Сокпаблик зона: Вход в аккаунт

Вход в национальный парк Као Сок разрешен только вакцинированным посетителям.

Национальный парк Као Сок — это тропический лес с большим биоразнообразием растений и животных, это самый популярный национальный парк на материке в Южном Таиланде. Парк — один из немногих национальных парков в стране, до которого легко добраться на общественном транспорте.Ближайшие города — Сураттани, Краби, Ао Нанг (пляж Рейли), Пхукет, Као Лак и Самуи.

Основными достопримечательностями парка являются озеро Чео Лан, знаменитые известняковые холмы, водопады, дома на плотах над озером, тропы, пещеры и реки.

Као Сок был основан как 22-й национальный парк Таиланда в 1980 году Королевским лесным департаментом. Он занимает территорию площадью 739 км² в округах Амфое Пханом и Бан Тахун в провинции Сураттани и включает водохранилище Чео Лан, перекрытое плотиной Ратчапрафа.

Парк является частью лесного комплекса Кхлонг Саенг — Као Сок, который включает 12 охраняемых территорий площадью 5316 км², включая несколько прибрежных островов в Андаманском море. Горы в парке расположены вдоль хребта Пхукет, который простирается от острова Пхукет дальше на север до провинции Ранонг.

Сезон дождей длится с конца апреля до начала декабря, наибольшее количество осадков выпадает с мая по октябрь, а сухой сезон — с января по март.Средняя температура колеблется от 22 ° C до 36 ° C круглый год.

Дикая природа

В парке можно найти множество интересных видов млекопитающих Таиланда; слоны, гауры, олени самбар, солнечные медведи, азиатские черные медведи, малайские тапиры, крабоядные макаки, ​​гиббоны, индокитайские серу, мышиные олени, дикобразы, мраморные кошки, кабаны, азиатские дикие собаки.

В национальном парке Као Сок зарегистрировано около 400 видов птиц.Некоторые из редких видов птиц, зарегистрированных в парке: Куропатки с каштановыми ожерельями, болтуны с сажистыми головками, дрозды с каштановыми головками, мухоловки с рыжеватой грудью, черная сорока, трогон с корицей, малазийская хохлатая хохлатая куропатка, хохлатая куропатка, гигантская питта. Раньше птицы-носороги в шлемах были довольно обычным явлением в парке, но из-за браконьерства теперь это очень редкое явление. Приложив немного усилий, большой аргус можно увидеть в притоке Кхлонг Сенг озера Кхао Сок.

На данный момент в парке зарегистрировано более 90 видов рептилий, но, вероятно, их гораздо больше.Из редких видов рептилий относятся бирманские павлиньи мягкие панцири (Nilssonia formosa), загадочные листовые черепахи (Cyclemys enigmatica), коричневые волчьи змеи (Lycodon effraenis), малайские гладкие змеи (Liopeltis tricolor), бронзоспины Копштейна (Dendrelaphis kopsteini), найденные в парке. В парке водятся три вида гадюк; Гадюка ямчатая сабахская (Trimeresurus sabahi fucatus), гадюка ямчатая Ваглера (Tropidolaemus wagleri) и малайская гадюка ямчатая (Calloselasma rhodostoma).

Парк более известен символическим цветком провинции Сураттани, огромным цветком раффлезии (Rafflesia kerrii). Цветок может достигать 70-80 см в диаметре, распускаться только с октября по декабрь.

Чтобы увидеть длинный список видов, обитающих в парке, посетите раздел «Дикая природа» национального парка Као Сок.

В гостях

Перед тем, как попасть в парк, полезно знать, что есть два одинаково популярных района на расстоянии 67 км. Один из них — это территория вокруг штаб-квартиры, которую обычно называют Khao Sok или Khao Sok Village, где можно пройти несколько троп, посетить водопады и принять участие в различных мероприятиях на реке.Другая горячая точка — озеро Као Сок (также известное как озеро Чео Лан) к востоку от штаб-квартиры, наиболее известное своими домами на плотах, пещерами, смотровыми площадками, тропами, известняковыми холмами и т. Д.

Лучший способ получить представление о местонахождении достопримечательностей в парке — открыть интерактивную карту на этой странице. Карту можно увеличивать / уменьшать и панорамировать, на ней также отображаются другие соответствующие места по всей стране.

Как добраться до деревни Као Сок

Khao Sok Village легко добраться на общественном транспорте.Автобусы и минивэны из близлежащих городов останавливаются на главной развязке с улицей Khao Sok, в 1,8 км от входа в парк.

Многие отели в этом районе расположены между въездом и главной дорогой, другие расположены на боковых дорогах, которые могут находиться на расстоянии до 2-4 км. После высадки на главной дороге, если отель находится поблизости, до него можно добраться пешком, для дальних можно заказать такси на месте.

Ближайший аэропорт Сураттани находится примерно в 1,5 часах езды.Два других относительно близких аэропорта — это аэропорт Краби и аэропорт Пхукета. Варианты перелета до аэропорта Сураттани самые дешевые, так же как и на такси и на общественном транспорте.

Для получения дополнительной информации посетите раздел «Как добраться и остановитесь» на страницах нашего национального парка Као Сок.

Как добраться до озера Као Сок

Так же, как добраться до деревни Кхао Сок из близлежащих городов, на том же автобусе / минивэне можно добраться до деревни Бан Та Кхун на востоке. От Бан Та Хуна можно устроить сонгтеу до озера Као Сок прямо на перекрестке дороги к озеру.

К домикам на плотах и ​​аттракционам на озере можно добраться только на длиннохвостых лодках, отправляющихся от пирса озера Чео Лан (также известного как пирс Ратчапрафа).

. Для получения дополнительной информации посетите раздел «Как добраться и остаться» на страницах нашего национального парка Као Сок.

Добраться на такси

Чтобы не терять драгоценное время, лучше всего добраться до парка на частном такси. Поездка на такси из ближайшего аэропорта Сураттани будет стоить 1400 бат до озера Чео Лан или 1700 бат до деревни Као Сок.

Для получения дополнительной информации о такси в / из Сураттани, Пхукета, Краби, Ко Ланта или Као Лака посетите нашу страницу сведений о такси для Као Сок;

Гулять по парку

Большинство отелей в Khao Sok Village находятся на расстоянии от нескольких сотен метров до пары километров пешком от входа в парк, другие — немного дальше. При необходимости отели могут организовать транспорт для более коротких поездок, но цена, как правило, относительно высока. Если место вашего пребывания будет выбрано удачно, различные рестораны, пабы и информационный центр могут быть в удобной пешей доступности.

Единственный способ передвигаться по озеру — это организовать длиннохвостые лодки, но лодки можно использовать только для транспортировки к домам на плотах. Чтобы добраться до большинства достопримечательностей, требуется гид. Длиннохвостая лодка туда и обратно на 10 человек стоит от 1500 до 4000 бат, разница в цене зависит от расстояния. Также можно арендовать лодку для ночлега примерно за 400-500 бат больше. Эти лодки могут быть заказаны только по прибытии на причал и не могут быть забронированы заранее.

Входные билеты и часы работы

Стоимость входа составляет 300 бат для взрослых и 150 бат для детей.Граждане Таиланда платят 40 бат для взрослых и 20 бат для детей. Входные билеты действительны в течение нескольких дней, только если вы находитесь в парке, либо во время кемпинга, либо в домиках на плотах на озере.

Парк открыт с 6:00 до 18:00 ежедневно, круглый год. Вечером можно зайти в парк с гидом на ночное сафари.

