. Ганнер, К. Бёльке, Т. Шмидт, С.Дж. Арнольд, Т. Шефер, Д. Ромакер, Дж. Шулер, С. Хофф, К. Пауэльске и др. (2010) Inversin передает сигналы Frizzled-8, способствуя развитию проксимального пронефроса. Proc Natl Acad Sci USA 107: 20388–20393.
55. Лиенкамп, С.С., К. Лю, К.М.Карнер, Т. Carroll, O. Ronneberger, J.B. Wallingford, G Walz (2012) Почечные канальцы позвоночных удлиняются с использованием механизма конвергентного удлинения, зависящего от плоской клеточной полярности и основанного на розетке. Нат Генет 44: 1382–1387.
56. Макартур Д.Г., Т.А. Манолио, Д. Диммок, Х.Л. Рем, Дж.Шендуре, Г. Абекасис, Д. Адамс, Р.Б. Альтман, С.Е. Антонаракис, Э.А. Эшли и др. (2014) Рекомендации по исследованию причинно-следственной связи вариантов последовательностей при заболеваниях человека. Nature 508: 469–476.
57. Маршалл, В.Ф., С. Нонака (2006) Реснички: настройка на антенну клетки. Curr Biol 16: R604 – R614.
58. Mitchison, H.M., E.M. Valente (2017) Подвижные и неподвижные реснички в патологии человека: от функции к фенотипу. Дж. Патол 241: 294–309.
59. Муди, С.А. (1987) Судьбы бластомеров 32-клеточного эмбриона Xenopus. Дев Биол 122: 300–319.
60. Moody, S.A. (2000) Анализ клеточных клонов в эмбрионах Xenopus. Методы Mol Biol 135: 331–347.
61. Морено-Матеос, М.A., J.P. Fernandez, R. Rouet, C.E. Vejnar, M.A. Lane, E.Mis, M.K. Хоха, Дж. Дудна, А.Дж. Giraldez (2017) CRISPR-Cpf1 обеспечивает эффективную гомологически направленную репарацию и контролируемое температурой редактирование генома. Нац Коммуна 8: 2024.
62. Moulton, J.D. (2017) Как заставить эксперимент с морфолино работать: контроль, предпочтение специфичности, повышение эффективности, хранения и дозы.Методы Мол Биол 1565: 17–29.
63. Naert, T., T. van Nieuwenhuysen, K. Vleminckx (2017) TALEN и CRISPR / Cas9 питают генетически модифицированные клинически релевантные модели опухолей Xenopus tropicalis. Бытие 55: e23005.
64. Наерт, Т., K. Vleminckx (2018) CRISPR / Cas9-опосредованный нокаут Rb1 у Xenopus tropicalis. Методы Мол Биол 1726: 177–193.
65. Нагасава, К., Ю. Танидзаки, Т. Окуи, А. Ватараи, С. Уэда, Т. Като (2013) Значительная модуляция протеома печени, вызванная воздействием низкой температуры у Xenopus laevis.Biol Open 2: 1057–1069.
66. Пешкин, Л., М. Вюр, Э. Перл, В. Хаас, Р.М. Фриман-младший, Дж.К. Герхарт, А. Кляйн, М. Хорб, С.П. Гиги, М.В. Киршнер (2015) О взаимосвязи динамики белка и мРНК в эмбриональном развитии позвоночных. Dev Cell 35: 383–394.
67. Филпотт, А., P.R. Yew (2008) Клеточный цикл Xenopus: обзор. Мол Биотехнологол 39: 9–19.
68. Reversade, B., N. Escande-Beillard, A. Dimopoulou, B. Fischer, S.C. Chng, Y. Li, M. Shboul, P.-Y. Там, Х. Кайсерили, Л. Аль-Газали и др. (2009) Мутации в PYCR1 вызывают кутислаксу с прогероидными особенностями.Нат Генет 41: 1016–1021.
69. Росси, А., З. Контаракис, К. Герри, Х. Нольте, С. Хёльпер, М. Крюгер, D.Y.R. Stainier (2015) Генетическая компенсация, вызванная вредными мутациями, но не нокдаунами генов. Природа 524: 230–233.
70. Самоча, К.Э., Э. Робинсон, С.Дж. Сандерс, С. Стивенс, А. Сабо, Л. М. МакГрат, Дж. А. Космицки, К. Ренстрём, С. Маллик, А. Кирби и др. (2014) Структура для интерпретации мутации de novo при заболеваниях человека. Нат Генет 46: 944–950.
71. Сессия, A.M., Y. Uno, T. Kwon, J.A. Чепмен, А.Тойода, С. Такахаши, А. Фукуи, А. Хикосака, А. Судзуки, М. Кондо и др. (2016) Эволюция генома аллотетраплоидной лягушки Xenopus laevis. Природа 538: 336–343.
72. Шинохара, К., Х. Хамада (2017) Реснички при нарушении лево-правой симметрии. Cold Spring Harb Perspect Biol 9: a028282.
73. Шук Д.Р., Каспрович Э.М., Дэвидсон Л.А., Келлер Р. (2018) Большие, дальнодействующие растягивающие силы приводят к сближению во время закрытия бластопора Xenopus и удлинения оси тела. Элиф 7: 115.
74. Штаубер, М., M. Weidemann, O. Dittrich-Breiholz, K. Lobschat, L. Alten, M. Mai, A. Be ckers, M. Kracht, A. Gossler (2017) Идентификация эффекторов FOXJ1 во время цилиогенеза в респираторном эпителии плода и эмбриональный лево-правый органайзер мыши. Дев Биол 423: 170–188.
75. Сабо, А., М. Мельчионда, Г. Настаси, М.Л. Вудс, С. Кампо, Р. Перрис, Р. Майор (2016) Ограничение in vivo способствует коллективной миграции клеток нервного гребня. J Cell Biol 213: 543–555.
76. Тандон, П., Ф. Конлон, Дж.Д. Ферлоу, М.Е. Хорб (2017) Расширение генетического инструментария в Xenopus: подходы и возможности моделирования болезней человека.Дев Биол 426: 325–335.
77. Vick, P., A. Schweickert, T. Weber, M. Eberhardt, S. Mencl, D. Shcherbakov, T. Beyer, M. Blum (2009) Поток на правой стороне кровельной пластины гастроцеля незаменим при нарушении симметрии у лягушки Xenopus laevis. Дев Биол 331: 281–291.
78. Валентек, П., S. Bogusch, T. Thumberger, P. Vick, E. Dubaissi, T. Beyer, M. Blum, A. Schweickert (2014). Новый тип клеток, секретирующих серотонин, регулирует подвижность ресничек в мукоцилиарном эпидермисе головастиков Xenopus. Развитие 141: 1526–1533.
79. Валентек, П., И.К. Куигли (2017) Что мы можем узнать от головастика о цилиопатиях и заболеваниях дыхательных путей: использование системной биологии у Xenopus для изучения ресничек и мукоцилиарного эпителия.Бытие 55: e23001.
80. М. Вайдеманн, К. Шустер-Госслер, М. Штаубер, К. Вреде, Дж. Хегерманн, Т. Отт, К. Болдт, Т. Бейер, К. Серт, Э. Креммер и др. (2016) CFAP157 является мышиным нижестоящим эффектором FOXJ1, который специфически необходим для морфогенеза жгутика и подвижности сперматозоидов.Развитие 143: 4736–4748.
81. Вюр, М., Р.М. Freeman, M. Presler, M.E. Horb, L. Peshkin, S.P. Gygi, M.W. Kirschner (2014) Глубокая протеомика яйца Xenopus laevis с использованием эталонной базы данных на основе мРНК. Curr Biol 24: 1467–1475.
82. Вюр, М., Т. Гюттлер, Л. Пешкин, Г. Макалистер, М. Соннет, К. Исихара, А.С. Гроен, М. Преслер, Б.К. Эриксон, Т. Mitchison et al. (2015) Ядерный протеом позвоночного. Curr Biol 25: 2663–2671.
83. Сяо, Q., Z. Chen, X. Jin, R. Mao, Z. Chen (2017) Множество положений неканонической передачи сигналов Wnt в развитии и заболеваниях.Biomed Pharmacother 93: 359–369.
84. Заривала, М.А., М.Р. Ноулз, Х. Омран (2007) Генетические дефекты в структуре и функции ресничек. Анну Рев Физиол 69: 423–450.

---

Автор Контакты

Мартин Блюм

Институт зоологии Университета Хоэнхайма

Garbenstrasse 30

DE – 70599 Штутгарт (Германия)

E-Mail [email protected]

---

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Поступила: 2 мая 2018 г.
Дата принятия: 13 июня 2018 г.
Опубликована онлайн: 9 августа 2018 г.
Дата выпуска: март 2019

Количество страниц для печати: 11
Количество фигур: 5
Количество столов: 0

ISSN: 1422-6405 (печатный)
eISSN: 1422-6421 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/CTO

---

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Плюсы и минусы разных методов

ОСНОВНЫЕ МОМЕНТЫ

• Доступны различные протоколы для сбора данных о методах питания спортсменов в соответствии с целями и доступными ресурсами деятельности.

• Ретроспективные методы (например, анкеты по частоте приема пищи и история диеты) ограничены знаниями и памятью спортсмена, в то время как перспективные методы (например, дневники питания) ограничены тенденцией к изменению обычного приема в процессе записи.

• Дневники питания — это часто используемая диетическая оценка при исследованиях и поддержке спортсменов, но их следует проверять на предмет общей предвзятости, заключающейся в занижении сведений.

• Новые технологии открывают возможности для более быстрых и эффективных протоколов оценки питания, но, как и все методы, их необходимо валидировать для использования среди спортсменов.

ВВЕДЕНИЕ

Изучение того, что ест спортсмен, является повседневным занятием спортивного диетолога, поэтому можно ожидать, что практика сделает это действенной и действенной задачей. Тем не менее, диетическая оценка остается сложной задачей в спортивном питании, поскольку может привести к значительным ошибкам в отношении достоверности и надежности. Эти ошибки ставят под сомнение точность оценок того, что спортсмен фактически ел или обычно ест, а также могут помешать обнаружению реальных изменений при повторении оценки.Развитие опыта в этой деятельности требует понимания того, что существуют разные причины для проведения оценки, разные подходы к ее завершению и разные инструменты, которые можно использовать. Таким образом, результат можно улучшить, подбирая лучший подход к каждой конкретной ситуации. Тем не менее, при интерпретации собранных данных также необходимо учитывать ошибки, связанные с диетической оценкой. В этой статье Sports Science Exchange описаны доступные варианты, а также дано понимание того, как следует рассматривать результаты аттестации с учетом остаточных ограничений.Следует помнить, что почти все исследования методов диетического обследования проводились среди лиц, не занимающихся спортом; поэтому некоторые комментарии по необходимости основаны на профессиональном опыте, а не на серьезных исследованиях. Дополнительную общую информацию о методологии диетического обследования можно найти в прекрасных обзорах Бингхэма (1991) и Томпсона и Субара (2008).

ПРИЧИНЫ СБОРА ДИЕТИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ

Два основных сценария объясняют, почему спортсмены могут захотеть собрать информацию о потребляемой ими еде.Во-первых, интерес состоит в том, чтобы измерить, что на самом деле ест спортсмен в период, когда он делает свой собственный выбор. Основная цель этой деятельности, обычно называемой диетической оценкой, — исследовать происходящее, не влияя на процесс. Этот сценарий встречается в спортивном питании в различных ситуациях, связанных как с исследованиями, так и с обслуживанием спортсменов, каждая со своими проблемами и конкретными целями (таблица 1). Как правило, методы оценки питания делятся на стратегии, которые являются ретроспективными (то, что спортсмен ел в прошлом). ) и перспективные (что произойдет в будущем).За последние 50 лет для оценки диетических практик спортсменов использовались четыре основных метода (таблица 2).

Второй сценарий, часто известный как отслеживание диеты или самоконтроль, использует ограничение многих методов оценки диеты — то, что человек изменит свое потребление пищи в процессе мониторинга. Ключевым инструментом, помогающим спортсмену изменить его или ее диетические привычки, является повышение их самосознания своего поведения и факторов, лежащих в его основе.Спортсмен, вероятно, улучшит свой выбор продуктов питания и контроль порций, когда он будет учитывать свои действия в режиме реального времени или напрямую связывать свое поведение с результатом. Получение положительных отзывов об улучшениях в диетической практике и определение факторов, поддерживающих это, может быть ценными стратегиями для закрепления новых привычек. Протоколы и инструменты, используемые для отслеживания питания, могут отличаться от таковых для оценки питания из-за измененных целей и обсуждаются в отдельной статье Sports Science Exchange.

РЕТРОСПЕКТИВНЫЕ ИЗМЕРЕНИЯ ДИЕТИЧЕСКОГО ЗАБОРА

Ретроспективные методы включают в себя диетический анамнез (управляемое интервью, обычно используемое для получения информации о привычном потреблении, часто обозначаемое как типичный день), 24-часовое воспоминание (которое исследует потребление в течение определенного дня) и анкету по частоте приема пищи (краткое изложение обычное потребление разных категорий продуктов). Общий принцип, общий для каждой из этих техник, заключается в том, что они в значительной степени зависят от способности спортсмена вспомнить типы и количество продуктов и напитков, потребляемых за интересующий период в прошлом.Эти методы не работают, когда спортсмен смущен / не желает раскрывать свой истинный режим питания или не может дать подробное описание типа и количества продуктов, которые он / она потреблял в прошлом. 24-часовой отзыв — это наименее часто используемый протокол, потому что ситуации в тренировках или исследованиях спортсменов, в которых нас беспокоит только то, что произошло за один день, не так распространены, как другие интересы. Анкеты по частоте приема пищи и истории питания обычно пытаются оценить потребление в течение более длительных периодов времени, что имеет важное значение для получения более долгосрочной перспективы в отношении моделей питания.Однако эти методы полагаются на память спортсмена и понимание их истинного потребления и страдают, когда спортсмен не является историком и / или ведет сложный образ жизни, который трудно резюмировать.

Диетический анамнез обычно используется спортивными диетологами, чтобы получить первоначальное представление о диетических методах спортсмена. Хотя он не поддается точной количественной оценке потребления питательных веществ, он полезен для понимания характера приема пищи, перекусов, потребления во время тренировок / мероприятий и использования добавок.Требуется умелая техника интервью для сбора информации с минимальной предвзятостью, для перекрестной проверки информации и выявления факторов, влияющих на модели приема. Несмотря на то, что это затруднено способностью спортсмена точно описывать обычные размеры порций своего выбора еды и напитков, использование моделей или изображений размеров продуктов питания может помочь спортсмену лучше описать количество, которое они потребляют.

Анкеты

по частоте приема пищи (FFQ) могут быть выполнены обученным интервьюером, но спортсмен может также самостоятельно заполнить опросник на бумаге или в электронном формате, чтобы сэкономить время и ресурсы.Если попросить спортсменов определить, как часто они едят отдельные продукты / напитки, можно получить краткую информацию об общей диете, но, как правило, потребление переоценивается у потребителей с низким содержанием энергии и недооценивается у тех, кто ест много. Важно отметить, что он удаляет часть информации, которая интересует спортивных диетологов, например, когда едят еду или напитки и что еще потребляется одновременно. Анкеты по частоте приема пищи наиболее полезны для оценки потребления конкретного интересующего питательного вещества или пищевого фактора — e.g., антиоксиданты или кальций — где, в идеале, FFQ был подтвержден путем сравнения ответов на биомаркер приема или статуса питания соединения (Braakhuis et al., 2011). Опять же, модели или изображения продуктов и размеров порций могут помочь повысить точность идентификации или количественной оценки потребления с пищей.

ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИЗМЕРЕНИЯ ПОТРЕБЛЕНИЯ ПИТАНИЯ: ПРОДОВОЛЬСТВЕННЫЙ ДНЕВНИК

Дневник питания или запись диеты — самый популярный протокол оценки питания в исследованиях и практике спортивного питания.Заставить спортсмена записывать, что он / она потребляет в течение определенного периода, звучит как простая задача, но на самом деле сделать это упражнение значимым — очень сложно. Дневники питания предлагают отслеживать потребление в течение определенного периода, который представляет собой обобщенный интересующий период. Этот период может варьироваться от краткосрочной диетической программы (например, 48-часовой период до проведения исследовательского испытания или потребления велосипедиста во время многодневной многоступенчатой ​​гонки) до типичной диеты спортсмена. Варианты традиционной техники ведения дневника питания включают количество записываемых дней и метод количественного определения порций пищи (например,g., методы прямого взвешивания или описание с помощью домашних мер и размеров). Традиционные методы записи на бумаге и ручке ложатся тяжелым бременем на спортсмена и предполагают, что он или она достаточно грамотны, мотивированы и организованны, чтобы достоверно записывать их потребление в течение требуемого периода.

Есть несколько источников ошибок в перспективных оценках:

a) Спортсмен изменяет свой режим питания или выбор пищи в течение периода записи дневника питания так, чтобы он не отражал его / ее обычное потребление.

b) Спортсмен неточно записывает свое диетическое потребление, чтобы улучшить восприятие того, что он / она ест (т. Е. Он / она пропускает или недооценивает потребление продуктов или блюд, которые считаются нежелательными, или ложно сообщает о приеме увиденных продуктов. по желанию).

c) Спортсмен делает ошибки в количественном выражении или описании при регистрации приема пищи.

Протоколы дневников питания обычно имеют компромиссы. Например, запись о взвешенном продукте обеспечивает уверенность в точности количественной информации.Однако необходимость взвешивать все продукты, включая отдельные компоненты еды или блюда, увеличивает нагрузку на спортсмена и обычно приводит к изменениям в приеме пищи, в результате чего спортсмен выбирает продукты, которые проще обрабатывать, или полностью пропускает прием пищи. Другой компромисс — это продолжительность пищевого дневника: увеличение количества дней записи увеличивает вероятность того, что он представляет собой обычное потребление, но снижает приверженность, проявляемую субъектом при ведении точной записи.

В общей популяции дневник питания на 3-4 дня часто считается «золотой серединой» для исследования потребления группы, но не часто признается, что он дает плохую оценку истинного потребления людьми. Поскольку мы едим по-разному изо дня в день, суточное потребление энергии и питательных веществ сильно различается. Некоторые характеристики питания стабильны, в то время как другие питательные вещества распределяются в продуктах менее равномерно, а это означает, что суточное потребление значительно колеблется и влияет на точность оценки из дневника питания (Basiotis et al., 1987 Braakhuis et al., 2003). Исследование населения в целом (Basiotis et al., 1987) показало, что 1) может потребоваться 14-30 дней записи для оценки потребления человеком даже самых стабильных питательных веществ с точностью до 10% от их истинного долгосрочного потребления. , 2) необходимо не менее 7 дней, чтобы причислить людей к группе к категории потребителей с высоким или низким уровнем потребления, и 3) необходимо на несколько порядков больше для точной оценки потребления человеком различных питательных веществ. Кроме того, 4) наличие в опросе не менее 15 субъектов позволит сделать разумную оценку среднего группового потребления стабильных питательных веществ (энергии, углеводов) в пределах 4-5 дней после записи, 5) умеренно стабильных питательных веществ (например.g., железо) может потребовать удвоения размера выборки или дневной регистрации, и 6) для сильно изменчивых питательных веществ (например, витаминов A и C, холестерина) может потребоваться> 40 дней или> 200 субъектов для получения точной оценки (Basiotis et al. , 1987). Практический способ увеличения интервала записи состоит в том, чтобы группы или отдельные лица вели несколько более коротких записей в течение определенного периода времени, таким образом увеличивая общее количество записываемых дней и сокращая при этом падение в соблюдении требований к записи.

Несколько исследований изучали оптимальный период регистрации для спортсменов, систематически рассматривая вопросы регистрации соблюдения или повседневной изменчивости в потреблении пищи / питательных веществ.Профессиональный опыт показывает, что некоторые спортсмены прилежны — или даже чересчур разборчивы — в ведении записей, привыкли измерять аспекты своей жизни с точностью до деталей и мотивированы идеей, что такая деятельность может привести к лучшим результатам. Такие люди могут быть в состоянии вести дневник питания на 7 дней с небольшой нагрузкой и с большой точностью. Возможность отслеживать продолжительность тренировочного микроцикла полезна, поскольку позволяет оценить, насколько хорошо модели потребления пищи / жидкости соответствуют меняющимся потребностям тренировок и соревнований.Повторение такой оценки в разное время периодизированного спортивного календаря позволит составить полезную картину диетических практик спортсмена. Напротив, другие спортсмены — плохие кандидаты на ведение дневников питания, поскольку чрезмерно загруженный образ жизни может оставлять мало времени или энтузиазма для записи приема пищи в реальном времени, в то время как наложение тренером деятельности, требующей усилий, когда спортсмен не интересуется питанием, маловероятно. для достижения полезного результата.

ОШИБКИ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ НЕПРАВИЛЬНОЙ ОТЧЕТНОСТИ В ПРОДОВОЛЬСТВЕННЫХ ДНЕВНИКАХ

Различные ошибки в дневниках питания по-разному влияют на результаты.В некоторых случаях ошибка связана с неточной записью (спортсмен ел пищу, которую он / она не учел), в то время как в других проблема заключается в нетипичном приеме пищи (спортсмен ел пищу, но это не отражает его / ее типичных практик). . Обширное исследование точности дневников питания среди населения в целом показало, что неправильное представление ошибок сводится к занижению обычного рациона питания. Систематический обзор показал, что около 30% респондентов в опросах о питании значительно занижали свое истинное потребление, а во всех исследованиях потребление энергии занижалось примерно на 15% (Poslusna et al., 2009). Факторы, которые, по всей видимости, предсказывают занижение информации среди населения в целом, включают в себя высокий уровень потребления энергии, избыточный вес и / или сознательное отношение к своему весу (Livingstone & Black, 2003).

Хотя заманчиво применять поправочный коэффициент к результатам исследований по всем направлениям, это не подходит для отдельных лиц, поскольку в любом групповом опросе, вероятно, будут люди, которые значительно завышают потребление энергии, те, кто занижает и те, чье потребление находится в разумных пределах.Кроме того, есть свидетельства того, что даже если степень искажения данных об энергии может быть установлена, это не обязательно коррелирует с неправильным представлением данных о потреблении питательных веществ. Некоторые типы продуктов питания или случаи приема пищи с большей вероятностью будут указаны неверно, чем другие, либо из-за неудобства отчетности (например, закуски), неспособности распознать, что они представляют собой потребление (например, продукты и напитки, потребляемые во время упражнений), либо из-за желания кажется, что едят лучше, чем на самом деле (например, сокращение потребления продуктов с высоким содержанием жиров и сахара, увеличение количества фруктов и овощей).

В области питания в целом исследователи пытаются подтвердить методы исследования питания или собранные данные с помощью трех различных подходов. Они могут сравнивать собранную информацию с результатами другого метода, например, FFQ и дневника питания. Это не совсем удовлетворительно, поскольку обычно требует сравнения одного набора / типа ошибок с другим. Сравнение с наблюдением за фактическим потреблением — это возможное упражнение для проверки достоверности, но его сложно достичь, особенно в долгосрочной перспективе.Сравнение с независимым маркером потребления или статуса питательных веществ, как правило, является предпочтительным методом, с вариантами, включающими сравнение самооценки потребления белка или натрия с мочевыми показателями азота или натрия (Hedrick et al., 2012). Исследования спортсменов этого типа не проводились.

Наиболее распространенный подход к проверке достоверности пищевого дневника — это сравнение потребления энергии с теоретической или измеренной оценкой расхода энергии, принятие изменений в составе тела для оценки избытка или дефицита энергии и, таким образом, маркера недостаточного или избыточного количества энергии. -регистрация обычного / необходимого потребления.В исследовательских условиях расход энергии можно измерить в метаболической камере или, у свободноживущих субъектов, с водой с двойной меткой (Livingstone & Black, 2003; Trabulsi & Schoeller, 2001). На спортсменах было проведено несколько сложных исследований энергетического баланса, и в большинстве из них были обнаружены несоответствия между заявленным потреблением энергии и потребностями в энергии (Magkos & Yannakoulia, 2003). Уравнения прогнозирования и носимые устройства слежения (например, Sensewear) предлагают другой уровень оценки расхода энергии как в исследовательских, так и в практических целях, хотя необходимо проявлять осторожность в отношении их способности точно представлять затраты энергии на занятия спортом высокого уровня.Многие исследователи и практики применяют пороговое значение Голдберга (Goldberg et al., 1991), которое рассматривает зарегистрированное потребление энергии относительно измеренного или прогнозируемого базального уровня метаболизма для выявления неправдоподобных привычных моделей питания и, следовательно, значительных искажений в записях о питании (Ливингстон И Блэк, 2003).

ОШИБКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА НУТРИЕНТОВ

Хотя исследователи и практики часто оценивают данные о рационе питания качественно, путем изучения моделей потребления пищи в свете рекомендованного пищевого поведения цель многих мероприятий по оценке питания состоит в том, чтобы получить количественную оценку потребления энергии и питательных веществ.Традиционное достижение этой количественной оценки включает интерпретацию исследователем данных о продуктах питания, представленных самими пациентами (например, дневника питания), решения о кодировании и ввод данных в компьютеризированную программу анализа питания. Такие программы получают доступ к базе данных о составе пищевых продуктов, которая варьируется в зависимости от источника данных о составе пищевых продуктов, количества включенных пищевых продуктов, диапазона питательных веществ, по которым имеются данные, и метода анализа, используемого для получения данных о питательных веществах.Хотя программы компьютерного анализа питания в настоящее время широко доступны и просты в использовании, рекомендуется, чтобы ввод данных и интерпретация информации диетического обследования оставались ролью должным образом подготовленных исследователей, использующих стандартизированные методы и перекрестную проверку (Braakuis et al., 2003). Это может помочь устранить ошибки и уменьшить вариативность в решениях, таких как количественная оценка порций пищевых продуктов, описанных субъектами, и сопоставление описаний пищевых продуктов с продуктами, содержащимися в базе данных. Конечно, наличие и достоверность данных о составе пищевых продуктов в этих программах анализа представляет собой серьезное ограничение в конце процесса оценки питания.

НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ДИЕТИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ

Традиционные методы оценки питания в основном разрабатывались как упражнения «на бумаге и карандашом», хотя в некоторых случаях, например, в FFQ, на раннем этапе произошла эволюция вопросников в электронные форматы, которые можно было заполнять и оценивать автоматически. Такая механизация существенно снижает нагрузку как на испытуемого, так и на оценщика. Однако за последнее десятилетие технический прогресс позволил появиться множеству новых возможностей для замены письменных вопросников и дневников.Существует широкий выбор новых способов сбора и обработки информации о потреблении пищи, использующих полезность, портативность и повсеместность современных электронных устройств (таблица 3). Многие из этих вариантов предоставляют варианты дневника питания с функциями, которые подходят для оценки питания и / или задач отслеживания питания. В настоящее время проводятся исследования, чтобы определить, насколько хорошо особенности этих технологий и методов могут улучшить процесс сбора информации о методах питания особых групп населения, включая спортсменов (обзоры см. В Illner et al., 2012; Лиефферс и Ханнинг, 2012; Штумбо, 2013). Несмотря на соблазн просто сравнить результаты с результатами, полученными с помощью другого метода обследования, есть надежда, что будут предприняты исследования для подтверждения данных о питании в сравнении с более достоверными показателями, такими как биомаркеры или прямые наблюдения за потреблением пищи. Вполне вероятно, что, несмотря на некоторые потенциальные или фактические преимущества этих новых методов, всегда будут оставаться остаточные проблемы с получением самооценки диетической информации от любой популяции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ВЫВОДЫ И РЕЗЮМЕ

1. При выборе метода оценки питания следует учитывать следующие факторы:

— Валидация: была ли техника валидирована или исследована применительно к спортсменам?

— Обсуждение темы: Насколько сложны, требуют много времени или навязчивы требования?

— Характеристики субъекта: Насколько он / она грамотен, мотивирован и осведомлен о еде? Что он / она хочет получить от упражнения?

— Бремя исследователя: сколько времени, опыта и ресурсов требуется для сбора и обработки информации?

— Условия проведения опроса: Какие проблемы ставятся перед спортсменом в период оценки? Будет ли он / она отвлекаться или угрожать собираемой информацией?

— Интересующие особенности: Интересует ли нас потребление энергии, макроэлементов, микроэлементов, других пищевых химикатов, время потребления в течение дня или в связи с упражнениями, или взаимодействие питательных веществ, потребляемых в одно и то же время?

— Результаты оценки: нужна ли нам количественная, качественная или ранжированная информация? Нас интересует обычное потребление в течение длительного периода или конкретное потребление в течение короткого периода?

2.Если используются перспективные методы (например, дневники питания), разумно ожидать, что большинство спортсменов будут занижать или недооценивать свое обычное потребление:

— Спортсмены, которые осознают свой вес / телосложение или недовольны образом своего тела, подвергаются наибольшему риску значительных ошибок занижения сведений.

— Наилучшей точности самооценки диетических оценок можно ожидать от спортсменов, которые уверены в своих пищевых привычках и образе тела и заинтересованы в получении ценной обратной связи.

— Обучение субъектов может улучшить их навыки ведения документации.

— Обработка данных из записей о пищевых продуктах должна выполняться квалифицированным специалистом с использованием стандартных методов.

— Выходные данные дневников питания следует интерпретировать в свете неполной отчетности и неправильной отчетности, с проверкой потребления энергии по сравнению с измеренными или прогнозируемыми расходами энергии, обеспечивающими информацию относительно неверной отчетности.

3. Новые технологии и методы оценки питания предлагают преимущества повышенной эффективности и меньшей нагрузки на испытуемых / исследователей.Однако требуется проверка этих методов, прежде чем мы сможем быть уверены в их плюсах и минусах.

4. Интерпретация самооценки информации о потреблении пищи должна быть тщательно отфильтрована с учетом информации об инструменте оценки питания и спортсмене, который его использовал.

ССЫЛКИ

Басиотис П. П., С. О. Уэлш, Ф. Дж. Кронин, Дж. Л. Келси и В. Мерц (1987). Количество дней записей о приеме пищи, необходимых для оценки индивидуального и группового потребления питательных веществ с определенной степенью уверенности.J. Nutr. 17: 1638-1641.

Bingham, SA. (1991). Ограничения различных методов сбора данных о потреблении пищи. Анна. Nutr. Метаб. 35: 117-127.

Braakhuis, AJ, K. Meredith, G.R. Кокс, У.Г. Хопкинс и Л.М. Берк (2003). Различия в оценке данных о самооценке рациона элитных спортсменов в результате кодирования различными спортивными диетологами. Int. J. Sport Nutr. Упражнение. Метаб. 13: 152-165.

Braakhuis, A.J., W.G. Hopkins, T.E. Лоу и Э.С. Раш (2011).Разработка и валидация опросника по частоте приема пищи для оценки краткосрочного потребления антиоксидантов спортсменами. Int. J. Sport Nutr. Упражнение. Метаб. 21: 105-112.

Гольдберг, Г. Р., А. Е. Блэк, С. А. Джебб, Т. Дж. Коул, П.Р.Мургатройд, В.А.Ковард, А.М. Прентис (1991). Критическая оценка данных о потреблении энергии с использованием фундаментальных принципов энергетической физиологии: 1. Определение пороговых значений для выявления недостаточной регистрации. Евро. J. Clin. Nutr. 45: 569-581.