Мероприятия

Чего нельзя делать, этика

Некоторые курорты Као Сок предлагают жалкие и жестокие туры со слонами в неволе.Если вы планируете принять участие в одном из них, поищите и прочтите о «раздавливании слонов» и посмотрите видеоролики на эту тему на YouTube. Пожалуйста, избегайте активности слонов или тигров в любой части страны. Имейте в виду, что все компании заявляют, что обращаются с животными гуманно, но это никогда не правда. Некоторые утверждают, что это «слоновье убежище», где больные или старые слоны все еще находят путь к «убежищу», торгуя, бумаги часто подделывают.

Пешие прогулки

Вокруг штаб-квартиры и озера проложено множество троп.Только несколько таких маршрутов вокруг штаб-квартиры можно пройти без гида. Все остальные маршруты в парке строго требуют сопровождения гида. Посетителям не рекомендуется самостоятельно проходить более длинные маршруты, нарушая правила национального парка. Есть значительный шанс заблудиться.

Местные гиды, не говорящие по-английски, могут быть организованы в туристическом центре, агентствах или отелях в деревне Као Сок. Хотя в низкий сезон можно войти и организовать гида, в высокий сезон гиды должны быть организованы как минимум за день.Гиды берут 600 бат за полдня или 1200 бат за поход на целый день. Ночной поход стоит 600 бат с 18:00 до 21:00.

Для пеших прогулок по озеру могут быть предоставлены гиды в сочетании с бронированием домов на плотах.

Водопады, пещеры, известняковые холмы и смотровые площадки

Доступные водопады можно найти только вдоль тропинок от штаб-квартиры в Као Сок и в нескольких местах не слишком далеко от главной дороги 401 к югу от парка. Впечатляющие обнажения известняка можно увидеть во многих местах национального парка; в деревне Као Сок, вдоль главной дороги и на озере.Большинство впечатляющих пещер расположено вокруг озера Као Сок, куда можно добраться на длиннохвостых лодках.

Водные развлечения

Если не слишком сильное течение, можно искупаться в нескольких прудах вдоль реки Сок, либо по главной тропе к западу от штаб-квартиры, либо в деревне Као Сок. Если в реке достаточно воды, можно заняться греблей на каноэ или тюбингом. По прибытии в отеле можно организовать катание на тюбингах или каноэ. Озеро Као Сок — более идеальное место для гребли на каноэ и купания.

Наблюдение за дикой природой

Некоторые туристические компании и веб-сайты рекламируют Као Сок как популярное место, где можно увидеть тигров. В Као Сок водятся тигры, возможно, еще меньшая популяция существует глубоко в труднодоступных местах, но никто не видел ни одного в парке в течение десятилетий.

В парке обитают одни из самых интересных видов млекопитающих Таиланда, но их очень редко можно увидеть в популярных туристических районах. На некоторых тропах озера Као Сок шансы увидеть млекопитающих больше.Есть несколько троп, где иногда можно увидеть слонов и гауров.

В районе штаб-квартиры обычны длиннохвостые макаки и полосатые лангуры. Иногда на тропах могут появляться кабаны или олени. Волшебные крики гиббонов можно услышать утром из отелей возле национального парка.

Весь парк — отличное место для поиска рептилий и земноводных. Многие из замечательных видов тайских ящериц, змей и земноводных водятся вдоль тропинок к водопадам.Лучшее время для поиска рептилий и земноводных — вечером.

Экскурсии

Различные туристические компании предлагают туры продолжительностью до 3-4 дней, включая походы в джунгли по альтернативным тропам по всему национальному парку. Некоторые из этих маршрутов проходят вокруг озера Чео Лан, куда можно добраться на длиннохвостых лодках, и они ведут к различным пещерам и смотровым площадкам. В турпакеты также могут входить туры в другие охраняемые территории национального парка Као Сок.

Обычно дома на плотах бронируются вместе с экскурсией по озеру Као Сок, либо с частным гидом, либо в составе группы. В то время как частный тур может быть гибким, групповые туры следуют строгому маршруту.

Ниже приведены несколько туристических пакетов, которые включают проживание на озере Као Сок;

Групповой тур

Частные туры

Остаться и поесть

В деревне Као Сок есть много отелей, некоторые в нескольких минутах ходьбы от входа, другие немного далеко. Для посетителей, которые предпочитают кемпинги, есть кемпинг прямо рядом с визит-центром. Дополнительную информацию о кемпинге можно найти в разделе «Достопримечательности» ниже.

Дома на плотах — одна из главных достопримечательностей парка с прекрасным видом на озеро Као Сок. Здесь много пещер, смотровых площадок и троп, до всех которых можно добраться на лодках, идущих от домов на плотах. Недалеко от плотины Ратчапрафа также есть немало отелей.

Съесть

В деревне Као Сок есть множество ресторанов. Внутри национального парка нет ресторанов, но есть много ресторанов в нескольких минутах ходьбы, всего в нескольких сотнях метров от входа. В отелях, расположенных слишком далеко от центра деревни, как правило, есть собственный ресторан.

Дома на плотах на озере Као Сок имеют собственные рестораны.

Телефон (а)

Рекомендуется попросить человека, говорящего на тайском языке, позвонить от вашего имени.

• 077 395 154
• 077 395 155
• 077 395 139

Достопримечательности Као Сок

Озеро Као Сок, также называемое озером Чео Лан или водохранилищем Ратчапрафа, является лучшей частью национального парка, где расположены более интересные достопримечательности и где возможности для наблюдения за дикой природой намного лучше.

По всему озеру разбросано множество домов на плотах / плавучих бунгало, откуда можно посетить пещеры, смотровые площадки, известняковые холмы и добраться до некоторых интересных троп. Обязательно покатайтесь на каяках среди известняковых холмов в утреннем тумане.

Озеро содержит более 100 обнажений известняка и имеет шесть областей притоков. Притоки есть; Клонг Лонг, Клонг Ка, Клонг Пей, Клонг Йи, Клонг Сенг и Кхлонг Мон, где Клонг на тайском языке означает река.Части озера принадлежат заповеднику Клонг Сенг.

Поездка туда и обратно на длиннохвостой лодке на 10 человек к различным местам озера стоит от 1500 до 4000 бат.

Клонг Лонг — самый популярный приток озера, расположенный на северо-восточной стороне озера, примерно в 15-16 км от пирса озера Чео Лан. Основными достопримечательностями этого притока являются известняковые холмы, пещера и красивая смотровая площадка, до которой можно добраться за 2,5-часовую прогулку по джунглям.

В Кхлонг Лонг есть пять домов на плотах;

• Chiew Lan Raft House
• Дом на плоту Плерн Прай
• Дом на плоту Сай Чон
• Дом на плоту Panvaree
• Прай Ван

Дома на плотах в Кхлонг Лонг по качеству намного лучше, чем другие дома на озере.

Кхлонг Ка расположен на южной стороне озера, примерно в 15 км от пирса озера Чео Лан. У этого притока есть одна из лучших пещер в парке и прекрасный вид на группу известняковых холмов.Между известняковыми холмами на юге есть отличные тропы. Хотя такие случаи встречаются редко, в этом районе есть сообщения о тапирах.

Клонг Ка и Нанг Прай — два рафтаха в этой части озера.

Расположен на юго-западном берегу озера, примерно в 20 км от пирса озера Чео Лан. Тон Той Рафхаус в этом притоке был первой станцией рейнджеров на озере. В нескольких километрах к западу от этого рафтхауса есть тропа, ведущая к пещере Нам Талу. Тропа имеет длину 4 км и частично круговая.Еще одна тропа длиной 6,5 км на юг ведет к главной дороге 401 южнее.