Хедрик, В.Е., А.М. Дитрих, П.А. Эстабрукс, Дж. Савла, Э. Серрано, Б.М. Дэви (2012). Биомаркеры питания: достижения, ограничения и направления на будущее. Nutr. J. 14; 11: 109.

Илльнер А.К., Х. Фрейслинг, Х. Боинг, И. Хайбрехтс, С.П. Криспим и Н. Слимани (2012). Обзор и оценка инновационных технологий измерения диеты в эпидемиологии питания. Int. J. Epidemiol. 41: 1187-1203.

Лиефферс, Дж. Р. и Р. М. Хэннинг (2012). Оценка питания и самоконтроль с помощью приложений питания для мобильных устройств.Жестяная банка. J. Diet. Практик. Res. 73: e253-60.

Ливингстон, М.Б., и А.Е. Блэк (2003). Маркеры достоверности заявленного потребления энергии. J. Nutr. 133: 895S-920S.

Magkos, F., and M.Yannakoulia (2003). Методология оценки питания спортсменов: концепции и подводные камни. Curr. Opin. Clin. Nutr. Метаб. Забота. 6: 539-549.

Poslusna, K., J. Ruprich, J.H. де Фриз, М. Якубикова и П. Вант Вир (2009). Неверное представление данных о потреблении энергии и питательных микроэлементов, оцененных с помощью записей о продуктах питания и суточных отзывов, методов контроля и корректировки на практике.Br. J. Nutr. 101: S73-S85.

Штумбо, П.Дж. (2013). Новая технология в оценке питания: обзор цифровых методов повышения точности учета пищевых продуктов. Proc. Nutr. Soc. 72: 70-76.

Томпсон Ф.Э. и А.Ф. Субар (2008). Методология оценки питания. В: A.M. Коулстон и С.Дж.Боуши (ред.). Питание в профилактике и лечении заболеваний. 2. Сан-Диего: Academic Press.

Trabulsi, J., and D.A. Шоллер (2001). Оценка инструментов для оценки питания по сравнению с водой с двойной меткой, биомаркером привычного потребления энергии.Являюсь. J. Physiol. 281: E891-899.

границ | Гидроксихлорохин у пациентов с COVID-19: за и против

Введение

Коронавирусы (CoV) относятся к семейству Coronaviridae и обычно вызывают легкие острые респираторные заболевания или «простуду» (Su et al., 2016). В декабре 2019 г. в Китае были зарегистрированы случаи пневмонии неустановленной этиологии (Huang et al., 2020). В течение нескольких недель причиной этих случаев оказался новый коронавирус (CoV).Этот новый вирус имеет примерно 96% сходства с RaTG13 летучей мыши-CoV и примерно 80% сходства последовательностей с SARS-CoV (Лу и др., 2020; Чжоу и др., 2020b). Следовательно, ему было присвоено название SARS-CoV-2, а вызываемое им заболевание было названо коронавирусным инфекционным заболеванием 2019, или сокращенно COVID-19.

COVID-19 представляет серьезную угрозу для мировой экономики и системы здравоохранения. На момент написания этой рукописи (11 августа 2020 г.) во всем мире было зарегистрировано более 20 миллионов случаев и более 700 000 смертей, связанных с инфекцией COVID-19 (ВОЗ, 2020a).Исследовательские усилия связали происхождение SARS-CoV-2 с передачей от летучих мышей человеку через неустановленного промежуточного хозяина. Затем передача от человека к человеку может происходить через респираторные капли (Salata et al., 2019).

Инфекция SARS-CoV-2 может вызывать широкий спектр заболеваний, от бессимптомных до тяжелых. Действительно, сообщалось о различных клинических симптомах с участием нескольких органов, связанных с инфекцией COVID-19 (Guan et al., 2020). К ним относятся респираторные, желудочно-кишечные, почечные, неврологические и кожные проявления (Adhikari et al., 2020; Рекалкати, 2020). Некоторые из них являются серьезными и опасными для жизни, такими как острый респираторный дистресс-синдром, острая почечная недостаточность, инсульт, аритмия и сердечная недостаточность (Adhikari et al., 2020; Bangalore et al., 2020; Cheng J. et al., 2020; Guan et al., 2020; Liu et al., 2020; Recalcati, 2020).

Лечение инфекции COVID-19 в основном симптоматическое и сильно зависит от тяжести заболевания. Он включает в себя гидратацию, обезболивание, лечение лихорадки, добавление кислорода и инвазивную механическую вентиляцию легких, если это необходимо (Cascella et al., 2020). Поскольку COVID-19 продолжает оставаться источником глобальной заболеваемости и смертности, возникает острая необходимость в эффективных противовирусных препаратах против COVID-19. В то время как многочисленные лаборатории и клинические исследования сосредоточили свои усилия на разработке терапевтических и профилактических вмешательств, перепрофилирование уже известного лекарства для использования в качестве противовирусного препарата может оказаться самым быстрым и наименее дорогостоящим. Действительно, недавно противомалярийный агент гидроксихлорохин (HCQ) привлек внимание как потенциальный препарат, который можно использовать для лечения COVID-19.Ниже мы обсудим терапевтическую ценность этого препарата, а также его побочные эффекты.

Фармакология хлорохина и гидроксихлорохина

Хлорохин (CQ) и HCQ производятся и вводятся перорально в форме таблеток (Pastick et al., 2020). Таблетка CQ состоит из 500 мг фосфата CQ. Таблетка HCQ состоит из 200 мг сульфата HCQ (Pastick et al., 2020). Требуемая дозировка варьируется в зависимости от излечиваемого заболевания (Санофи-Авентис, 2019). Для профилактики малярии еженедельная доза 6.Взрослым и детям назначают 5 мг / кг (Санофи-Авентис, 2019). Однако разовая доза не должна превышать 400 мг. Пациентам рекомендуется принять две дозы перед поездкой в ​​эндемичные страны и продолжать принимать ту же дозу до 1 месяца после возвращения. Более высокая дозировка 2000 мг используется для лечения острой малярии. Напротив, дневная доза 200-600 мг используется для лечения ревматоидного артрита и системной красной волчанки (СКВ) (Sanofi-Aventis, 2019).

Для лечения COVID-19 суточные дозы HCQ варьировались от 800 до 1600 мг.Однако в одном исследовании они определили эффективную и безопасную дозу HCQ на основе данных, представленных исследованиями и клиническими испытаниями in vitro, (Garcia-Cremades et al., 2020). Они изучили взаимосвязь между снижением вирусной нагрузки и дозировкой HCQ у пролеченных пациентов с COVID-19. В этом исследовании был сделан вывод, что суточная доза HCQ не должна превышать 800 мг (Garcia-Cremades et al., 2020). Более высокие дозировки могут привести к более быстрому снижению вирусной нагрузки и клиническому улучшению. Однако они могут вызывать нежелательные побочные эффекты, такие как удлинение интервала QT.Для продолжительности терапии вышеуказанный режим должен составлять более 7 дней (Garcia-Cremades et al., 2020).

Биодоступность HCQ и CQ составляет около 70–80% (Furst, 1996). Это делает их использование в пероральных формах подходящим для лечения серьезных полиорганных заболеваний. Более того, они оба узнаваемы по замедленному разрешению. CQ выводится со скоростью 0,35–1 л / ч / кг, а HCQ выводится со скоростью 96 мл / мин (Ducharme and Farinotti, 1996; Furst, 1996). Их период полувыведения оценивается в 40–50 дней (Furst, 1996).Известно, что CQ и HCQ имеют большой объем распределения плазмы, примерно до 65 000 л и 44 257 л соответственно (Browning, 2014). Учитывая эти фармакокинетические свойства HCQ и CQ, клиническое течение пациентов, принимающих эти препараты, нелегко предсказать, особенно у пациентов с сопутствующими заболеваниями почек и печени. Фактически, эти пациенты склонны к развитию серьезных побочных эффектов из-за недостаточного клиренса и метаболизма CQ и HCQ. Точно так же CQ и HCQ могут оказывать различные терапевтические эффекты у разных пациентов в зависимости от их функций почек и печени.

Механизм действия

Хинин вместе с его производными CQ и HCQ являются слабыми основаниями, принадлежащими к семейству 4-аминохинолинов (Savarino et al., 2003; Manohar et al., 2014). И CQ, и HCQ имеют общие цели и схожие механизмы действия. Многочисленные механизмы действия влияют на роль этих двух препаратов в лечении конкретного заболевания или группы заболеваний (Yao et al., 2020). Ниже мы обсуждаем механизмы действия CQ и HCQ, которые классифицируются на две группы в зависимости от их конечных результатов: противовоспалительное и противоинфекционное.

Противоинфекционная активность хлорохина и гидроксихлорохина

HCQ и CQ проявляют противовирусную активность, вмешиваясь в различные стадии репликации вируса. Один постулируемый механизм заключается в нарушении взаимодействия вируса с рецептором клетки-мишени за счет CQ, что препятствует проникновению вируса в клетку. Это достигается путем ингибирования фермента хинон оксидоредуктазы 2 (QR2), который обнаруживается в красных кровяных тельцах (Kwiek et al., 2004). QR2 жизненно важен для биосинтеза сиаловой кислоты, который является компонентом распознавания лиганда (Varki, 1997).Недавние исследования показывают, что CQ и HCQ действуют путем связывания как с сиаловой кислотой, так и с ганглиозидами, которые необходимы для проникновения SARS-CoV-2 в клетку-хозяина (Fantini et al., 2020). Кроме того, CQ изменяет гликозилирование вирусных и клеточных белков, тем самым ограничивая взаимодействие вирус-рецептор. Считается, что это ключевой механизм, с помощью которого CQ изменяет взаимодействие SARS-CoV с рецептором ACE2 (Vincent et al., 2005). Кроме того, CQ препятствует пути митоген-активируемой протеинкиназы p38 (MAPK), который используется вирусами для завершения цикла репликации вируса (Seitz et al., 2003; Wehbe et al., 2020).

Действительно, HCQ и CQ преимущественно ограничиваются кислыми органеллами (Manohar et al., 2014) и подщелачивают кислые пузырьки, необходимые для размножения некоторых инфекционных агентов. Этот эффект наблюдался у нескольких организмов, включая Tropheryma whipplei, Coxiella burnetii и других, которым необходима кислая среда для размножения (Rolain et al., 2007). Это повышение pH также ухудшает функцию некоторых клеточных ферментов, влияющих на посттрансляционную модификацию и ограничивая доступность железа внутри клетки (Manohar et al., 2014). Такой механизм используется против ретровирусной инфекции, когда ингибирование посттрансляционного гликозилирования вирусного гликопротеина отменяет его взаимодействие с вирусом (Savarino et al., 2004). Соответственно, протеолитические ферменты, необходимые для процессинга вирусного белка, не активируются в щелочной среде (Randolph et al., 1990). Сходным образом, увеличивая pH лизосом, CQ нарушает зависящее от эндосом проникновение вируса в клетку (Gay et al., 2012). Было также обнаружено, что это подщелачивающее свойство ограничивает процесс отслаивания некоторых вирусных частиц (Manohar et al., 2014). Кроме того, похоже, что CQ усиливает ответ цитотоксических Т-лимфоцитов против вирусной инфекции за счет усиления презентации вирусного антигена дендритными клетками (Accapezzato et al., 2005).

Противовоспалительная активность хлорохина и гидроксихлорохина

Противовоспалительные эффекты CQ и HCQ обусловлены их способностью модулировать иммунные механизмы. Действительно, CQ / HCQ вызывают свои эффекты благодаря своей способности ослаблять иммунный ответ. Например, HCQ подавляет высвобождение нескольких провоспалительных цитокинов.В самом деле, он отменяет продукцию IL-6 как в моноцитах, так и T-лимфоцитах, а также продукцию IL-1 альфа только в моноцитах (Sperber et al., 1993). CQ также предотвращает выработку интерлейкина бета и фактора некроза опухоли альфа (TNF-α) макрофагами (Jeong and Jue, 1997; Bondeson and Sundler, 1998). Интересно, что CQ подавляет функцию TNF-α с помощью нескольких механизмов, включая снижение трансляции его сообщения (Bondeson and Sundler, 1998), посттрансляционное изменение в растворимую форму (Jeong and Jue, 1997) или регулирование экспрессии рецептора (Jeong et al., 2002). CQ может также ингибировать активность фосфолипаз A1 и A2 (Manku and Horrobin, 1976; Löffler et al., 1985). CQ отрицательно влияет на катаболизм белков и презентацию антигенов, сохраняя фагоцитарную способность макрофагов (Ziegler and Unanue, 1982). HCQ также нацелен на функцию лимфоцитов, подавляя активацию Т-клеток посредством ингибирования передачи сигналов кальция (Goldman et al., 2000). Кроме того, в силу своей способности отменять передачу сигналов толл-подобных рецепторов, CQ и HCQ обеспечивают решающий иммуносупрессивный эффект, необходимый при лечении аутоиммунных заболеваний (Kyburz et al., 2006). Следует отметить, что иммуномодулирующие эффекты, вызываемые CQ и HCQ, вытекают из их терапевтического использования при ревматических заболеваниях, таких как ревматоидный артрит и СКВ.

Множество клеточных мишеней и эффекты HCQ делают его эффективным против многих заболеваний. Несмотря на некоторые многообещающие результаты при использовании с пациентами с COVID-19, четкий механизм действия при этом конкретном заболевании еще не выяснен. Однако, основываясь на вышеупомянутых мишенях HCQ при вирусных и аутоиммунных заболеваниях, можно описать некоторые потенциальные клеточные эффекты (см. Рисунок 1).

РИСУНОК 1 . Потенциальная противовирусная активность гидроксихлорохина против SARS-CoV-2. HCQ проявляет свою противовирусную активность, вмешиваясь в различные этапы цикла репликации вируса. Хотя точный способ действия против COVID-19 полностью не раскрыт, опыт предыдущих вирусных инфекций указывает на возможные сценарии. Во-первых, HCQ действует на уровне pre-entry. Он подавляет проникновение SARS-CoV-2 в клетку-хозяина с помощью трех различных механизмов: 1) он связывается с сиаловой кислотой и ганглиозидами, ключевыми компонентами, используемыми белком-спайком для проникновения вируса; 2) Он связывается с комплексом спайковый белок-рецептор ACE2; 3) Он подавляет активность хинон оксидоредуктазы 2 (QR2), которая необходима для биосинтеза сиаловой кислоты.Сиаловая кислота важна для распознавания лиганда. Во-вторых, как только вирус попадает в клетку, HCQ ингибирует pH-зависимый процесс удаления оболочки, подщелачивая кислые эндосомы. Это препятствует слиянию вируса и эндосомы и последующему высвобождению вирусной ДНК в цитоплазму. PH-зависимое проникновение вируса в клетку-хозяина встречалось с предыдущими коронавирусами. Кроме того, HCQ препятствует репликации вируса, блокируя каскад p38 MAPK. Кроме того, он действует на уровне вирусного белка, где препятствует посттрансляционным модификациям, таким как гликозилирование белка.Это изменяет белки SARS-CoV-2, влияя на способность вируса взаимодействовать с будущими клетками-хозяевами. Эффект HCQ распространяется на индукцию гибели инфицированных клеток за счет увеличения проницаемости лизосомальной мембраны и, как следствие, позволяет протеолитическим ферментам просачиваться в цитоплазму. Наконец, HCQ способствует иммунному ответу за счет усиления экспрессии антигена дендритными клетками, таким образом активируя цитотоксические Т-лимфоциты.