Отель Khlong Yee расположен на западной стороне озера, примерно в 27 км от плотины Ратчапрафа. Основными видами деятельности являются туры на байдарках с гидом, наблюдение за дикой природой, походы на смотровую площадку Край Сон и походы к водопаду в сезон дождей.

Плотных домов, расположенных в этом районе, есть;

• Krai Son Raft House
• Плавучие бунгало с верхушками деревьев
• Keeree Warin Raft House
• 500 Рай

Этот приток расположен на северо-западной стороне озера в заповеднике дикой природы Клонг Саенг, примерно в 26 км от плотины Ратчапрафа.Река Клонг Саенг — крупнейший водораздел, питающий озеро, это была самая широкая река в Таиланде до того, как была построена плотина.

Посетители, входящие в эту зону, должны получить специальное разрешение от штаб-квартиры национального парка Као Сок и внести дополнительную плату за вход в заповедник.

Эта удаленная часть озера идеально подходит для пеших прогулок и является лучшим местом для наблюдения за дикой природой. Можно отправиться в заповедник дикой природы с смотрителями парка к водопаду, старым шахтам 60-х годов и увидеть некоторых обычных животных, таких как гиббоны и олени.Если повезет, можно увидеть еще более захватывающие виды, такие как слон, гаур, континентальный сероу, большой аргус и многие другие. В заповеднике также обитают тапиры, дымчатые леопарды и медведи.

Единственный дом на плоту в этой области притока — это Клонг Сенг Плот Хаус, принадлежащий национальному парку, качество бунгало оставляет желать лучшего.

Отель Khlong Mon расположен на северной стороне озера, примерно в 24 км от пирса озера Чео Лан. Район состоит из высоких холмов и крутых долин и является идеальным местом для наблюдения за птицами-носорогами, орлами и другими животными.Захватывающая тропа длиной почти 3 км через джунгли приведет к притоку Клонг Саенг дальше на запад. На северной стороне притока есть несколько других более коротких троп.

Там Гиа — единственный дом на плоту в этом притоке, принадлежащий национальному парку.

Визит-центр национального парка находится рядом со штаб-квартирой. Рядом с центром для посетителей есть кемпинг, основной туалет / душ, небольшая столовая / кафе, несколько бунгало и другие помещения.

Есть две тропы, начинающиеся от центра для посетителей. Одна тропа — это тропа к водопаду Сип-эт Чан на севере, частично круговая, а другая — к другим водопадам на западе.

Кемпинг среднего размера, так как поблизости много отелей и мало кемперов. Можно арендовать палатки от 250 бат для 2 человек или 300 бат для 4 человек. Стоимость аксессуаров на человека; подушка 10 бат, одеяло 10 бат, спальный мешок 30 бат, простыня 20 бат.Палатки и аксессуары можно заказать в центре для посетителей по прибытии.

Эта 7-километровая тропа вдоль реки Сок является главной тропой национального парка.

Первые 2,9 км тропы до контрольно-пропускного пункта, охраняемого рейнджерами, для прогулки не требуется никаких проводников. Это больше похоже на узкую грунтовую дорогу. На этом первом участке тропы есть два небольших водопада, место для купания и множество небольших боковых троп, спускающихся к реке.

Потребуется гид, чтобы пройти последние 4 км этой тропы за станцией рейнджеров.Это настоящая тропа в джунглях, проходящая мимо нескольких водопадов, одного места для купания, ущелья и заканчивающаяся у водопада Тон Клои.

Водопад высотой 20 метров примерно в 2,8 км от туристического центра на тропе водопада Тон Клой. Он расположен на другой стороне реки Клонг Сок от тропы, но до него легко добраться, ступив на скалы, чтобы перейти на другую сторону.

Для купания, в 3 км от туристического центра на тропе водопада Тон Клой.

Популярный для занятий рафтингом водопад с быстрой водой находится в 3 км от туристического центра на тропе водопада Тон-Клой.

Небольшой водопад, к которому можно пройти пешком вдоль реки, через бамбук и гигантские деревья. Он находится в 4,5 км от туристического центра на тропе водопада Тон-Клой.

Он находится на притоке реки Сок, к которому ведет скользкая боковая тропа, по которой может быть опасно ходить в сезон дождей.Он расположен в 6 км от туристического центра на тропе водопада Тон-Клой.

Пара скал, между которыми протекает река Кхлонг Сок, прекрасное место для купания. Он расположен в 6 км от штаб-квартиры на тропе водопада Тон-Клой.

Одноуровневый водопад Расположен в 7 км от туристического центра, им можно любоваться круглый год. Он расположен примерно в 1 км от ущелья Тан Нам на тропе водопада Тон Клой.

К этому 11-уровневому водопаду ведет тропа длиной почти 4 км, начинающаяся с северной стороны территории лагеря.Первая часть тропы — это деревянный променад, по которому туристам разрешено гулять свободно, но требуется гид на развилке тропы примерно в 400-500 метрах к северу. Шансы увидеть некоторых млекопитающих или птиц на этой тропе выше, потому что она не так часто используется в качестве главной тропы на запад. Большая птица-носорог, бамбуковый дятел, трогон с оранжевой грудью, полосатая питта и черно-желтая клювая — вот лишь некоторые из множества видов птиц, встречающихся на этой тропе.

Смотровая площадка находится на западной стороне парка, на главной дороге 401 между Сураттани и Такуапа, на 113,5 км. 5 км к западу от деревни Као Сок

Это одноярусный водопад высотой 30 метров, расположенный всего в нескольких сотнях метров от смотровой площадки Сан-Ян, с правой стороны. На дороге нет знака, указывающего, где начинается тропа, но вход представляет собой небольшое открытое пространство, где можно припарковать автомобили / мотоциклы и т. Д.

Водопад мало что может предложить в сухой сезон, рекомендуется только во время сезона дождей.

Примерно в 10-12 км к востоку от деревни Као Сок на 99 км, это 6.Тропа длиной 5 км, которая заканчивается у озера Чео Лан. Для прогулки по тропе требуется гид. Прогулку по этой тропе можно совместить с прогулкой на лодке к пещерам или другим достопримечательностям вокруг озера и завершиться у озера Чео Лан.

Достаточно длинная и сложная, но очень интересная тропа, по которой могут ходить только подходящие люди. Первые 800 метров тропа довольно крутая, встречается с ручьем. Достигнув ручья, поход продолжится немного вдоль ручья в пещеру длиной 400 метров, у которой есть выход на другом конце. Тропа продлится еще 7 км от другого конца пещеры и закончится обратно на станции рейнджеров. По маршруту можно посетить водопад высотой 70 метров. Вся тропа может занять до 3-4 часов.

Для прогулки по тропе требуется только рейнджера или гида. Если есть прогноз дождя, вам не разрешат войти в пещеру. Когда идет дождь, уровень воды внутри пещеры может быстро увеличиваться до нескольких метров, причина этого — смертельно сильные течения.Проход через пещеру — единственный способ вернуться по длинному круговому маршруту к станции рейнджеров, и его нельзя обойти пешком.

цветов рафлезии также можно найти на этой тропе. В окрестностях этой тропы можно увидеть бабочек и рептилий. Если повезет, могут появиться некоторые виды птиц-носорогов, большие птицы-носороги довольно распространены в этом районе. На тропе довольно часто можно увидеть огромные следы гауров, но увидеть их очень редко. В пещере можно увидеть несколько видов лягушек и несколько видов летучих мышей.

На карте будет видна только первая часть тропы до пещеры.