Клиническое применение гидроксихлорохина

Хинин в медицине начал применяться с 1630 г.D. когда порошок хинина, извлеченный из дерева хинного дерева, использовался для лечения малярии (Schrezenmeier and Dörner, 2020). Это произошло примерно за 300 лет до того, как лекарство и его производные, CQ и HCQ, были одобрены Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) не только для лечения и профилактики малярии, но и для лечения ревматических заболеваний (Таблица 1) ( Шрезенмайер и Дёрнер, 2020). В настоящее время производные хинина считаются безопасными и хорошо переносимыми лекарствами, которые эффективны при лечении широкого спектра хронических аутоиммунных и ревматических заболеваний, таких как антифосфолипидный синдром, дискоидная или системная красная волчанка, болезнь Шегрена, ювенильный идиопатический артрит, псориатический артрит и ревматоидный артрит. артрит и др. (Rynes, 1997; Lee et al., 2011; Аль-Бари, 2015; Шрезенмайер и Дёрнер, 2020). CQ и HCQ одинаково эффективны при лечении кожных заболеваний, таких как дерматомиозит, кожный саркоидоз, эозинофильный фасциит, красный плоский лишай и поздняя кожная порфирия (Rynes, 1997; Al-Bari, 2015). В последних случаях они используются в основном, когда обычные методы лечения противопоказаны или неэффективны (Rynes, 1997; Al-Bari, 2015).

ТАБЛИЦА 1 . Ключевые события, отражающие хорошо одобренные клинические применения гидроксихлорохина (HCQ) и хлорохина (CQ), а также историческую эволюцию их использования в области медицины (Schrezenmeier and Dörner, 2020).

Множество отличительных иммуномодулирующих и противовоспалительных свойств сделали HCQ клинически привлекательным лекарством (Al-Bari, 2015; Schrezenmeier and Dörner, 2020). Тем не менее, в литературе также сообщалось о дополнительных отличительных эффектах. Они включают антитромботические, противоопухолевые и антимикробные эффекты (Al-Bari, 2015; Schrezenmeier and Dörner, 2020). Кроме того, использование HCQ у пациентов с системной красной волчанкой и ревматоидным артритом было связано со снижением частоты сердечно-сосудистых заболеваний и сахарного диабета, что проливает свет на дополнительные благоприятные свойства, которые требуют дальнейшего изучения (Al-Bari, 2015; Schrezenmeier and Дёрнер, 2020).Аналогичным образом, HCQ был связан с улучшением гликемического и липидного профилей у этих пациентов и, следовательно, с улучшением общей выживаемости и качества жизни (Al-Bari, 2015; Schrezenmeier and Dörner, 2020).

Сообщалось также о других применениях HCQ. Например, при совместном применении с доксициклином HCQ может быть эффективным при лечении эндокардита Q-лихорадки (Raoult et al., 1990; Raoult et al., 1999). Этот режим приводит к более быстрому выздоровлению и редким рецидивам по сравнению с первоначально принятым режимом (Raoult et al., 1999). Аналогичным образом, HCQ, по-видимому, подходит для лечения болезни Уиппла и эндокардита Tropheryma whipplei (Boulos et al., 2004; Fenollar et al., 2013; Lagier et al., 2014). Кроме того, HCQ эффективен против множества других микробных агентов, таких как лямблии, вирус Эбола, гепатит C, ВИЧ и чикунгунья (Al-Bari, 2015).

Гидроксихлорохин и COVID-19

В последнее время пандемия COVID-19 вызвала усиленный поиск потенциальных методов лечения, которые могли бы оказаться эффективными в контроле или улучшении результатов заболевания.Из-за его противовирусных свойств, особенно тех, которые показали его эффективность в уменьшении действия SARS-CoV-1 (Keyaerts et al., 2004; Colson et al., 2020; Hashem et al., 2020), считалось, что HCQ перепрофилирован для борьбы с SARS-CoV-2 и последующим COVID-19.

Было проведено несколько исследований in vitro для оценки свойств CQ и HCQ против SARS-CoV-2 (Hashem et al., 2020; Liu et al., 2020; Wang et al., 2020; Yao et al. ., 2020). Важно отметить, что оба препарата, по-видимому, значительно ингибируют репликацию SARS-CoV-2 (Hashem et al., 2020; Лю и др., 2020; Wang et al., 2020; Yao et al., 2020). Кроме того, комбинированное лечение HCQ и азитромицином вызывало синергетический эффект против SARS-CoV-2 in vitro (Andreani et al., 2020). Здесь мы обсуждаем разногласия, связанные с использованием HCQ у пациентов с COVID-19, исследуя поддерживающие и противоположные доказательства.

Плюсы

Есть много преимуществ, которые делают HCQ привлекательным кандидатом. Это не только безопасно, но и является эффективным лекарством с широким спектром действия, охватывающим различные микробные и аутоиммунные заболевания, вероятно, благодаря его способности модулировать иммунную систему (Wallace et al., 2012; Шрезенмайер и Дёрнер, 2020). Кроме того, HCQ — дешевый препарат с хорошим профилем безопасности, накопленный за сотни лет его использования (Rynes, 1997; Savarino et al., 2003; Lee et al., 2011; Al-Bari, 2015; Schrezenmeier and Дёрнер, 2020; Чжоу и др., 2020a). Важно отметить, что его можно безопасно использовать и у беременных женщин (Costedoat-Chalumeau et al., 2003; Sperber et al., 2009).

Нежелательные побочные эффекты этого препарата также незначительны. К ним относятся симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта (тошнота, рвота и боль в животе), а также кожные проявления и симптомы со стороны ЦНС (головная боль, головокружение, шум в ушах и нарушения сна), которые встречаются реже (Rynes, 1997; Lee et al., 2011; Аль-Бари, 2015; Литтлджон, 2020; Шрезенмайер и Дёрнер, 2020). Ретинопатия считается наиболее опасным побочным эффектом HCQ; тем не менее, это редкое проявление, которое возникает в основном при длительном применении терапии с высокими дозами (Rynes, 1997; Wolfe and Marmor, 2010; Lee et al., 2011; Al-Bari, 2015; Littlejohn, 2020; Schrezenmeier and Dörner, 2020). ). Тем не менее, долгосрочный мониторинг и наблюдение, а также жесткое регулирование дозировки связаны со снижением частоты ретинопатии, вызванной HCQ (Abdulaziz et al., 2018; Хорхе и др., 2018). Другие редкие побочные эффекты, обсуждаемые в следующем разделе, встречаются в основном при наличии сопутствующих сердечно-сосудистых, почечных и печеночных заболеваний (Gevers et al., 2020). Кроме того, HCQ менее токсичен и лучше переносится, чем CQ (Rynes, 1997; Avina-Zubieta et al., 1998; Al-Bari, 2015; Liu et al., 2020; Schrezenmeier and Dörner, 2020; Zhou et al., ., 2020а).

Благодаря своей доступности, эффективности и переносимости, HCQ привлек к себе повышенное внимание.Он был тщательно изучен в многочисленных исследованиях в качестве потенциального средства лечения возникающей пандемии COVID-19. В этом контексте в нескольких исследованиях, проведенных в разных частях мира, обсуждались преимущества, вызванные добавлением HCQ к консервативным симптоматическим методам лечения, таким как жидкостная, жаропонижающая и кислородная терапия (таблица 2) (Gao et al., 2020; Gautret et al., 2020a; Gautret et al., 2020b; Million et al., 2020; Chen Z. et al., 2020).

ТАБЛИЦА 2 . Клинические испытания в поддержку использования HCQ.Был проведен поиск в следующих базах данных: Cochrane, embase, Medline, New England Journal of Medicine и PubMed. В общей сложности пять исследований подтвердили использование HCQ у пациентов с COVID-19. Все они, кроме одного, были наблюдательными когортными исследованиями.

До заметного глобального распространения болезни в Китае уже начались испытания этого препарата (Gao et al., 2020). В этом контексте сообщалось, что HCQ более эффективен, чем обычное симптоматическое лечение, согласно данным, полученным от более чем 100 пациентов (Gao et al., 2020). Действительно, у пролеченных пациентов уменьшилась тяжесть заболевания, улучшились рентгенологические данные, более быстрое выведение вируса и более раннее выздоровление (Gao et al., 2020). Тем не менее, это исследование имеет несколько ограничений. Во-первых, это нерандомизированное наблюдательное исследование с ограниченным числом участников. Во-вторых, возраст и клинический статус пролеченных пациентов до COVID-19 явно не указываются.

Аналогичным образом Zhaowei et al оценили эффективность HCQ в когорте из 62 пациентов с SARS-CoV-2 (Chen Z.и др., 2020). Время до клинического выздоровления (TTCR), время восстановления температуры тела и время ремиссии от кашля были значительно сокращены в группе, получавшей HCQ, по сравнению с контрольной группой (Chen Z. et al., 2020). Кроме того, более быстрое разрешение пневмонии было зарегистрировано у 80,6% пациентов, получавших HCQ, по сравнению с 54,8% пациентов из контрольной группы (Chen Z. et al., 2020). В этом исследовании диагноз COVID-19 был подтвержден по нескольким параметрам, включая клинические, лабораторные, физические и радиологические данные.Это сводит к минимуму риск пропуска случая COVID-19, а также риск неправильной диагностики пациентов с симптомами, подобными COVID-19. Исследование представляет собой рандомизированное контролируемое клиническое исследование. Однако исследование не является слепым и ограничено небольшим количеством участников. Точно так же были исключены пациенты с серьезным и критическим COVID-19, а также пациенты с тяжелыми ранее существовавшими заболеваниями, включая аритмию, тяжелые заболевания печени и почек и заболевания сетчатки. Это делает выбранную когорту менее восприимчивой к побочным эффектам, связанным с HCQ.

Французское исследование включало в общей сложности 36 пациентов, 20 из которых получали HCQ, а 16 получали контрольную терапию (Gautret et al., 2020a). Азитромицин был добавлен к лечению шести пациентов, получавших HCQ, чтобы избежать наложенной бактериальной инфекции. Эти пациенты получали ежедневный эхокардиографический мониторинг (Gautret et al., 2020a). В этом исследовании было обнаружено, что HCQ превосходит поддерживающую терапию. После 7 дней лечения вирусная нагрузка снизилась у 70% пациентов, получавших HCQ (Gautret et al., 2020а). Точно так же добавление азитромицина к HCQ приводило к более быстрому выведению вируса по сравнению с одним HCQ. Фактически, эта комбинация индуцировала синергетическое снижение вирусной нагрузки (Gautret et al., 2020a). Во втором несравнительном исследовании Gautret et al. еще раз рассмотрели преимущества включения HCQ в ведение пациентов с COVID-19 в когорте из 80 пациентов (Gautret et al., 2020b). 81,3% пациентов имели легкое заболевание с благоприятным прогнозом (Gautret et al., 2020b). 5% были бессимптомными, и около 15% имели заболевание от умеренной до тяжелой степени, требующее кислородной терапии. Три пациента были госпитализированы в отделение интенсивной терапии (Gautret et al., 2020b). Всем пациентам назначали комбинацию азитромицина (500 мг в день 1, после 4-дневного курса по 250 мг в день) и HCQ (600 мг в день в течение 10 дней) (Gautret et al., 2020b). По крайней мере, через 3 дня лечения у 78 пациентов улучшились клинические исходы, раннее выздоровление и снижение вирусной нагрузки. Однако один пациент умер, а один остался в отделении интенсивной терапии, несмотря на лечение (Gautret et al., 2020b). Первое исследование, проведенное Gautret el al , представляет собой одноцентровое нерандомизированное клиническое исследование, ограниченное отсутствием рандомизации и ослепления, а также минимальным количеством включенных участников. Вероятно, это ограничено отсутствием адекватного последующего наблюдения. Кроме того, были исключены пациенты с ретинопатией, удлинением интервала QT и дефицитом G6PD, которые склонны к развитию опасных для жизни побочных эффектов HCQ. Это снижает частоту серьезных побочных эффектов у пролеченных пациентов.Точно так же второе исследование представляет собой нерандомизированное несравнительное обсервационное исследование, которое, вероятно, ограничено небольшим количеством участников и установленными критериями исключения. Фактически, доказательства, полученные в результате этих исследований, не считаются высококачественными из-за ограниченного размера выборки и повышенного риска систематической ошибки отбора.

В других исследованиях изучалась эффективность той же комбинации в когорте из 1061 подтвержденного стационарного пациента (Million et al., 2020). В этом исследовании было определено влияние этой комбинации на смертность, выздоровление и выделение вируса.Результаты показали, что вирус исчез у 91,7% пациентов менее чем через 10 дней лечения. 4,4% пациентов с более высокой исходной вирусной нагрузкой требовался более длительный период — 10 дней, чтобы избавиться от вируса (Million et al., 2020). Неблагоприятный клинический исход отмечен у 46 пациентов (4,3%). Точно так же восемь пациентов, что составляет 0,75%, умерли из-за дыхательной недостаточности. О сердечной токсичности не сообщалось ни у одного из пациентов (Million et al., 2020). Это исследование продемонстрировало, что HCQ и азитромицин можно безопасно использовать у пациентов с ранней стадией заболевания, особенно при отсутствии сопутствующих осложнений.Они ускоряют выздоровление и улучшают общие клинические результаты (Million et al., 2020). В отличие от ранее упомянутых исследований, это исследование включает большую когорту участников. У большинства пациентов уровень лекарств в плазме адекватно контролировался, а диагноз COVID-19 был основан на достаточных клинических и лабораторных данных. Однако, как и все ретроспективные исследования, этому исследованию присущи ограничения, присущие ретроспективным исследованиям, обозначенные отсутствием контроля и рандомизации, а также необъективным отбором участников.Кроме того, пациенты, предрасположенные к токсичности HCQ, вероятно, были исключены из исследуемой когорты.

Вышеупомянутые испытания вызвали призыв к дальнейшим расследованиям. Фактически, из 688 и 2122 текущих испытаний, связанных с COVID-19, зарегистрированных в регистре клинических испытаний Китая и Национальной медицинской библиотеке США соответственно, 11 и 218 испытаний направлены на изучение эффективности HCQ у пациентов с COVID-19 (Китайское клиническое испытание Реестр, 2020; Национальная медицинская библиотека США, 2020a; U.С. Национальная медицинская библиотека, 2020b; Национальная медицинская библиотека США, 2020c; Национальная медицинская библиотека США, 2020d). В конечном счете, есть надежда, что эти испытания дадут более четкое представление о терапевтической роли HCQ в лечении инфекции SARS-CoV-2, а также в предотвращении ее распространения.

Против

Гидроксихлорохин и вирусный клиренс у пациентов с COVID

Хотя HCQ относительно безопасен для лечения малярии и аутоиммунных заболеваний, пациенты с COVID-19 могут быть более восприимчивы к его побочным реакциям, отчасти из-за нарушенной функции жизненно важных органов. органы, вторичные по отношению к инфекции SARS-CoV-2 (Gevers et al., 2020). Поскольку HCQ выводится почками и печенью, тяжелобольные пациенты, особенно с нарушением функции почек или печени, подвергаются повышенному риску серьезных побочных реакций. Кроме того, лекарственные взаимодействия являются основными причинами некоторых побочных эффектов HCQ (Gevers et al., 2020).

HCQ имеет период полураспада около 2 месяцев и неадекватно распределяется в жировых тканях. Таким образом, настоятельно рекомендуется мониторинг побочных эффектов в течение длительного периода времени, особенно при наличии тяжелых сопутствующих состояний (Gevers et al., 2020). Кроме того, побочные эффекты HCQ могут маскировать или влиять на симптомы конкретных заболеваний, таких как COVID-19. Это особенно важно при оценке их сердечно-сосудистых, нервно-психических и желудочно-кишечных побочных эффектов (Gevers et al., 2020).