В Као Сок есть множество пещер, до некоторых можно добраться на лодке или пешком.

Эта пещера длиной 500 метров расположена недалеко от станции рейнджеров 4 на притоке Клонг-Пей. Пещера имеет очень широкий вход, через который течет вода. Пещера находится примерно в 4 км от озера.

Пещера очень опасна в дождливые дни.Два гида и шесть туристов погибли в этой пещере еще в 2007 году, когда она была быстро затоплена в дождливый день. Гиды не проведут вас через эту пещеру, если ожидается дождь. Пещера открыта для посещения только с 14 декабря до конца мая (даты могут меняться из года в год).

Эта пещера, также известная как пещера Пхра Кей Петч, расположена в притоке Клонг Ка в Чео Лан, на южной стороне водохранилища, почти в 18 км от главного пирса. Это одна из лучших пещер в парке с впечатляющими сталагмитами и сталактитами, где обитают летучие мыши.

Ближайшие дома на плотах — Клонг Ка (2 км) и Нанг Прай (4,5 км). Чтобы посетить эту пещеру, необходимы фонарики.

Эта пещера находится на берегу небольшого озера к северу от притока Клонг Лонг, это одна из самых популярных пещер. В этой пещере были найдены окаменелости кораллов. В прошлом пещера использовалась повстанцами-коммунистами.

Еще фотографии

Въездной карантин и правила по прибытии в Норвегию

13.08.2021 : Добавлено, что цифровой сертификат COVID Национальной службы здравоохранения Англии и Уэльса может быть проверен норвежскими властями.

09.08.2021 : Обновлены карта и таблица.

02.08.2021 : Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

26.07.2021 : Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

21.07.2021 : Контент был упрощен, ссылки обновлены, часть существующего контента была уточнена.

19.07.2021 : Информация об обновлениях в списке третьих стран ЕС. Дополнительная информация о требованиях к карантину для поездок из зеленых стран и регионов, которая применяется, если путешественник находился транзитом или находился в оранжевых / красных / фиолетовых / серых странах и регионах в течение последних 10 дней.

19.07.2021 : Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

12.07.2021 : Исправлена ​​карта, поэтому острова отображаются правильным цветом

12.07.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

09.07.2021 : Добавлена ​​ссылка на пресс-релиз от Government.no (в настоящее время доступен только на норвежском языке).

08.07.2021 : Заменена карта Европы на карту мира.

06.07.2021 : Обновлены карта и таблица карантинных входов в Европе, добавлен список стран с фиолетовым цветом и изменен текст, в котором упоминаются пороговые значения. Общий обзор текста.

05.07.2021 : 00:00 Обновлены карта и таблица зеленых, красных, темно-красных, пурпурных и серых областей в Европе с 5 июля.

29.06.2021 : Уточнены правила въезда для детей младше 16 лет.

28.06.2021 : В 00:00: обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

24.06.2021 : Небольшие уточнения, в том числе изменения, связанные с введением в ЕС сертификата COVID-19

23.06.2021 : Добавлено, что шведский сертификат COVID-19 еще не готов для этого использования.

22.06.2021 : Незначительные изменения в таблице о въезде и карантине, чтобы сделать рекомендации более понятными.

21.06.2021 : Обновлены карта и таблица зеленых и красных областей в Европе с 21 июня. Обновленная таблица стран Европы, в которых требуются карантинные отели. Изменено с «желтых земель и территорий» на «зеленых земель и территорий».Добавлено, что регистрация и тестирование всех на границе введены независимо от того, откуда они приехали, но исключения для вакцинированных / переболевших COVID-19.

20.06.2021 : Добавлены «Норвежские, шведские или датские сертификаты». Обновлена ​​таблица основных правил, чтобы отразить обновления в норвежском тексте.

19.06.2021 : Обновлено в соответствии с правительственным планом открытия.Удален список стран, в которых требуется карантин в отелях, так как в настоящее время там нет стран.

18.06.2021 : С 19 июня в 12:00 путешественники из стран ЕЭЗ и Шенгенской зоны с менее чем 500 новыми случаями заражения на 100000 за последние две недели освобождаются от требования о карантине в отелях и о том, что несовершеннолетние не посещают в карантинные отели. Путешественники из стран, не входящих в ЕЭЗ и Шенген, должны оставаться в карантинных отелях до получения отрицательного результата теста ПЦР, взятого не ранее, чем через три дня после въезда.

14.06.2021 : Обновлены требования к документации.

14.06.2021 : в 00:00 Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

11.06.2021 : Начиная с 11.6, полностью вакцинированные и люди, переболевшие COVID-19 в течение последних 6 месяцев, не будут подвергаться въездному карантину. Обновлена ​​информация об исключениях из карантина в соответствии с этим.

10.06.2021 : Добавлена ​​ссылка на статью «Освобождение от выездного карантина с пятницы 11 июня в 15:00» на сайте regjeringen.no.

07. 06.2021 : Добавлено предложение: В настоящее время единственный безопасный и проверяемый способ документально подтвердить статус защищенного — это войти на helsenorge.no.

04.06.2021 : В 15:00: обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

04.06.2021 : 15:00: Добавлена ​​таблица европейских стран и территорий, в которых не требуются карантинные отели, и обновлен обзор европейских стран и территорий, в которых требуются карантинные отели. А также ссылка на regjeringen.no на статью, сокращающую въездной карантин для лиц, находящихся под защитой, и детей до 12 лет.

03.06.2021 : Добавлено разъяснение, что с 3 июня люди, которые защищены от COVID-19 (полностью вакцинированы, через 3-15 недель после первой дозы вакцины или болеют в течение последних 6 месяцев), освобождаются от карантинных отелей. и может провести период карантина в другом подходящем карантинном месте.Размещена ссылка на статью на regjeringen.no, в которой обсуждается проверяемый сертификат короны и временное решение до 11 июня, что означает, что путешественники с 03.06.2021 в 12 часов не должны находиться в карантинных отелях, но могут пройти карантин дома или в другом подходящем месте, если они на границе могут документально подтвердить helsenorge.no, что они были вакцинированы или заразились COVID-19 в течение последних шести месяцев.

02.06.2021 : Добавлено объяснение вспомогательных данных для карты желто-красных стран Европы

01.06.2021 : Добавлено уточнение, что обзор европейских стран / территорий, требующих карантинных отелей в будущем, будет обновляться каждый понедельник в 00:00. Первое обновление: понедельник, 7 июня. Разъяснения к тексту о карантинных отелях.

31. 05.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

27.05.2021 : Удалено различие между необходимыми и ненужными поездками и добавлено это из 27.5, путешественникам из европейских стран, у которых за последние 14 дней зарегистрировано менее 150 новых случаев инфицирования на 100 000 человек, и не более 4 процентов прошедших тестирование, не требуется оставаться в карантинных отелях. С 27.05 инфекционная ситуация в Соединенном Королевстве будет оцениваться так же, как и в других странах ЕЭЗ / Шенгенской зоны.

24.05.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

18.05.2021 : Добавлено в ЕЭЗ и Шенгенскую зону или в Соединенное Королевство, ср. Поправки к регламенту COVID-19 от 13.5.

17. 05.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

10.05.2021 : 7 мая 2021 года Правительство объявило об изменениях в карантинных отелях. Путешественники, которые останавливались в странах за пределами ЕЭЗ / Шенгенской зоны, должны по прибытии в Норвегию отправиться в карантинный отель.Это касается независимо от того, была ли поездка важной или нет. Изменения вступили в силу с 12 часов дня воскресенья 9 мая 2021 года.

10.05.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

03.05.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

29.04.2021 : Новые приговоры проходят проверку по прибытии: в случае положительного результата экспресс-теста на антиген те, кто находился за пределами ЕЭЗ и Шенгенской зоны в течение последних 10 дней, должны пройти тест ПЦР в пункте пересечения границы. Другие люди с положительным результатом экспресс-теста на антиген должны пройти тест ПЦР в течение 24 часов после прибытия.

28.04.2021 : Добавлена ​​информация о более строгих мерах въезда для путешественников из Бангладеш, Индии, Ирака, Непала и Пакистана.Пункт о карантинной гостинице перенесен в пункт о въездных требованиях.

26.04.2021 : В 00:00: Обновленная карта и таблица с новыми решениями о карантине

18.04.2021 : В 00:00: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине

12.04.2021 : В 00:00: обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

31.03.2021 : Добавлена ​​информация о требовании для отрицательного результата теста, сданного за 24 часа до прибытия, также распространяется на граждан Норвегии и жителей Норвегии с 1 апреля 2021 года.

30.03.2021 : Тест по прибытии должен быть экспресс-тестом на антиген, ПЦР может использоваться только в исключительных случаях. Прекращение пребывания в карантинной гостинице с отрицательным результатом анализа через 3 дня после прибытия больше невозможно.

29.03.2021 : Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

25.03.2021 : Добавлена ​​информация о важном путешествии со ссылкой на Helsenorge.no

25.03.2021 : Удален текст о тестах ПЦР на границе для путешественников из определенных стран (отменен раздел в правилах)

22.03.2021 : Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине

19. 03.2021 : Обновлена ​​информация о карантинных отелях

15.03.2021: Добавлена ​​ссылка на постановления правительства о карантине гостиниц

14.03.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

11.03.2021: Добавлены новые рекомендации Правительства

08.03.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

23.02.2021: Добавлено требование о том, что лица, находящиеся на въездном карантине, но не проживающие в карантинных отелях, должны проходить тестирование с помощью ПЦР-теста через семь дней после дня прибытия.

21.02.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

14.02.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

31.01. 2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

28.01.2021: Добавлена ​​информация о более строгих правилах для иностранных граждан, желающих въехать в Норвегию с 29 января.

25.01.2021: Обновлены «Правила и требования при въезде в Норвегию»

24.01.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

18.01.2021: Добавлен текст об обязательном тестировании с 18 января

17.01.2021: в 23:59: Обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине.

15.01.2021: Великобритания отмечена красной полосой на карте (Великобритания должна была быть красной полосой при обновлении карты 11.01.21).

11.01.2021: Уточнен пункт требований к тестированию:
Тест по прибытии: со 2 января необходимо пройти тестирование на COVID-19 по прибытии в Норвегию. Обязанность распространяется на всех, кто находился в зоне карантина в течение последних 14 дней до прибытия в Норвегию.Это также относится к норвежским гражданам. Тест следует сдать как можно скорее, но не позднее, чем через 24 часа после прибытия в Норвегию.

10.01.2021: в 23:59: Добавлена ​​ссылка на информационную горячую линию для помощи с регистрационной формой, обновлена ​​карта и таблица с новыми решениями о карантине. Добавлено предложение: «С нового года Великобритания больше не является членом ЕС и в результате больше не будет включаться в эту оценку и будет обязана иметь карантинную пошлину, как и для других стран за пределами ЕС / ЕЭЗ / Шенгенской зоны. (известные как третьи страны).«

05.01.2021: Изменена структура первых двух абзацев об обязательстве проверки и карантине при въезде. Никаких изменений в совете.

02.01.2021: Изменен текст о запрете полетов на прямые рейсы из Великобритании в Норвегию. Запрет будет снят со 2 января в 17:00. Добавлен текст и ссылки об обязательном тестировании для путешественников в Норвегию со 2 января.

31.12.2020: Правительство вводит обязательное тестирование на COVID-19 для путешественников в Норвегию со 2 января 2021 года.Подробнее об этом читайте здесь: Обязательное тестирование для путешественников в Норвегию (Government.no). Fhi.no будет обновлен после введения меры. Добавлен пояснительный раздел об изменениях в карантине при въезде с 8:00 29.12.2020.Люди, которые приезжают в Норвегию, могут быть помещены в карантин не ранее седьмого дня, если у них дважды после прибытия окажется отрицательный результат на COVID-19.

28.12.2020: Добавлено: «Правительство вводит новые правила карантина, которые будут способствовать тому, что больше путешественников будут проходить тестирование, и укрепят соблюдение правил карантина.Это действует с 29 декабря в 08.00. »

22.12.2020: Добавлен текст о рейсах из Великобритании

20. 12.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

17.12.2020: Добавлена ​​ссылка на Tallgrunnlag для innreisekarantene для uke 49 og 50.

14.12.2020: Скорректированное предложение: Тест необходимо сдавать в течение последних 72 часов до прибытия в Норвегию. Добавлена ​​ссылка на новостную статью об изменении правил карантинных отелей.

11.12.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

07.12.2020: Содержание о рекомендациях по инфекционному контролю для путешествий перемещено в отдельную статью: Рекомендации по инфекционному контролю для путешествий во время пандемии COVID-19

04.12.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

27.11.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

23.11. 2020: Добавлено предложение о карантинных отелях

20.11.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

16.11.2020: Сообщено об ошибке положения карты для двух регионов Финляндии — проблема устраняется. Itä-Savo и Etelä-Savo поменялись местами на нашей карте. На самом деле Ита-Саво находится на восточной стороне Этеля-Саво. Ошибка исправлена ​​в 13:00.

13.11.2020, 23:59: Измените в разделе «Критерии оценки передачи» на «С 10 ноября пороговые значения будут изменены.В настоящее время предусмотрены исключения из въездного карантина для путешественников из стран ЕЭЗ и Швейцарии, где за последние две недели зарегистрировано менее 25 подтвержденных случаев на 100000 жителей (оценка на национальном уровне) и менее 4% положительных тестов в среднем на каждого человека. неделя за последние две недели ». Добавлен абзац о внутренних поездках.

10.11.2020: Добавлена ​​ссылка на информационные письма в Управлении здравоохранения

06. 11.2020: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

30.10.2020: В 23:59: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине

24.10.2020: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

17.10.2020: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине.

15.10.2020: Добавлена ​​ссылка на новость об изменении въездного карантина с 17 октября 2020 года.

08.10.2020: Добавлена ​​ссылка на новость об изменении въездного карантина с 10 октября 2020 года.

03.10.2020: Корректировка даты в таблице.

02.10.2020: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине, которые применяются с полуночи.

25.09.2020: Обновлены карта и таблица с новыми решениями о карантине, которые применяются с полуночи.

21. 09.2020: На опубликованной 19 сентября карте шведский регион Вестманланд был ошибочно отмечен желтым цветом. Область красного цвета, это было исправлено 21 сентября 2020 года, в 10:20.

18.09.2020: Добавлена ​​новая карта и обновлена ​​таблица стран в полночь. Страны (от желтого до красного): Эстония. Регионы (от желтого к красному): Зеландия и Северная Ютландия, в Дании, Этеля-Саво в Финляндии. Страны (от красного к желтому): Остров, Лихтенштейн. Регионы (от красного к желтому): Кальмар и Блекинге в Швеции, Кайнуу в Финляндии.

17.09.2020: Добавлена ​​ссылка на новость об изменении въездного карантина с 19 сентября 2020 года.