После решения Министерства здравоохранения Франции о разрешении использования HCQ для лечения COVID-19 в проспективном исследовании оценивались результаты 11 пациентов, госпитализированных в больницу Сен-Луи (Molina et al., 2020).Эти пациенты получали 600 мг / сут HCQ в комбинации с азитромицином в течение 10 дней (500 мг в день 1 и 250 мг в день 2–5) (Molina et al., 2020). Среди них восемь имели сопутствующие заболевания (Molina et al., 2020). На момент начала лечения у 10 пациентов была лихорадка и они получали кислородную терапию. Через 5 дней лечения один пациент скончался, а двое были переведены в отделение интенсивной терапии. Кроме того, у одного пациента лечение было прекращено через 4 дня из-за удлинения интервала QT (Molina et al., 2020).Через пять-шесть дней после начала лечения мазки из носоглотки восьми пациентов все еще были положительными на SARS-CoV-2 (Molina et al., 2020). Однако эти результаты противоречили оптимистическим результатам более раннего исследования, в котором 70% пациентов, получавших HCQ, имели отрицательный результат ПЦР к 6-му дню по сравнению с только 12,5% пациентов в контрольной группе (Gautret et al., 2020a). Соответственно, не сообщалось также о значительных различиях в скорости выведения вируса, продолжительности пребывания в больнице, рентгенологических данных или регулировании температуры между контрольной группой и группами, получавшими HCQ (Chen J.и др., 2020). Тем не менее, эти два исследования, проведенные Molina и др. и Chen и др. , ограничены небольшим числом включенных в исследование пациентов. Первое исследование, вероятно, имеет несколько ограничений из-за отсутствия контроля и рандомизации, а также ошибок, присущих обсервационным исследованиям.

Исследование RECOVERY — это большое многоцентровое рандомизированное контролируемое исследование, в котором сравнивается несколько методов лечения со стандартным лечением пациентов с COVID-19 (Horby et al., 2020). Предварительные результаты, отражающие разницу между HCQ и стандартной помощью, не показали улучшения клинических результатов в группе, получавшей HCQ (Horby et al., 2020). HCQ не был связан с улучшением смертности в группе лечения. Тем не менее, это привело к увеличению продолжительности госпитализации и повышенному риску ухудшения и прогрессирования вспомогательной вентиляции (Horby et al., 2020). Исследование SOLIDARITY — это еще одно многонациональное многоцентровое рандомизированное контролируемое клиническое исследование, выпущенное ВОЗ (ВОЗ, 2020b).В нем сравнивается несколько предлагаемых методов лечения COVID-19 с обычным уходом. Из-за отсутствия или минимальной пользы от HCQ комитет решил прекратить использование HCQ в этом исследовании (ВОЗ, 2020b). Кроме того, исследование ORCHID, третье многоцентровое плацебо-контролируемое рандомизированное клиническое исследование, сравнивающее HCQ со стандартной терапией, также было прекращено Национальными институтами здравоохранения из-за отсутствия пользы от HCQ (NIH, 2020).

Кроме того, в недавно опубликованном многоцентровом рандомизированном клиническом исследовании, проведенном в Бразилии, сравнивалась эффективность одного стандартного лечения с каждым из видов стандартного лечения плюс HCQ и стандартного ухода плюс комбинированного HCQ и азитромицина у госпитализированных пациентов с легким и средним заболеванием (Cavalcanti et al., 2020). 667 пациентов были случайным образом распределены в одну из трех групп. HCQ давали в дозе 800 мг / день, разделенной на две дозы в течение 7 дней. Азитромицин назначался в дозе 500 мг один раз в сутки в течение 7 дней. Не было отмечено значительных различий в клиническом статусе между тремя группами лечения через 15 дней от начала лечения (Cavalcanti et al., 2020). Кроме того, группы, получавшие HCQ и HCQ плюс азитромицин, столкнулись с большим количеством побочных эффектов по сравнению с контрольной группой.Удлиненный интервал QT и повреждение печени были среди наблюдаемых побочных эффектов в этом исследовании (Cavalcanti et al., 2020). Это исследование было подвергнуто множественным ограничениям. Во-первых, количество оцениваемых исходов было ограниченным. Следовательно, роль каждого из HCQ и азитромицина в лечении COVID-19 не может быть объективно оценена и основана на этом исследовании, поскольку неизученные преимущества, вызванные HCQ и азитромицином, могут быть легко упущены. Во-вторых, в этом исследовании не применялось ослепление. Наконец, нельзя утверждать, что соблюдение режима лечения связано с повышенным спросом на эти лекарства и их отсутствием в некоторых из зарегистрированных больниц.Это может привести к необъективным и непоследовательным результатам.

Кроме того, в недавно опубликованном исследовании было обнаружено, что инфекция SARS-CoV-2 устойчива к CQ в клетках легких, положительных по TMPRSS2, клеточной протеазе, которая способствует инвазии клеток SARS-CoV-2 (Markus Hoffmann, 2020). Потенциальный ингибирующий эффект, вызванный экспрессией TMPRSS2, не наблюдался в нелегочных клеточных линиях (Markus Hoffmann, 2020). Это означает, что CQ и, вероятно, HCQ, могут быть неэффективными в устранении инфекции SARS-CoV-2 в легочных тканях, и что первоначальные результатов in vitro , подтверждающие использование HCQ у пациентов с COVID-19, могли быть результатом проведенных экспериментов. на нелегочных тканях (Markus Hoffmann, 2020).Соответственно, использование HCQ для устранения инфекции SARS-CoV2 не было подтверждено доклиническими данными, несмотря на различные используемые модели, такие как мыши или хомяки, или даже исследования in vitro, (Funnell et al., 2020). Это подтверждает гипотезу, предложенную Хоффманом. Короче говоря, HCQ, по-видимому, не подходит для лечения человеческих или человекоподобных легочных тканей, инфицированных SARS-CoV2, как было заключено в этих исследованиях in vitro, и in vivo, .

Таким образом, несмотря на положительный результат, о котором сообщают некоторые исследования, вопрос о том, является ли HCQ эффективным или нет, остается спорным.Кроме того, нет убедительных доказательств, подтверждающих мощную противовирусную активность или клиническую пользу комбинации HCQ и азитромицина в лечении госпитализированных пациентов с COVID-19 с умеренным и тяжелым заболеванием. В таблице 3 показаны неблагоприятные результаты некоторых завершенных клинических испытаний.

ТАБЛИЦА 3 . Клинические испытания против использования HCQ. Был проведен поиск в следующих базах данных: Cochrane, Embase, Medline, New England Journal of Medicine и PubMed. Всего четыре испытания (два рандомизированных контролируемых исследования (РКИ) и два когортных исследования) не показали значительного улучшения клинических исходов и смертности при сравнении группы, получавшей HCQ, с контрольной группой.

Серьезные побочные эффекты гидроксихлорохина

В дополнение к вышеупомянутым хорошо переносимым желудочно-кишечным и кожным побочным реакциям HCQ может приводить к серьезным кардиотоксическим, метаболическим и нейропсихиатрическим проявлениям, как показано на рисунке 2. Действительно, HCQ может вызывать множество сердечных событий, обозначенных блокадой ножки пучка Гиса, полной АВ-блокадой, удлинением QRS и QT, пуантами Torsades и желудочковой тахиаритмией (Jordan et al., 1999; Marquardt and Albertson, 2001; Chen et al., 2006; Круиссельбринк и Заки Ахмед, 2010 г .; Gevers et al., 2020). Точно так же у пациентов, получающих HCQ, может развиться кардиотоксичность, вторичная по отношению к гипокалиемии, вызванной HCQ (Jordan et al., 1999; Marquardt and Albertson, 2001; Chen et al., 2006; Kruisselbrink and Zaki Ahmed, 2010). Эти пациенты могут стать склонными к серьезным опасным для жизни эпизодам гипотонии, особенно в условиях длительного приема и передозировки (Jordan et al., 1999; Marquardt and Albertson, 2001; Chen et al., 2006; Kruisselbrink and Zaki Ahmed, 2010).

РИСУНОК 2 . Использование HCQ может вызвать множество побочных эффектов. Большинство наблюдаемых побочных эффектов легкие и хорошо переносимые, которые включают кожные, желудочно-кишечные и неврологические симптомы, выражающиеся в зуде, кожной сыпи, боли в животе, тошноте, рвоте, диарее, головной боли и головокружении. Опасные для жизни сердечно-сосудистые побочные эффекты особенно часто встречаются у пациентов в критическом состоянии с сопутствующими заболеваниями печени или почек. Точно так же токсичность HCQ может быть усилена совместным введением лекарств, которые могут влиять на метаболизм HCQ или усиливать его проаритмические эффекты.Ретинопатия представляет собой еще один опасный побочный эффект, связанный с хроническим употреблением высоких доз HCQ. Кроме того, пациенты могут испытывать серьезные желудочно-кишечные расстройства, такие как повреждение печени, и нервно-психические расстройства, такие как спутанность сознания, судороги, изменения настроения и психоз.

Длительное использование HCQ в редких случаях было связано с прогрессирующей кардиомиопатией, а также с последующим нарушением сердечно-сосудистой системы и сердечной недостаточностью (Costedoat-Chalumeau et al., 2007; Hartmann et al., 2011; Muthukrishnan et al., 2011; Joyce et al., 2013; Чжао и др., 2018). Примечательно, что кардиотоксичность HCQ в первую очередь встречается у пациентов с уже существующими заболеваниями печени или почек, а также у тех, кто принимает лекарства, которые могут влиять на метаболизм HCQ или усиливать его побочные эффекты (Chen et al., 2006; Gevers et al., 2020). Например, риск удлинения интервала QT увеличивается при добавлении HCQ к другим препаратам, удлиняющим интервал QT, таким как макролиды (Gevers et al., 2020). Кроме того, педиатрические пациенты также подвержены проаритмическим эффектам HCQ, даже если используются только небольшие дозы (Erickson et al., 2020). Следовательно, необходимы как точное дозирование, так и тщательный мониторинг, чтобы избежать фатальной кардиотоксичности HCQ.

В недавнем исследовании мужской пол, пожилой возраст и одновременный прием НПВП были определены как потенциальные факторы риска кардиотоксичности HCQ (Cohen et al., 2020). Кроме того, похоже, что CQ повышает риск кардиотоксичности по сравнению с HCQ (Cohen et al., 2020). В контексте кардиотоксичности HCQ становится особенно актуальным для пациентов с COVID-19. Действительно, два отдельных исследования показывают, что поражение сердца является предиктором смертности у пациентов с COVID-19 (Guo et al., 2020; Ши и др., 2020). Это объясняет более высокую частоту осложнений и нежелательных явлений в группе пациентов с COVID-19, получавших HCQ, о чем свидетельствует открытое рандомизированное клиническое исследование с участием 150 китайских пациентов (Tang et al., 2020).

Гипогликемия — еще один серьезный побочный эффект, который вызывает, хотя и редко, HCQ (Cansu and Korkmaz, 2008; Sheikhbahaie et al., 2016; Richard De-Heer, 2018). Действительно, данные, полученные как из in vitro, , так и из клинических исследований, подчеркивают роль HCQ в снижении уровня глюкозы в крови.В первую очередь это достигается за счет усиления гипогликемических эффектов инсулина (Cynober et al., 1987). Похоже, что HCQ увеличивает уровни инсулина в плазме за счет подавления его внутриклеточного распада, а также усиления внутриклеточного накопления (Cynober et al., 1987). Кроме того, HCQ вызывает этот гипогликемический эффект за счет снижения скорости рециклинга рецепторов глюкозы, а также за счет стимулирования инсулинозависимого поглощения глюкозы клетками (Cynober et al., 1987).

Другие нежелательные исходы, такие как психиатрические и нервно-мышечные побочные эффекты, также были связаны с использованием HCQ, особенно при длительном применении повышенных доз.Некоторые из этих побочных эффектов включают беспокойство, возбуждение, депрессию и изменения личности (Manzo et al., 2017; Gevers et al., 2020). Более того, спутанность сознания, головная боль, невропатия, судороги, нарушения зрения и слабость представляют собой обратимые проявления ЦНС при применении высоких доз HCQ (Estes et al., 1987; Stein et al., 2000; Kwon et al., 2010; Vinciguerra et al. ., 2015; Gevers et al., 2020).

В таблице 4 показаны побочные эффекты, с которыми сталкиваются пациенты с COVID-19, а также частота этих побочных эффектов среди леченных пациентов.В целом частота побочных эффектов колеблется от 0,06% до 33,67%. Это во многом зависит от введенной дозы HCQ и сосуществования сердечных, печеночных и почечных заболеваний, которые могут усилить токсичность HCQ. Большинство побочных эффектов были легкими кожными, желудочно-кишечными и неврологическими. Тем не менее, эти пациенты, вероятно, столкнулись с серьезными опасными для жизни побочными эффектами, такими как торсады точек и удлинение интервала QT.

ТАБЛИЦА 4 . Побочные эффекты, с которыми сталкиваются пациенты с COVID-19, и их частота среди пролеченных пациентов.

Гидроксихлорохин как пред- и постконтактная профилактика COVID-19

На сегодняшний день не одобрены лекарства для пред- и постконтактной профилактики COVID-19. Адекватный карантин и мониторинг клинических симптомов остаются основой постконтактной профилактики. Точно так же надлежащая практика социального дистанцирования и правильное использование средств индивидуальной защиты, включая маски для лица и очки, по-прежнему являются основными средствами предотвращения заражения COVID-19.Тем не менее, роль HCQ в предотвращении COVID-19 до и после контакта изучалась в различных клинических исследованиях. Boulware et al. провели двойное слепое рандомизированное клиническое исследование с участием 821 человека из США и Канады, которые были подвержены подтвержденному случаю COVID-19 дома или на работе (Boulware et al., 2020). Участники были разделены на две группы в зависимости от степени индивидуальной защиты во время воздействия: 1) группа воздействия высокого риска и 2) группа воздействия умеренного риска.Лица, подвергавшиеся воздействию, в маске и без нее, относились к группе умеренного и высокого риска соответственно (Boulware et al., 2020). Кроме того, участникам случайным образом давали плацебо или HCQ. Кумулятивная доза HCQ 3800 мг, разделенная на пять дней, была предоставлена ​​группе лечения. Через 14 дней наблюдения не было значительных различий в количестве вновь диагностированных случаев COVID-19 среди плацебо и группы лечения. Кроме того, пациенты, прошедшие лечение, подвергались большему количеству побочных эффектов, при этом большинство побочных эффектов были самоограничивающимися желудочно-кишечными и неврологическими эффектами (Boulware et al., 2020).

Интересно, что это испытание имело несколько ограничений, включая неадекватное подтверждение контакта и неправильный диагноз COVID-19 на основании клинических симптомов в отсутствие молекулярного подтверждения. Действительно, участники, у которых развились клинические симптомы, аналогичные симптомам COVID-19, считались SARS-CoV2 положительными. Их инфекция не была доказана положительным результатом тестирования полимеразной цепной реакции (ПЦР) SARS-CoV2. Кроме того, средний возраст включенных участников составлял 40 лет, и большинство из них были в возрасте от 33 до 50 лет.Это означает, что большинство зачисленных участников были здоровыми молодыми людьми. В результате профилактический эффект HCQ может быть лучше оценен с помощью более крупных рандомизированных клинических испытаний, в которых участвуют пожилые пациенты с ранее существовавшими коморбидными состояниями.

Предэкспозиционный профилактический эффект HCQ, вероятно, изучался во множестве полных и продолжающихся исследований. В одном двойном слепом рандомизированном клиническом исследовании эффективность HCQ в предотвращении COVID-19 была изучена среди 1483 американских и канадских медицинских работников, которые в значительной степени контактируют с пациентами с COVID-19 в зонах повышенного риска, таких как отделения неотложной помощи и отделения COVID-19. и отделения интенсивной терапии (Rajasingham et al., 2020). Участники были разделены на три группы: 1) группа HCQ 1, получавшая дозу 400 мг один раз в неделю в течение 12 недель, 2) группа HCQ 2, получавшая дозу 800 мг дважды в неделю в течение 12 недель, и 3) плацебо. группа (Rajasingham et al., 2020). После 12 недель наблюдения не было обнаружено значительных различий в заболеваемости COVID-19 между тремя группами (Rajasingham et al., 2020). Однако, как и предыдущее исследование, это исследование было ограничено отсутствием адекватного тестирования ПЦР, а также внутренней ошибкой, связанной с использованием ПЦР для подтверждения COVID-19.Точно так же диагноз COVID-19 у многих участников был поставлен на основании клинической оценки и не был подтвержден лабораторными исследованиями.