15.09.2020: Сокращено описание исключения из правил COVID-19

14.09.2020: Обновлена ​​формулировка и добавлен параграф о еженедельной оценке NIPH инфекционной ситуации в странах ЕС, ЕЭЗ и Шенгенской зоне.

11. 09.2020: Добавлена ​​новая карта и обновлена ​​таблица стран в полночь. Страны: Венгрия и Словакия. Регионы: Южная Дания в Дании, Ямтланд и Эребру в Швеции и Кайнуу в Финляндии.

09.09.2020: Добавлена ​​ссылка на новость об изменении въездного карантина для путешественников из Словакии и Венгрии, который применяется с 12 сентября 2020 года.

04.09.2020: Мелкие исправления текста, не меняющие рекомендации. Добавлена ​​новая карта и обновленная таблица стран в полночь.

28.08.2020: Добавлено в раздел о странах и регионах «Сотрудники, у которых есть члены семьи, у которых есть симптомы, но которые не являются вероятными или подтвержденными случаями COVID-19, могут пойти на работу, но должны следовать приведенным здесь советам.»Добавлены карта и таблица, действующие с полуночи.

26.08.2020: Добавлена ​​ссылка на новость об изменении въездного карантина для путешественников из Германии и Лихтенштейна с 29 августа 2020 года.

24.08.2020: В параграф о заморских регионах добавлен Гибралтар. Удалены регионы для Исландии и перемещена Исландия в основной список стран.

21.08.2020: Добавлена ​​ссылка на норвежскую страницу со списком вылетов, у пассажиров которых подтверждено наличие COVID-19

20.08.2020: Добавлена ​​ссылка на вопросы и ответы Управления иммиграции.

19.08.2020: Обновлено с изменениями для красных и желтых стран, которые применяются с 22 августа 2020 года.

14.08.2020: Подчеркнул, что правительство рекомендует воздерживаться от всех несущественных поездок и реорганизовал более ранние версии карт, чтобы их было легче найти.

13.08.2020: Исправлена ​​ошибка цветового кода для Зеландии и Южной Дании

12.08.2020: Новая карта и обновленные таблицы, касающиеся изменений, которые применяются с 15 августа, красные и желтые области. Добавлено объяснение о новой категории, желтые области. Рекомендации для путешественников продлены с 20 августа по 1 октября 2020 года.

10.08.2020 Добавленные предложения: По прибытии в Норвегию вам следует отправиться прямо в подходящее место для проживания во время карантина, желательно на личном транспорте. Если вам необходимо находиться в общественном месте или пользоваться общественным транспортом, используйте маску для лица во время поездки, пока не прибудете в пункт назначения.добавленное предложение: Правительство рекомендует жителям Норвегии избегать ненужных поездок за границу. Добавленные предложения: Министерство иностранных дел не рекомендует совершать любые поездки за границу, в которых нет строгой необходимости, это касается до 20 августа. Исключение было сделано 15 июня для стран Северной Европы для стран Северной Европы, которые удовлетворяют определенным требованиям инфекционного контроля. С 15 июля льгота была продлена на поездки в страны ЕС / ЕЭЗ / Шенгенской зоны, которые удовлетворяют этим требованиям.

06.08.2020: Обновлены карта и таблица относительно карантина по прибытии в Норвегию из-за границы. Швеция: Упсала, Седерманланд, Даларна и Вестерботтен изменили цвет с красного на зеленый. Кроноберг и Сконе изменили цвет с зеленого на красный. Европа: Франция, Монако, Швейцария и Чехия изменили цвет с зеленого на красный.

05.08.2020: Обновлен параграф о медицинском персонале, вернувшемся из визита / пребывания в «зеленых» регионах / странах за пределами Норвегии. Медицинскому персоналу рекомендуется пройти тестирование и дождаться отрицательного результата перед тем, как вернуться в клиническую работу или приступить к ней.

30.07.2020: Обновлена ​​карта. Бельгия отмечена красным и находится под въездным карантином.

24.07.2020: Мелкие правки, не влияющие на контент. Обновленная карта и таблица с зелеными и красными регионами и странами.

23.07.2020: Разъяснение теста x1 для медицинского персонала с ориентированной на пациента работы, который в течение последних 10 дней оставался или путешествовал в «зеленых» регионах и странах за пределами Северного региона, а также при поездках в зеленом В регионах и странах Северного региона медицинские работники не проводят тестирование.

17.07.2020: Добавлен параграф о заморских регионах, управляемых странами Шенгенской зоны, но не входящих в Шенгенскую зону.
Добавлен новый абзац об обновлении карты / списка стран, о том, что Правительство принимает решение по рекомендации, и что новая рекомендация будет применяться не раньше, чем на следующий день.

13.07.2020: Районы с достаточно низкой передачей — Указано, что решение об исключениях было принято правительством.

10.07.2020: Изменен порядок некоторых абзацев, обновлены разделы о критериях и правилах карантина при прибытии в Норвегию из-за границы. 18:00: разъясненная инструкция по карантину на работе. 19:00: обновленная версия карты.

25.06.2020: Добавлен параграф о работниках из стран Шенгенской зоны и ЕЭЗ в раздел об освобождении от карантинной пошлины. Обновленная таблица с Готландом (теперь красная). Добавлен абзац о странах ЕС и ЕЭЗ.

22.06.2020: Добавлено предложение о карантине для людей, прибывающих в Норвегию, такое же, как и для близких людей, которым необходимо попасть на карантин.Добавлен заголовок «Освобождение от карантинной пошлины»

18.06.2020
Отредактировано, чтобы было понятнее, каковы правила въезда в Норвегию и где можно найти правила въезда в другие страны.

12.06.2020
Добавлено, что после 15 июня будет разрешен въезд в Норвегию без карантинной пошлины по прибытии после поездки в районы северных стран, которые считаются низкорасположенными. Карты и таблицы с обзором того, какие районы в странах Северной Европы исключены из въездного карантина, будут обновляться каждые 14 дней.Включены критерии оценки того, какие районы в Северном регионе могут быть исключены из въездного карантина.

04.06.2020 Дания, Исландия, Фарерские острова, Гренландия и Аландские острова добавлены в список стран с освобождением от карантинной пошлины при поездках на работу. Не распространяется на транзит из других стран.

29.05.2020: Добавлена ​​ссылка на сайт Правительства о грядущих изменениях правил карантина. Добавлена ​​ссылка о повторном открытии для путешествия в Данию.

15.5.2020: Текст изменен.

08.05.2020

В соответствии с решением правительства Норвегии 07.05.2020 карантинные дни изменены с 14 до 10 дней.

06.05.2020
Обновлен текст о внутренних поездках в соответствии с норвежской версией.

17.04.2020

Удалено предложение об официальном совете, чтобы избежать ненужных поездок до 14 апреля. С 15 апреля это действует до дальнейшего уведомления.

23.03.2020
Удален абзац о домашнем карантине по норвежской версии

16.03.2020
Добавлен абзац от гос. Относится к Швеции и Финляндии.

14.03.2020
Обновлено в соответствии с норвежским текстом:

Совет, как избежать ненужных поездок во все страны. С 14 марта 2020 года норвежские власти не рекомендуют совершать второстепенные поездки во все страны. Совет действует до 14 апреля.Путешественникам следует следить за новостями и туристической информацией от Министерства иностранных дел, поскольку рекомендации могут быстро обновляться. Все, кто выезжает из-за пределов Швеции и Финляндии, будут находиться в карантине в течение 14 дней, независимо от того, есть ли у них симптомы. Это имеет обратную силу с 27 февраля. Это также относится к людям, прибывающим в Норвегию из Швеции и Финляндии, которые оставались в других странах в течение последних 14 дней. Путешественники, которые прибывают в Норвегию, могут вернуться в страну, которую они покинули, вместо того, чтобы находиться в карантине.