Заключение

Доказательства эффективности и безопасности HCQ при лечении инфекции COVID-19 по-прежнему противоречивы. Большинство доступных исследований не рандомизированы с предварительными результатами. Мы утверждаем, что срочно необходимы многоцентровые плацебо-контролируемые рандомизированные клинические испытания для оценки эффективности, безопасности, а также для определения наилучшего режима дозирования HCQ.Также важно оценить долгосрочные эффекты, и поэтому очень необходимо тщательное изучение предстоящих результатов, о которых сообщают проводимые высококачественные исследования (см. Таблицу 5).

ТАБЛИЦА 5 . | Текущие клинические испытания. Из-за недостатка надежных доказательств во многих частях мира были начаты сотни клинических испытаний. Здесь мы провели поиск в базах данных Cochrane, embase, Medline, New England Journal of Medicine и PubMed, а также в реестре клинических испытаний (ClinicalTrial.gov), и мы случайным образом выбрали несколько текущих испытаний.

Вклад авторов

MA, FB и AE разработали идею и структуру обзора. NY, RZ, SA написали первый черновик статьи. Окончательное редактирование выполнила AE. Все авторы внесли свой вклад в исправления и корректировки последующих версий статьи. Все авторы одобряют и соглашаются с содержанием.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Сокращения

HCQ, гидроксихлорохин; LFT, функциональные пробы печени; AV блокада, атриовентрикулярная блокада.

Ссылки

Accapezzato, D., Visco, V., Francavilla, V., Molette, C., Donato, T., Paroli, M., et al. (2005). Хлорохин усиливает ответы CD8 + Т-клеток человека против растворимых антигенов in vivo . J. Exp. Med. 202, 817–828. DOI: 10.1084 / jem.20051106.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Adhikari, S.П., Мэн, С., Ву, Й.-Дж., Мао, Ю.-П., Е, Р.-Х., Ван, К.-З. и др. (2020). Эпидемиология, причины, клинические проявления и диагностика, профилактика и борьба с коронавирусной болезнью (COVID-19) в период ранней вспышки: обзорный обзор. Заражение. Дис. Бедность 9, 29. doi: 10.1186 / s40249-020-00646-x.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аль-Бари, М.А.А. (2015). Аналоги хлорохина в открытии лекарств: новые направления использования, механизмы действия и токсические проявления от малярии до разнообразных заболеваний. J. Antimicrob. Chemother. 70, 1608–1621. DOI: 10.1093 / jac / dkv018.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Андреани, Дж., Ле Бидо, М., Дюфлот, И., Жардо, П., Роллан, К., Боксбергер, М., и др. (2020). In vitro тестирование комбинированного гидроксихлорохина и азитромицина на SARS-CoV-2 показывает синергетический эффект. Microb. Патог. 145, 104228. DOI: 10.1016 / j.micpath.2020.104228.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Avina-Zubieta, J.А., Галиндо-Родригес, Г., Ньюман, С., Суарес-Алмазор, М. Э., и Рассел, А. С. (1998). Долгосрочная эффективность противомалярийных препаратов при ревматических заболеваниях. Ann. Реум. Дис. 57, 582–587. DOI: 10.1136 / ard.57.10.582.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bangalore, S., Sharma, A., Slotwiner, A., Yatskar, L., Harari, R., Shah, B., et al. (2020). Подъем сегмента ST у пациентов с Covid-19 — серия случаев. N. Engl. J. Med. 382, ​​2478–2480.doi: 10.1056 / NEJMc2009020

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bondeson, J., and Sundler, R. (1998). Противомалярийные препараты подавляют активацию фосфолипазы А2 и индукцию интерлейкина 1β и фактора некроза опухоли α в макрофагах: влияние на механизм их действия при ревматоидном артрите. Gen. Pharmacol. Васк. Syst. 30, 357–366. DOI: 10.1016 / s0306-3623 (97) 00269-3.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Boulos, A., Rolain, J.-M., and Raoult, D.(2004). Чувствительность Tropheryma whipplei к антибиотикам в клетках MRC5. Антимикробный. Агенты Chemother. 48, 747–752. DOI: 10.1128 / aac.48.3.747-752.2004.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Boulware, D. R., Pullen, M. F., Bangdiwala, A. S., Pastick, K. A., Lofgren, S. M., Okafor, E. C., et al. (2020). Рандомизированное испытание гидроксихлорохина в качестве постконтактной профилактики COVID-19. N. Engl. J. Med. 383, 517–525. DOI: 10,1056 / nejmoa2016638.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Browning, D. J. (2014). «Фармакология хлорохина и гидроксихлорохина». in Гидроксихлорохиновая и хлорохиновая ретинопатия . Редактор Д. Дж. Браунинг (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Springer-Verlag), 35–63 .

Google Scholar

Кальдерон, Дж. М., Зерон, Х. М. и Падманабхан, С. (2020). Лечение гидроксихлорохином по сравнению с гидроксихлорохином + нитазоксанидом у пациентов с COVID-19 с факторами риска плохого прогноза: структурированное резюме протокола исследования для рандомизированного контролируемого исследования. Испытания 21, 504. DOI: 10.1186 / s13063-020-04448-2.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джансу, Д. У. и Коркмаз, К. (2008). Гипогликемия, вызванная гидроксихлорохином у пациента, не страдающего диабетом, который лечился от РА. Ревматология 47, 378–379. DOI: 10.1093 / ревматология / kem378.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cascella, M., Rajnik, M., Cuomo, A., Dulebohn, S.C, and Di Napoli, R. (2020).Особенности, оценка и лечение коронавируса (COVID-19). Statpearls [Интернет]. Остров сокровищ (Флорида): StatPearls Publishing.

Google Scholar

Кавальканти, А. Б., Зампиери, Ф. Г., Роза, Р. Г., Азеведо, Л. С. П., Вейга, В. К., Авезум, А. и др. (2020). Гидроксихлорохин с азитромицином или без него при COVID-19 легкой и средней степени тяжести. N. Engl. J. Med. [Epub перед печатью] doi: 10.1056 / nejmoa2019014. CrossRef Full Text

CrossRef Full Text | Google Scholar

Chen, C.-Y., Wang, F.-L., and Lin, C.-C. (2006). Хроническое употребление гидроксихлорохина связано с удлинением интервала QT и рефрактерной желудочковой аритмией. Clin. Toxicol. 44, 173–175. DOI: 10.1080 / 15563650500514558.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, J., Liu, D., Liu, L., Liu, P., Xu, Q., Xia, L., et al. (2020). Пилотное исследование применения гидроксихлорохина в лечении пациентов с распространенным коронавирусным заболеванием-19 (COVID-19). J. Zhejiang Univ. 49, 215–219 [на китайском языке, с резюме на английском].DOI: 10.3785 / j.issn.1008-9292.2020.03.03.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, Z., Hu, J., Zhang, Z., Jiang, S., Han, S., Yan, D., et al. (2020). Эффективность гидроксихлорохина у пациентов с COVID-19: результаты рандомизированного клинического исследования. medRxiv DOI: 10.1101 / 2020.03.22.20040758.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cheng, Y., Luo, R., Wang, K., Zhang, M., Wang, Z., Dong, L., et al. (2020). Заболевание почек связано с госпитальной смертью пациентов с COVID-19. Kidney Int. 97, 829–838. doi: 10.1016 / j.kint.2020.03.005

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коэн, И. В., Макунц, Т., Мумеджян, Т., Исса, М., и Абагян, Р. (2020). Детерминанты сердечных побочных эффектов хлорохина и гидроксихлорохина за 20 лет отчетов по надзору за безопасностью лекарств. medRxiv DOI: 10.1101 / 2020.05.19.20107227.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Colson, P., Rolain, J.-M., Lagier, J.-C., Brouqui, P., и Рауль, Д. (2020). Хлорохин и гидроксихлорохин как доступные средства борьбы с COVID-19. Внутр. J. Antimicrob. Агенты 55, 105932. doi: 10.1016 / j.ijantimicag.2020.105932.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Costedoat-Chalumeau, N., Amoura, Z., Duhaut, P., Huong, D. L. T., Sebbough, D., Wechsler, B., et al. (2003). Безопасность гидроксихлорохина у беременных с заболеваниями соединительной ткани: исследование ста тридцати трех случаев по сравнению с контрольной группой. Arthritis Rheum. 48, 3207–3211. DOI: 10.1002 / art.11304.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Costedoat-Chalumeau, N., Hulot, J.-S., Amoura, Z., Delcourt, A., Maisonobe, T., Dorent, R., et al. (2007). Кардиомиопатия, связанная с противомалярийной терапией, с наглядным описанием случая. Кардиология 107, 73–80. DOI: 10,1159 / 000094079.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cynober, L., Aussel, C., Vaubourdolle, M., Агнерай Дж. И Экинджян О. Г. (1987). Модуляция действия инсулина на захват 2-дезоксиглюкозы хлорохином в фибробластах куриного эмбриона. Диабет 36, 27–32. DOI: 10.2337 / diab.36.1.27.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Duska, F., Waldauf, P., Halacova, M., Zvonicek, V., Bala, J., Balik, M., et al. ; Чешская сеть клинических испытаний и аудита анестезии (2020). Азитромицин добавлен к гидроксихлорохину для пациентов, поступивших в реанимацию из-за коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) — протокол рандомизированного контролируемого исследования AZIQUINE-ICU. Испытания 21, 631.

Google Scholar

Эриксон Т. Б., Чай П. Р. и Бойер Э. У. (2020). Хлорохин, гидроксихлорохин и COVID-19. Toxicology Communications 4, 40–42. DOI: 10.1080 / 24734306.2020.1757967.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Estes, M. L., Ewing-Wilson, D., Chou, S. M., Mitsumoto, H., Hanson, M., Shirey, E., et al. (1987). Нейромиотоксичность хлорохина. Клинико-патологическая перспектива. Am. J. Med. 82, 447–455. DOI: 10.1016 / 0002-9343 (87)

-х.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fantini, J., Di Scala, C., Chahinian, H., and Yahi, N. (2020). Исследования структурного и молекулярного моделирования показывают новый механизм действия хлорохина и гидроксихлорохина против инфекции SARS-CoV-2. Внутр. J. Antimicrob. Агенты , 55, 105960. doi: 10.1016 / j.ijantimicag.2020.105960.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фини, Э., Уоллес, Д., Коттер, А., Тинаго, В., Маккарти, К., Кин, Д. и др. (2020). Исследование COVIRL-001: многоцентровое проспективное рандомизированное исследование, сравнивающее только стандарт помощи (SOC), монотерапию SOC плюс гидроксихлорохин или комбинацию гидроксихлорохина и азитромицина в лечении некритических SARS-CoV-2 PCR- положительная популяция, не требующая немедленной реанимации или вентиляции, но у которой есть доказательства клинического снижения: структурированное резюме протокола исследования для рандомизированного контролируемого исследования. Испытания 21, 430. doi: 10.1186 / s13063-020-04407-x.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fenollar, F., Celard, M., Lagier, J. C., Lepidi, H., Fournier, P.E., and Raoult, D. (2013). Эндокардит, вызванный Tropheryma whipplei. Emerg. Заразить. Дис. 19, 1721–1730. DOI: 10.3201 / eid1911.121356.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Funnell, S. G. P., Dowling, W. E., Munoz-Fontela, C., Gsell, P. S., Ingber, D. E., Hamilton, G.A., et al. (2020). Новые доклинические данные не поддерживают широкое использование гидроксихлорохина у пациентов с COVID-19. Нат. Commun. 11, 4253. DOI: 10.1038 / s41467-020-17907-w.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гао, Дж., Тянь, З., и Ян, X. (2020). Прорыв: в клинических исследованиях хлорохинфосфат продемонстрировал очевидную эффективность в лечении пневмонии, связанной с COVID-19. Biosci. Тенденции 14, 72–73. DOI: 10.5582 / bst.2020.01047.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарсия-Кремадес, М., Соланс, Б. П., Хьюз, Э., Эрнест, Дж. П., Валлендер, Э., Авика, Ф. и др. (2020). Оптимизация дозирования гидроксихлорохина для пациентов с COVID-19: подход интегративного моделирования для эффективного перепрофилирования лекарств. Clin. Pharmacol. Ther. 108, 253–263. DOI: 10.1002 / cpt.1856.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gautret, P., Lagier, J.-C., Parola, P., Hoang, V. T., Meddeb, L., Mailhe, M., et al. (2020a). Гидроксихлорохин и азитромицин для лечения COVID-19: результаты открытого нерандомизированного клинического исследования. Внутр. J. Antimicrob. Агенты 56, 105949. doi: 10.1016 / j.ijantimicag.2020.105949.

PubMed Аннотация | CrossRef Full Text | Google Scholar

Gautret, P., Lagier, J.-C., Parola, P., Hoang, V.T., Meddeb, L., Sevestre, J., et al. (2020b). Клинический и микробиологический эффект комбинации гидроксихлорохина и азитромицина у 80 пациентов с COVID-19 с периодом наблюдения не менее шести дней: пилотное обсервационное исследование. Trav. Med. Заразить. Дис. 34, 101663. DOI: 10.1016 / j.tmaid.2020.101663.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гей, Б., Бернар, Э., Солинья, М., Шазаль, Н., Дево, К., и Бриант, Л. (2012). pH-зависимое проникновение вируса чикунгунья в клетки Aedes albopictus . Заражение. Genet. Evol. 12, 1275–1281. DOI: 10.1016 / j.meegid.2012.02.003.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Geleris, J., Sun, Y., Platt, J., Zucker, J., Baldwin, M., Hripcsak, G., et al. (2020). Обсервационное исследование гидроксихлорохина у госпитализированных пациентов с covid-19. N. Engl. J. Med. 382, ​​2411–2418. DOI: 10,1056 / nejmoa2012410.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gevers, S., Kwa, M. S. G., Wijnans, E., and Van Nieuwkoop, C. (2020). Соображения по безопасности хлорохина и гидроксихлорохина при лечении COVID-19. Clin. Microbiol. Заразить. 26, 1276–1277.DOI: 10.1016 / j.cmi.2020.05.006.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Goldman, F. D., Gilman, A. L., Hollenback, C., Kato, R. M., Premack, B. A., and Rawlings, D. J. (2000). Гидроксихлорохин подавляет сигналы кальция в Т-клетках: новый механизм, объясняющий его иммуномодулирующие свойства. Кровь 95, 3460–3466. DOI: 10.1182 / blood.v95.11.3460.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gopel, S., Bethge, W., Martus, P., Kreth, F., Iftner, T., Joos, S., и другие. (2020). Тестируйте и лечите COVID 65 плюс — гидроксихлорохин по сравнению с плацебо в ранней амбулаторной диагностике и лечении пожилых пациентов с COVID19: структурированное резюме протокола исследования для рандомизированного контролируемого исследования. Испытания 21, 635. doi: 10.1186 / s13063-020-04556-z.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Guan, W.-J., Ni, Z.-Y., Hu, Y., Liang, W.-H., Ou, C.-Q., He, J.-X., et. al. (2020). Характеристика коронавирусной болезни 2019 в Китае. N. Engl. J. Med. 382, ​​1708–1720. DOI: 10.1056 / nejmoa2002032.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hartmann, M., Meek, I. L., Van Houwelingen, G.K., Lambregts, H.P.C.M., Toes, G.J., Van Der Wal, A.C. и др. (2011). Острая левожелудочковая недостаточность у пациента с кардиомиопатией, вызванной гидроксихлорохином. Neth. Сердце J. 19, 482–485. DOI: 10.1007 / s12471-011-0185-2.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хашем, А.М., Альгамди, Б.С., Альгаиси, А.А., Альшехри, Ф.С., Бухари, А., Альфале, М.А., и др. (2020). Терапевтическое использование хлорохина и гидроксихлорохина при COVID-19 и других вирусных инфекциях: обзорный обзор. Trav. Med. Заразить. Дис. 35, 101735. DOI: 10.1016 / j.tmaid.2020.101735.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Horby, P., Mafham, M., Linsell, L., L Bell, J., Staplin, N., Emberson, J. R., et al. (2020). Эффект гидроксихлорохина у госпитализированных пациентов с COVID-19: предварительные результаты многоцентрового рандомизированного контролируемого исследования. medRxiv DOI: 10.1101 / 2020.07.15.20151852.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Huang, C., Wang, Y., Li, X., Ren, L., Zhao, J., Hu, Y., et al. (2020). Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. Ланцет 395, 497–506. DOI: 10,1016 / s0140-6736 (20) 30183-5.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jeong, J.-Y., Choi, J. W., Jeon, K.-I., and Jue, D.-M. (2002). Хлорохин снижает экспрессию рецепторов фактора некроза опухоли на поверхности клеток гистиоцитарных клеток U-937 человека. Иммунология 105, 83–91. DOI: 10.1046 / j.0019-2805.2001.01339.x.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jeong, J. Y., and Jue, D. M. (1997). Хлорохин подавляет процессинг фактора некроза опухоли в макрофагах RAW 264.7, стимулированных липополисахаридами. J. Immunol. 158, 4901–4907.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Джордан П., Брукс Дж. Г., Николич Г. и Ле Кутер Д. Г. (1999). Передозировка гидроксихлорохина: токсикокинетика и лечение. J. Toxicol. Clin. Toxicol. 37, 861–864. DOI: 10,1081 / clt-100102466.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джойс, Э., Фабр, А., и Махон, Н. (2013). Кардиотоксичность гидроксихлорохина, проявляющаяся как быстро развивающаяся бивентрикулярная кардиомиопатия: ключевые диагностические особенности и обзор литературы. Eur. Heart J. Acute Cardiovascular Care 2, 77–83. DOI: 10,1177 / 2048872612471215.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кейартс, Э., Виджген, Л., Маес, П., Нейтс, Дж., И Ранст, М. В. (2004). In vitro Ингибирование коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома хлорохином. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 323, 264–268. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2004.08.085.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Квик, Дж. Дж., Хейстед, Т. А. Дж., И Рудольф, Дж. (2004). Кинетический механизм хинон оксидоредуктазы 2 и его ингибирование антималярийными хинолинами †. Биохимия 43, 4538–4547.DOI: 10.1021 / bi035923w.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kwon, J.-B., Kleiner, A., Ishida, K., Godown, J., Ciafaloni, E., and Looney, R.J. (2010). Миопатия, вызванная гидроксихлорохином. J. Clin. Ревматол. 16, 28–31. DOI: 10.1097 / rhu.0b013e3181c47ec8.