13.03.2020

Обновления в соответствии с норвежским текстом. Изменено название пункта «совет после поездки» на «совет по домашнему карантину», добавлена ​​информация обо всех, кто находится на карантине после поездки за пределы Северного региона

09. 03.2020
Текст обновлен в соответствии с норвежским текстом. Консультации после поездок и районов с широко распространенной передачей инфекции

04.03.2020
Текст обновлен в соответствии с норвежским текстом. Общие изменения по всей статье.

25.02.2020:
Добавлена ​​ссылка на страницу с «областями предполагаемой продолжающейся передачи. Пересмотренные рекомендации по профилактике во время путешествия.

17.02.2020
Новый текст: «Кроме того, Министерство иностранных дел советует воздержаться от ненужных поездок в материковый Китай из-за воздействия вспышки вируса на общество в Китае в целом. Ситуация постоянно оценивается (включая материковую часть Китая). Китай, как раньше только Чжэцзян).

14.02.2020:
Обновлены параграфы « Избегайте поездок в провинцию Хубэй и ненужных поездок в Чжэцзян в Китае» и «Консультации после поездки», согласно изменениям в норвежском тексте.

13.02.2020:
Имя вируса изменено с «2019-nCoV» на «COVID-19».

s3-bucket-public-read -hibited — AWS Config

Проверяет, не разрешают ли ваши корзины Amazon S3 публичный доступ для чтения.Правило проверяет параметры блокировки общего доступа, политика корзины и управление доступом к корзине. список (ACL).

Правило считается соответствующим, если выполняются оба следующих условия:

• Параметр «Блокировать общий доступ» ограничивает общедоступные политики или политика корзины. не разрешать публичный доступ для чтения.

• Параметр «Блокировать общий доступ» ограничивает общедоступные списки ACL или ACL корзины не позволяет публичный доступ для чтения.

Правило не соблюдается, когда:

• Если параметр «Блокировать общий доступ» не ограничивает общедоступные политики, AWS Config оценивает разрешает ли политика публичный доступ для чтения. Если политика разрешает публичный доступ для чтения, правило не соблюдается.

• Если параметр Блокировать общедоступный доступ не ограничивает списки ACL общедоступных сегментов, AWS Config оценивает, разрешает ли ACL корзины публичный доступ для чтения. Если ACL ведра позволяет публичный доступ для чтения, правило не соблюдается.

Идентификатор: S3_BUCKET_PUBLIC_READ_PROHIBITED

Тип триггера: Изменения конфигурации и периодические

Регион AWS: Все поддерживаемые регионы AWS

Параметры:

Шаблон AWS CloudFormation

Чтобы создать управляемые правила AWS Config с помощью шаблонов AWS CloudFormation, см. Создание управляемых правил AWS Config с помощью шаблонов AWS CloudFormation.

Военнослужащие США и Южной Кореи проводят имитацию битвы за возвращение деревни возле границы с Северной Кореей

ПОЧЕОН, Южная Корея (Рейтер) — Визг приближающегося огня, за которым следует взрыв, раздается на лесистых склонах холмов недалеко от границы между Северной и Южной Кореей.

Южнокорейский солдат принимает участие в общевойсковых учениях в Почеоне, Южная Корея, 19 сентября 2017 года.REUTERS / Kim Hong-Ji

батальона Роб Киммел из боевой группы 2-й бронетанковой бригады США просканировал деревню у подножия горы в поисках характерного дыма.

«Это вражеский огонь пытается атаковать R.O.K. там размещены силы », — говорит Киммел, имея в виду Южную Корею под ее официальным названием — Республика Корея.

Это дрель.

Это лишь одна из нескольких, в которых крупные мировые державы участвуют на Корейском полуострове, над ним и рядом с ним на фоне обострения напряженности после участившихся ракетных испытаний Северной Кореи и ее шестого ядерного испытания в этом месяце.

Солдаты США проводят совместные учения со своими южнокорейскими союзниками, и их задача на день — вернуть деревню в руки врага.

Время от времени раздаются выстрелы солдат в боевой экипировке, прячущихся в зданиях и бродящих по углам деревни, специально созданной для военной подготовки.

Около 700 военнослужащих участвуют в четырехдневных учениях, называемых Warrior Strike 8, недалеко от демилитаризованной зоны (DMZ) — самой сильно защищенной границы в мире.

Южная Корея и Соединенные Штаты технически все еще находятся в состоянии войны с Северной Кореей после того, как корейский конфликт 1950-53 годов закончился перемирием, а не мирным договором.

Такие учения проводятся регулярно, но военные пригласили средства массовой информации впервые за два года, чтобы понаблюдать за ними, сказал Ким Хён Сок, специалист по связям с общественностью 2-й пехотной дивизии США.

Американские военные охарактеризовали эти учения как подготовку к «боевым действиям сегодня вечером» против Северной Кореи в случае необходимости.

Команда Киммела, базирующаяся в Форт-Худе, штат Техас, в течение девяти месяцев находится в Южной Корее.

«Мы продолжаем тренироваться в ситуациях, которые могут возникнуть», — сказал Киммел. «Это важная веха … мы сделаем два-три из них, пока будем здесь».

Северная Корея неоднократно требовала от США и Южной Кореи прекращения совместных учений, которые Пхеньян считает провокационными.

Днем ранее американские и южнокорейские военные самолеты провели учения по бомбометанию полуострова.

В то же время официальное информационное агентство Китая Синьхуа сообщило, что Китай и Россия начали военно-морские учения у российского дальневосточного порта Владивосток, недалеко от границы между Россией и Северной Кореей.

Сообщение Синьхуа не связывает учения с продолжающейся напряженностью из-за Северной Кореи, которая, как ожидается, будет доминировать на Генеральной Ассамблее Организации Объединенных Наций в Нью-Йорке во вторник.

Китай и Россия неоднократно призывали к мирному урегулированию и переговорам по разрешению назревающего кризиса вокруг Северной Кореи.

На вопрос, вызовут ли учения у границы, заставят ли северокорейскую сторону опасаться военных возможностей союзников, Киммел ответил: «Я не уверен, но надеюсь, что это так».

Под редакцией Саймона Кэмерона-Мура

Доксициклин вызывает уничтожение токсинов Hok в кишечной палочке хозяина

Abstract

Антибактериальная эффективность тетрациклиновых антибиотиков значительно снизилась из-за развития резистентности, что привело к снижению их клинического применения.Локус hok / sok представляет собой элемент стабильности токсин / антитоксин плазмиды типа I, часто связанный с плазмидами множественной лекарственной устойчивости, особенно плазмидами, кодирующими ESBL. Он повышает выживаемость и патогенность клеток-хозяев в стрессовых условиях роста, а также повышает устойчивость бактерий к β-лактамным антибиотикам. Локус hok / sok формирует дцРНК посредством РНК: РНК взаимодействий между мРНК, кодирующей токсин, и некодирующей антитоксин РНК, и сообщалось, что доксициклин связывает структуры дцРНК и ингибирует их расщепление / процессинг дцРНКазой, РНКазой III. В этом исследовании изучалась антибактериальная активность доксициклина в клетках бактерий-хозяев hok / sok, его влияние на индуцированные hok / sok изменения в росте и задействованные механизмы. Разнообразные штаммы E . coli трансформировали плазмидами hok / sok и оценивали на чувствительность к доксициклину и изменения роста. Результаты показывают, что локус hok / sok увеличивает чувствительность бактерий к доксициклину, что более очевидно у штаммов с более выраженными эффектами роста, индуцированными hok / sok .Повышенная чувствительность к доксициклину возникает, несмотря на устойчивость к β-лактамам, которую обеспечивает hok / sok . Было обнаружено, что доксициклин вызывает гибель бактерий фенотипическим образом, характерным для экспрессии токсина Hok, что позволяет предположить, что он ингибирует деградацию дцРНК токсина / антитоксина, что приводит к экспрессии токсина Hok и гибели клеток. Таким образом, доксициклин может противодействовать механизмам поддержания / размножения, персистенции и патогенности плазмид множественной лекарственной устойчивости, связанных с локусом hok / sok , что потенциально может помочь в усилиях по смягчению роста устойчивости к противомикробным препаратам.