PubMed Аннотация | CrossRef Full Text | Google Scholar

Круиссельбринк, Р. Дж., И Заки Ахмед, С. (2010). Острая передозировка гидроксихлорохином: описание случая, обзор литературы и рекомендации по ведению. Am. J. Respir. Крит. Care Med. 181, А6080. DOI: 10.1164 / ajrccm-конференция.2010.181.1_meetingabstracts.a6080.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кибурц, Д., Брентано, Ф., и Гей, С. (2006). Механизм действия гидроксихлорохина при РА — свидетельство ингибирующего действия на передачу сигналов толл-подобных рецепторов. Нат. Rev. Rheumatol. 2, 458–459. DOI: 10,1038 / ncprheum0292.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Löffler, B.-M., Bohn, E., Гессе, Б., и Кунце, Х. (1985). Влияние противомалярийных препаратов на активность фосфолипазы А и лизофосфолипазы в плазматической мембране, митохондриальных, микросомальных и цитозольных субклеточных фракциях печени крыс. Biochim. Биофиз. Acta Lipids Lipid. Метабол. 835, 448–455. DOI: 10.1016 / 0005-2760 (85)

-6.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lagier, J.-C., Fenollar, F., Lepidi, H., Giorgi, R., Million, M., and Raoult, D. (2014). Лечение классической болезни Уиппла: от результатов in vitro до результатов до клинического исхода. J. Antimicrob. Chemother. 69, 219–227. DOI: 10.1093 / jac / dkt310.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Le Couteur, A., Ung, C., Young, L.H., Melles, R.B. и Choi, H.K. (2018). Гидроксихлорохиновая ретинопатия — результаты научных исследований в области ревматологии. Нат. Rev. Rheumatol. 14, 693–703. DOI: 10.1038 / s41584-018-0111-8.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lee, S.-J., Silverman, E.и Баргман Дж. М. (2011). Роль противомалярийных средств в лечении СКВ и волчаночного нефрита. Нат. Преподобный Нефрол. 7, 718–729. DOI: 10.1038 / nrneph.2011.150.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Li, T., Fan, Y., Chen, M., Wu, X., Zhang, L., He, T., et al. (2020). Сердечно-сосудистые последствия летальных исходов пациентов с коронавирусной болезнью 2019 (COVID-19). JAMA Cardiol. 5, 811–818. DOI: 10.

Google Scholar

Littlejohn, E.(2020). Использование гидроксихлорохина у пациента с COVID-19. Клив. Clin. J. Med. [Epub перед печатью] doi: 10.3949 / ccjm.87a.ccc011.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Liu, J., Cao, R., Xu, M., Wang, X., Zhang, H., Hu, H., et al. (2020). Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно подавляет инфекцию SARS-CoV-2 in vitro . Cell Discov 6, 16. DOI: 10.1038 / s41421-020-0156-0.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лу, Р., Zhao, X., Li, J., Niu, P., Yang, B., Wu, H., et al. (2020). Геномная характеристика и эпидемиология нового коронавируса 2019 года: значение для происхождения вируса и связывания с рецептором. Ланцет 395, 565–574. DOI: 10,1016 / s0140-6736 (20) 30251-8.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lyngbakken, M. N., Berdal, J. E., Eskesen, A., Kvale, D., Olsen, I.C., Rangberg, A., et al. (2020). Норвежское коронавирусное заболевание 2019 (NO COVID-19) Прагматическое открытое исследование для оценки раннего использования гидроксихлорохинсульфата у госпитализированных пациентов средней тяжести с коронавирусной болезнью 2019: структурированное резюме протокола исследования для рандомизированного контролируемого исследования. Испытания 21, 485. DOI: 10.1186 / s13063-020-04420-0.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Манку, М. С., и Хорробин, Д. Ф. (1976). Хлорохин, хинин, новокаин, хинидин, трициклические антидепрессанты и метилксантины в качестве агонистов и антагонистов простагландинов. Ланцет 308, 1115–1117. DOI: 10.1016 / s0140-6736 (76)

-4.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Манохар, С., Трипати, М., и Рават, Д. (2014).Молекулярные гибриды на основе 4-аминохинолина как противомалярийные средства: обзор. Curr. Верхний. Med. Chem. 14, 1706–1733. DOI: 10,2174 / 1568026614666140808125728.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маркус Хоффманн, К. М., Хофманн-Винклер, Х., Каул, А., Кляйне-Вебер, Х., Крюгер, Н., Гассен, Н. К. и др. (2020). Хлорохин не подавляет инфицирование клеток легких человека SARS-CoV-2. Nature 585, 7826. doi: 10.1038 / s41586-020-2575-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Marquardt, K.и Альбертсон Т.Э. (2001). Лечение передозировки гидроксихлорохином. Am. J. Emerg. Med. 19, 420–424. DOI: 10.1053 / ajem.2001.25774.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Million, M., Lagier, J.-C., Gautret, P., Colson, P., Fournier, P.-E., Amrane, S., et al. (2020). Раннее лечение пациентов с COVID-19 гидроксихлорохином и азитромицином: ретроспективный анализ 1061 случая в Марселе, Франция. Trav. Med. Заразить. Дис. 35, 101738. DOI: 10.1016 / j.tmaid.2020.101738.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Molina, J. M., Delaugerre, C., Le Goff, J., Mela-Lima, B., Ponscarme, D., Goldwirt, L., et al. (2020). Нет доказательств быстрого противовирусного клиренса или клинической пользы от комбинации гидроксихлорохина и азитромицина у пациентов с тяжелой инфекцией COVID-19. Med. Болезни заражают. 50, 384. DOI: 10.1016 / j.medmal.2020.03.006.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мутукришнан, П., Рукоз, Х., Графтон, Г., Джессурун, Дж., И Колвин-Адамс, М. (2011). Кардиомиопатия, вызванная гидроксихлорохином. Circ Heart Fail 4, e7 – e8. DOI: 10.1161 / circheartfailure.110.959916.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пастик, К. А., Окафор, Э. С., Ван, Ф., Лофгрен, С. М., Скиппер, К. П., Никол, М. Р. и др. (2020). Обзор: гидроксихлорохин и хлорохин для лечения SARS-CoV-2 (COVID-19). Заражение открытого форума. Дис. 7, офаа130.DOI: 10,1093 / офид / офаа130.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rajasingham, R., Bangdiwala, A. S., Nicol, M. R., Skipper, C. P., Pastick, K. A., Margaret, L.A., et al. (2020). Гидроксихлорохин как предконтактная профилактика COVID-19 у медицинских работников: рандомизированное исследование. medRxiv DOI: 10.1101 / 2020.09.18.20197327.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Randolph, V. B., Winkler, G., and Stollar, V. (1990). Ацидотропные амины ингибируют протеолитический процессинг белка prM флавивируса. Вирусология 174, 450–458. DOI: 10.1016 / 0042-6822 (90) -д.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рауль, Д., Дранкур, М., и Вестрис, Г. (1990). Бактерицидный эффект доксициклина, связанный с лизосомотропными агентами, на Coxiella burnetii в клетках P388D1. Антимикробный. Агенты Chemother. 34, 1512–1514. DOI: 10.1128 / aac.34.8.1512.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Raoult, D., Houpikian, P., Dupont, H. T., Riss, J. M., Arditi-Djiane, J., and Brouqui, P. (1999). Лечение эндокардита Q-лихорадки. Arch. Междунар. Med. 159, 167–173. DOI: 10.1001 / archinte.159.2.167.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Recalcati, S. (2020). Кожные проявления при COVID ‐ 19: первая перспектива. J. Eur. Акад. Дерматол. Венереол. 34, e212 – e213. DOI: 10.1111 / jdv.16387.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ричард Де-Хир, Т.Д. (2018). Случай гипогликемии, вызванной гидроксихлорохином, у пациента, не страдающего диабетом. J. Rheum. Дис. и Treat 4, 66. doi: 10.23937 / 2469-5726 / 1510066.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rolain, J.-M., Colson, P., and Raoult, D. (2007). Переработка хлорохина и его гидроксильного аналога для борьбы с бактериальными, грибковыми и вирусными инфекциями в 21 веке. Внутр. J. Antimicrob. Агенты 30, 297–308. DOI: 10.1016 / j.ijantimicag.2007.05.015.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Розенберг, Э.S., Dufort, E.M., Udo, T., Wilberschied, L.A., Kumar, J., Tesoriero, J., et al. (2020). Связь лечения гидроксихлорохином или азитромицином с внутрибольничной смертностью у пациентов с COVID-19 в штате Нью-Йорк. JAMA 323, 2493–2502. DOI: 10.1001 / jama.2020.8630.

Google Scholar

Салата, К., Калистри, А., Паролин, К., и Палу, Г. (2019). Коронавирусы: парадигма новых возникающих зоонозных болезней. Pathog. Дис. 77, ftaa006. DOI: 10.1093 / femspd / ftaa006.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sanofi-Aventis (2019). PLAQUENIL® (таблетки сульфата гидроксихлорохина USP). Квебек (Канада): Sanofi-Aventis Canada Inc.

Google Scholar

Savarino, A., Boelaert, J. R., Cassone, A., Majori, G., and Cauda, ​​R. (2003). Влияние хлорохина на вирусные инфекции: старый препарат против современных болезней. Lancet Infect. Дис. 3, 722–727. DOI: 10.1016 / s1473-3099 (03) 00806-5.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Саварино, А., Люсия, М. Б., Растрелли, Э., Рутелла, С., Голотта, К., Морра, Э. и др. (2004). Анти-ВИЧ эффекты хлорохина. J. Acquir. Иммунодефицит. Syndr. 35, 223–232. DOI: 10.1097 / 00126334-200403010-00002.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schrezenmeier, E., and Dörner, T. (2020). Механизмы действия гидроксихлорохина и хлорохина: значение для ревматологии. Нат. Rev. Rheumatol. 16, 155–166. DOI: 10.1038 / s41584-020-0372-х.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Seitz, M., Valbracht, J., Quach, J., and Lotz, M. (2003). Тиомалат натрия и хлорохин подавляют продукцию цитокинов в моноцитарных клетках THP-1 посредством различных транскрипционных и посттрансляционных механизмов. J. Clin. Иммунол. 23, 477–484. DOI: 10.1023 / B: joci.0000010424.41475.17.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sheikhbahaie, F., Amini, M., Gharipour, M., Аминоройя, А., Тахери, Н. (2016). Влияние гидроксихлорохина на контроль глюкозы и инсулинорезистентность при преддиабетическом состоянии. Adv. Биомед. Res. 5, 145. DOI: 10.4103 / 2277-9175.187401.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Shi, S., Qin, M., Shen, B., Cai, Y., Liu, T., Yang, F., et al. (2020). Связь сердечной травмы со смертностью госпитализированных пациентов с COVID-19 в Ухане, Китай. JAMA Cardiol 5, 802–810.DOI: 10.1001 / jamacardio.2020.0950.

Google Scholar

Спербер К., Хом К., Чао К. П., Шапиро Д. и Эш Дж. (2009). Систематический обзор применения гидроксихлорохина у беременных с аутоиммунными заболеваниями. Pediatr Rheumatol Online J 7, 9. DOI: 10.1186 / 1546-0096-7-9.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Спербер, К., Кураиши, Х., Калб, Т., Панджа, А., Стечер, В., и Майер, Л. (1993). Селективная регуляция секреции цитокинов гидроксихлорохином: ингибирование интерлейкина 1 альфа (ИЛ-1-альфа) и ИЛ-6 в человеческих моноцитах и ​​Т-клетках. J. Rheumatol. 20, 803–808.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Стейн, М., Белл, М. Дж., И Энг, Л. С. (2000). Нейромиотоксичность гидроксихлорохина. J. Rheumatol. 27, 2927–2931.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Su, S., Wong, G., Shi, W., Liu, J., Lai, A.C.K, Zhou, J., et al. (2016). Эпидемиология, генетическая рекомбинация и патогенез коронавирусов. Trends Microbiol. 24, 490–502. DOI: 10.1016 / j.tim.2016.03.003.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tang, W., Cao, Z., Han, M., Wang, Z., Chen, J., Sun, W., et al. (2020). Гидроксихлорохин у пациентов с коронавирусной болезнью в основном легкой и средней степени тяжести 2019: открытое рандомизированное контролируемое исследование. BMJ 369, m 1849. DOI: 10.1136 / bmj.m1849.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Винсент, М. Дж., Бержерон, Э., Бенджаннет, С., Эриксон, Б. Р., Роллин, П. Э., Ксиазек, Т.G., et al. (2005). Хлорохин является мощным ингибитором коронавирусной инфекции SARS и ее распространения. Virol. J. 2, 1–10. DOI: 10.1186 / 1743-422x-2-69.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Винчигерра К., Сикурелли Ф., Фиораванти А., Маландрини А., Баттисти К. и Федерико А. (2015). Нейромиотоксичность гидроксихлорохина: случай с быстрым течением и полным выздоровлением. Neurol. Sci. 36, 2293–2294. DOI: 10.1007 / s10072-015-2355-2.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уоллес, Д.Дж., Гудсуркар, В. С., Вейсман, М. Х., и Венутурупалли, С. Р. (2012). Новое понимание механизмов терапевтического действия противомалярийных средств при СКВ. Нат. Rev. Rheumatol. 8, 522–533. DOI: 10.1038 / nrrheum.2012.106.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wang, M., Cao, R., Zhang, L., Yang, X., Liu, J., Xu, M., et al. (2020). Ремдесивир и хлорохин эффективно подавляют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro . Cell Res. 30, 269–271. DOI: 10.1038 / s41422-020-0282-0.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wehbe, Z., Hammoud, S., Soudani, N., Zaraket, H., El-Yazbi, A., and Eid, A.H. (2020). Молекулярное понимание взаимодействия SARS COV-2 с сердечно-сосудистыми заболеваниями: роль передачи сигналов RAAS и MAPK. Перед. Pharmacol. 11, 836. DOI: 10.3389 / fphar.2020.00836.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вулф, Ф., и Мармор, М. Ф. (2010). Частота и предикторы токсичности гидроксихлорохина для сетчатки у пациентов с ревматоидным артритом и системной красной волчанкой. Arthritis Care Res. 62, 775–784. DOI: 10.1002 / acr.20133.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yao, X., Ye, F., Zhang, M., Cui, C., Huang, B., Niu, P., et al. (2020). In vitro противовирусная активность и разработка оптимизированной схемы дозирования гидроксихлорохина для лечения тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-CoV-2). Clin. Заразить. Dis 71, 732–739. DOI: 10,1093 / cid / ciaa237.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhao, H., Wald, J., Palmer, M., and Han, Y. (2018). Вызванная гидроксихлорохином кардиомиопатия и сердечная недостаточность у близнецов. J. Thorac. Дис. 10, E70 – E73. DOI: 10.21037 / jtd.2017.12.66.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhou, D., Dai, S. M., and Tong, Q. (2020a). COVID-19: рекомендация изучить влияние гидроксихлорохина на предотвращение инфекции и прогрессирования. J. Antimicrob. Chemother. 75, 1667–1670. DOI: 10.1093 / jac / dkaa114.

Google Scholar

Zhou, P., Yang, X.-L., Wang, X.-G., Hu, B., Zhang, L., Zhang, W., et al. (2020b). Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Nature 579, 270–273. DOI: 10.1038 / s41586-020-2012-7.

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ziegler, H. K., and Unanue, E. R. (1982). Снижение катаболизма макрофагальных антигенов, вызванное аммиаком и хлорохином, связано с ингибированием презентации антигена Т-клеткам. Proc. Natl. Акад. Sci. Ед. изм. Штаты Am. 79, 175–178. DOI: 10.1073 / pnas.79.1.175.

CrossRef Полный текст | Google Scholar

2018 Textron Stampede 900 Плюсы и минусы

Мы решили изучить плюсы и минусы Textron Stampede 900 2018 года, чтобы выделить некоторые из вещей, которые нам нравятся и не нравятся в UTV.

Прыгнув в индустрию UTV обеими ногами, Textron поставил перед собой задачу показать сообществу внедорожников, из чего они сделаны. Приступая к работе со своим первым Utility UTV, Stampede, Textron уверенно продвигается к тому, чтобы быть по уши в этом сообществе.Textron Stampede 900 — это лишь одно из ее предложений, открывающее глаза любому потребителю, ищущему новых производителей. Stampede 900 может похвастаться 846-кубовой силовой установкой с заявленными 80 лошадиными силами, и, похоже, в этом есть немного бодрости.

Благодаря шасси, основанному на многих отраслевых компонентах, полезность Stampede неоспорима. Кровать будет вмещать приблизительно 600 фунтов, и этот бык будет буксировать заявленный груз в 2000 фунтов. Двигаться так же просто, как нажать на педаль газа, в то время как хорошее линейное увеличение мощности неизбежно.Чтобы получить представление о том, что мы думаем об этом Utility UTV, прочтите наши плюсы и минусы Textron Stampede 900 2018 года.

Pros

Объем двигателя — Построить Side-by-Side, который утверждает, что он трудолюбивый, в теории просто, но Textron вложил свои деньги туда, где его уста добавили 846-кубовую мельницу с впрыском топлива к Stampede. Этот силовой агрегат выдает 80 лошадиных сил с включенными раструбами, а также очень приятный на ощупь. После хорошего рабочего дня топливный бак также останавливается, так как этот двигатель просто потягивает бак.

Рама / подвеска — Благодаря современной раме и геометрии шасси, Stampede легко управлять. Электронный усилитель руля позволяет водителю легко чувствовать себя, а с 11,25 дюймовым дорожным просветом дороги, заполненные неровным мусором, не создают особых проблем. Добавьте к этому ход колес в 9,3 и 10,4 дюйма, и вы найдете отличное сцепление с дорогой, а также успокаивающую подвеску, чтобы выдержать даже самые большие удары.

Эта дополнительная кабина — Эта особенность поначалу показалась странной, но после долгих размышлений кажется, что она имеет большой смысл.Дополнительное пространство покрыто крышей кабины, что позволяет легко сбрасывать предметы первой необходимости в доступном и безопасном месте. Пространство отделено от обычной кровати, чтобы ваше снаряжение оставалось на месте. Тот факт, что у вас есть отдельные двери, по одной с каждой стороны, для доступа к вашему снаряжению, также является плюсом.

Минусы

Странно выглядящая передняя часть кузова — Хотя к новому продукту всегда нужно немного привыкнуть, кажется, что дизайн переднего капота и носа просто плохо сочетается.Большой капот — это частично используемое пространство, но здесь нет точек крепления, и его можно использовать только с полкой для аксессуаров. Может случиться так, что пространство выпало для обзора передней части.

Без переключателя передач — Мы должны признать, что кабина удобна для большинства пользователей, однако, похоже, что переключатель с закрытым воротом может снизить риск переключения на любую другую передачу при движении по пересеченной местности. Даже если переключатель находится близко к рулевому колесу, небольшая перестановка рук может спровоцировать переключение передач без предупреждения.

She’s Heavy — Если учесть, что вам, возможно, придется тащить эту машину на работу или в следующую поездку, вам нужно будет убедиться, что она безопасна. Снаряженная масса 1690 фунтов означает, что он полон жидкости и готов к поездке, но это также означает, что вам нужно знать его вес на крутых склонах или спусках.

Pro-Con-Caveat Grid

Резюме

Студенты получают по электронной почте, в системе управления курсом или на веб-странице пустую электронную версию сетки с предупреждениями.Их инструкции состоят в том, чтобы перечислить аргументы в пользу определенного решения и против решения с оговорками, помещенными в третью колонку. Например, учителя экономики могут (1) попросить студентов изучить плюсы, минусы и недостатки строительства больницы в определенном районе своего города или (2) после прочтения тематического исследования пары, состоящей из двух профессий, попросить студентов перечислите плюсы (преимущества) их подачи совместной налоговой декларации и минусы (затраты), а также любые предостережения, которые они должны принять во внимание.Такие задания часто мотивируют большинство студентов, потому что они связаны с реальной проблемой, имеющей отношение к ним самим. В приведенном ниже примере студенты в качестве домашнего задания заполняют свои сетки, перечисляя аргументы, за и против, для изменения текущей фиксированной системы парковки в кампусе на систему, пропорциональную уровню заработной платы человека, покупающего разрешение. . В третьем столбце студенты перечисляют любые предостережения (другие соображения), которые могут повлиять на решение. Учителям полезно дать студентам рекомендации о том, сколько статей они ожидают и как они должны быть выражены (например,g, полные предложения, маркеры и т. д.).

Цели обучения

• Чтобы побудить учащихся задуматься над экономической проблемой перед тем, как пойти в класс
• Для обеспечения подготовки к классу
• Продвигать мышление более высокого порядка, когда учащиеся в небольших группах выносят суждения о наиболее убедительных аргументах за и против и предостережениях, которые следует учитывать («Оценка» по известной таксономии Блума), и готовить составную сетку с лучшими идеями из все студенты («Синтез» по систематике Блума).

Контекст использования

Это чрезвычайно разностороннее занятие, которое можно использовать для любого уровня курса, как в больших, так и в малых классах. Его также можно адаптировать для онлайн-использования. Преподаватели могут изменять подсказки / задания в зависимости от содержания своего собственного курса. При использовании, как описано, сетка Pro-Con-Caveat вложена в контекст модели глубокого обучения, обсуждаемой в другом месте. Студенты завершают чтение, относящееся к принятому решению, а затем применяют экономическую теорию к конкретной проблеме или проблеме (таким образом, они попадают в базу знаний через конкретную мотивирующую задачу).В классе ученики, которые создают составную сетку Pro-Con-Caveat, участвуют в активном обучении, взаимодействии между учениками и учениками, что позволяет глубже обрабатывать индивидуальную работу. Студенты приходят на занятия подготовленными.

Описание и учебные материалы

Студенты получают по электронной почте, в системе управления курсом или на веб-странице пустую электронную версию сетки с предупреждениями. Их инструкции состоят в том, чтобы перечислить аргументы в пользу определенного решения и против решения с оговорками, помещенными в третью колонку.Например, учителя экономики могут (1) попросить студентов изучить плюсы, минусы и недостатки строительства больницы в определенном районе своего города или (2) после прочтения тематического исследования пары, состоящей из двух профессий, попросить студентов перечислите плюсы (преимущества) их подачи совместной налоговой декларации и минусы (затраты), а также любые предостережения, которые они должны принять во внимание. Такие задания часто мотивируют большинство студентов, потому что они связаны с реальной проблемой, имеющей отношение к ним самим.
В приведенном ниже примере студенты в качестве домашнего задания заполняют свои сетки, перечисляя аргументы, за и против, для изменения текущей фиксированной системы парковки в кампусе на систему, пропорциональную уровню заработной платы человека, покупающего разрешение. .В третьем столбце студенты перечисляют любые предостережения (другие соображения), которые могут повлиять на решение. Учителям полезно давать учащимся рекомендации относительно того, сколько статей они ожидают и как они должны быть выражены (например, полные предложения, маркеры и т. Д.). Вот пример заполненной сетки Pro-Con-Caveat:

Pro-Con-Caveat Grid (Acrobat (PDF) 39 КБ, 19 июня 10)

Следует ли определять парковку на территории кампуса на основе уровня заработной платы?

Преподаватель может создать сетку из трех столбцов с заголовками «за», «против» и «предостережения».Ниже приведены примеры ответов, которые не отображаются в таблице.

Плюсы:

• Эта система была бы намного более справедливой, потому что помощник по административным вопросам и преподаватель, занимающийся парковкой в ​​одной и той же отведенной зоне, например в гаражах, не будут платить одинаковую сумму.
• Часто люди, которые несут самое тяжелое бремя, в конечном итоге припарковываются дальше всего. Это дало бы людям с более низкими классами заработной платы лучшую возможность позволить себе парковку поближе.
• Некоторые преподаватели и администраторы будут сопротивляться любым изменениям, которые могут увеличить их плату за парковку.

Минусы:

• Было бы очень сложно администрировать, потому что каждая выделенная парковка должна иметь разные уровни сборов.
• Плата за парковку является основным источником доходов университета, поэтому усилия по сокращению общих расходов могут негативно повлиять на бюджет.

Предостережения:

• Требуется технико-экономическое обоснование
• Университет должен иметь возможность запретить людям передавать свои парковочные талоны другим.

Учащиеся приносят в класс две копии своей полной таблицы с предупреждениями. Они сдают одну копию своей сетки Pro-Con-Caveat для зачетного балла (три балла за обозначения во всех трех столбцах), тем самым облегчая учителю оценку и присвоение баллов. Затем ученики работают в небольших группах (от трех до пяти учеников: четыре ученика в моих совместных классах), чтобы создать подробную сетку с лучшими идеями каждого ученика. Группы можно вызывать в случайном порядке, чтобы поделиться своим совместным творением на документ-камере.

Учебные заметки и советы

Оценка

Ссылки и ресурсы

Блум, Б.С. (1956). Таксономия образовательных целей (когнитивная область). Нью-Йорк: Лонгман.

Плюсы и минусы МРТ / МРЗ сверхвысокого поля для применения на людях — Исследовательская информация Университета Твенте

TY — JOUR

T1 — Плюсы и минусы МРТ / МРЗ сверхвысокого поля для применения на людях

AU — Ladd, Mark E.

AU — Bachert, Peter

AU — Meyerspeer, Martin

AU — Moser, Ewald

AU — Nagel, Armin M.

AU — Норрис, Дэвид Г.

AU — Schmitter, Sebastian

AU — Speck, Oliver

AU — Straub, Sina

AU — Zaiss, Moritz

PY — 2018/12/1

Y1 — 2018/12/1

N2 — Магнитно-резонансная томография и спектроскопические методы широко используются на людях как для клинической диагностики, так и в таких областях фундаментальных исследований, как когнитивная нейровизуализация. В последние годы стали доступны новые системы магнитно-резонансной томографии человека, работающие в статических магнитных полях 7 Тл или выше (частота протонов ≥300 МГц).Визуализация объектов размером с человека на таких высоких частотах представляет несколько проблем, включая неоднородные радиочастотные поля, артефакты повышенной восприимчивости и более высокое депонирование радиочастотной энергии в ткани. На другой стороне шкалы — усиление отношения сигнал / шум или контраст / шум, которые позволяют визуализировать более тонкие структуры и обнаруживать меньшие физиологические эффекты. В этом обзоре представлен обзор некоторых из последних методологических разработок в области МРТ / МРС сверхвысокого поля человека, а также связанных с ними клинических и научных приложений.Особое внимание уделяется методам, которые особенно выигрывают от изменения физических характеристик в сильных магнитных полях, включая методы визуализации с взвешиванием по восприимчивости и фазового контраста, визуализацию с X-ядрами, МР-спектроскопию, визуализацию CEST, а также функциональную МРТ. Кроме того, будут обсуждены более общие методологические разработки, такие как параллельная передача и коррекция движения, которые необходимы для использования всего потенциала более высоких магнитных полей, и будет представлен обзор соответствующих физиологических соображений воздействия сильного магнитного поля человека.

AB — Магнитно-резонансная томография и спектроскопические методы широко используются на людях как для клинической диагностики, так и в фундаментальных областях исследований, таких как когнитивная нейровизуализация. В последние годы стали доступны новые системы магнитно-резонансной томографии человека, работающие в статических магнитных полях 7 Тл или выше (частота протонов ≥300 МГц). Визуализация объектов размером с человека на таких высоких частотах представляет несколько проблем, включая неоднородные радиочастотные поля, артефакты повышенной восприимчивости и более высокое депонирование радиочастотной энергии в ткани.На другой стороне шкалы — усиление отношения сигнал / шум или контраст / шум, которые позволяют визуализировать более тонкие структуры и обнаруживать меньшие физиологические эффекты. В этом обзоре представлен обзор некоторых из последних методологических разработок в области МРТ / МРС сверхвысокого поля человека, а также связанных с ними клинических и научных приложений. Особое внимание уделяется методам, которые особенно выигрывают от изменения физических характеристик в сильных магнитных полях, включая методы визуализации с взвешиванием по восприимчивости и фазового контраста, визуализацию с X-ядрами, МР-спектроскопию, визуализацию CEST, а также функциональную МРТ.Кроме того, будут обсуждены более общие методологические разработки, такие как параллельная передача и коррекция движения, которые необходимы для использования всего потенциала более высоких магнитных полей, и будет представлен обзор соответствующих физиологических соображений воздействия сильного магнитного поля человека.

кВт — 7Tesla

кВт — Human

кВт — MRI

кВт — MRS

кВт — сверхвысокое поле

UR — http://www.scopus.com/inward/record.url?scp = 85049528855 & partnerID = 8YFLogxK

U2 — 10.