Образец цитирования: Chukwudi CU, Good L (2020) Доксициклин вызывает уничтожение токсинов Hok в организме хозяина E . coli . PLoS ONE 15 (7): e0235633. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633

Редактор: Моника Картель Гесталь, Университет Джорджии, США

Поступила: 4 марта 2020 г .; Одобрена: 18 июня 2020 г .; Опубликовано: 6 июля 2020 г.

Авторские права: © 2020 Chukwudi, Good.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе.

Финансирование: CC получил стипендию и стипендию для академического персонала Содружества от Комиссии по стипендиям Содружества в Великобритании (NGCF-2017-199) на период этой работы.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Многие клеточные РНК играют регуляторную роль, а вторичные структуры, которые важны для их биологической активности, образуются посредством сворачивания и образования двухцепочечных областей (дцРНК). Антисмысловые РНК являются примерами регуляторных РНК и часто действуют путем подавления экспрессии генов посттранскрипционно после образования дцРНК с их целевыми матричными (смысловыми) РНК.Образуя дуплекс с мРНК регулируемого гена посредством взаимодействий спаривания оснований, участки дцРНК могут блокировать распознавание мРНК рибосомами или приводить к распознаванию и расщеплению двухцепочечными рибонуклеазами [1, 2]. У бактерий многие антисмысловые РНК кодируются плазмидами и часто участвуют в регуляции репликации плазмид и контроле количества копий [3]. Более того, известно, что многие плазмидные и хромосомные антисмысловые РНК в бактериях действуют как антитоксины типа I, подавляя экспрессию токсичных белков [4–6]. Кроме того, некоторые антисмысловые РНК-антитоксины регулируют экспрессию токсинов, связанных со стрессовой реакцией [4].

Хорошо зарекомендовавшим себя примером регуляторной антисмысловой РНК, кодируемой цис в бактериях, является антитоксин Sok (подавление убийства), обычно обнаруживаемый в E . coli . Антисмысловая РНК Sok регулирует экспрессию мРНК hok (уничтожение хозяина) путем связывания с мРНК hok и инициирования распада РНКазы III дуплекса, тем самым ингибируя трансляцию транскрипта hok [7, 8].Sok-РНК более лабильна (период полураспада около 30 секунд), чем стабильная мРНК hok (период полураспада в часах), которая сохраняется намного дольше в новых дочерних клетках после деления клеток [9–11]. В дочерних клетках, содержащих плазмиду, продолжающаяся быстрая транскрипция антисмысловой РНК Sok с ее сильного промотора обеспечивает ингибирование экспрессии hok . В клетках, которые теряют плазмиду во время деления, приобретенная Sok-РНК разрушается быстрее, чем мРНК hok , высвобождая, таким образом, стабильную мРНК hok для трансляции, что приводит к последующей гибели клеток из-за продуцируемого токсина (рис. 1).Токсин вызывает повреждение клеточной мембраны, которое проявляется в виде характерной морфологии, называемой «клеткой-призраком» [11–14]. Это гарантирует, что все выжившие дочерние клетки наследуют плазмиду, поскольку те, которые не наследуют плазмиду во время репликации, быстро убиваются токсином Hok [15]. Кроме того, было обнаружено, что локус hok / sok усиливает бактериальную стрессовую реакцию и улучшает рост в ограничивающих рост условиях, таких как высокая температура, низкая плотность клеток и лечение антибиотиками [16].Плазмида R1, в которой первоначально был обнаружен локус hok / sok , несет несколько генов, кодирующих признаки устойчивости, и, таким образом, способна придавать множественную лекарственную устойчивость к антибиотикам (ампициллин, хлорамфеникол, канамицин, стрептомицин и сульфаниламиды). бактерии-хозяева [17–19]. Впоследствии локус hok / sok был обнаружен во многих плазмидах, которые кодируют бета-лактамазы расширенного спектра, особенно в БЛРС CTX-M [20], а также в хромосомах некоторых энтеробактерий [21]. В E . coli , хромосомно-кодируемые локусы hok / sok более распространены в патогенных штаммах [22]. В лабораторных штаммах (K-12) некоторые хромосомные локусы, по-видимому, инактивированы вставочными элементами, расположенными рядом с рамками считывания токсина, которые отсутствуют в клетках дикого типа [4]. В отличие от локуса, кодируемого плазмидой, хромосомно-кодируемые локусы hok / sok не опосредуют стабилизацию плазмиды, и их мРНК токсина hok плохо транслируются in vitro [21].Следовательно, активация трансляции может потребовать индукции неизвестными сигналами в живых клетках.

Рис. 1. Модель hok / sok РНК : взаимодействия РНК, участвующие в стабилизации плазмиды через пост-сегрегационное уничтожение .

В клетках, содержащих плазмиду hok / sok , РНК антитоксина Sok (подавление убийства) образует дцРНК с мРНК токсина hok (уничтожение хозяина), которая расщепляется РНКазой III для предотвращения экспрессии токсина. В случае потери плазмиды (например, после деления клетки) Sok-РНК быстро разрушается, высвобождая мРНК hok для трансляции. Токсин Hok вызывает морфологию «клетки-призрака» и гибель клеток.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g001

Было показано, что доксициклин связывает дцРНК и ингибирует расщепление РНКазой III [23]. Также было показано, что он ингибирует процессинг пре-рРНК и образование зрелой рРНК в E . coli ; путь, в первую очередь, зависит от расщепления РНКазой III [24].Здесь мы предполагаем, что доксициклин может ингибировать деградацию РНКазой III комплекса hok / sok токсин / антитоксин дцРНК, что приводит к высвобождению мРНК hok для трансляции по мере распада лабильной Sok-РНК и последующей гибели клеток. Учитывая, что локус hok / sok часто связан с генами устойчивости к антибиотикам и механизмом размножения, в этом исследовании изучалось влияние доксициклина на выживаемость бактерий-хозяев hok / sok и связанные с ними признаки устойчивости к антибиотикам.

Материалы и методы

Штаммы и плазмиды

E . coli штаммы и плазмиды, использованные в этой работе, перечислены в таблице 1. Клетки выращивали на агаре / бульоне LB с добавлением 100 мкг / мл ампициллина (Amp) или 30 мкг / мл хлорамфеникола (Chlr), где указано. . Диски для определения чувствительности к антибиотикам были приобретены в Thermo Fisher Scientific (Oxoid). Запасы бактерий хранили в 15% глицерине при -20 ° C в течение коротких периодов и -80 ° C в течение длительного времени.

Подготовка компетентных клеток

Хост E . Клетки coli сделали химически компетентными (с использованием CaCl ₂ ) для последующей трансформации указанными плазмидами. Единственную колонию клетки-хозяина выращивали в 5 мл бульона LB в течение 2–3 часов при энергичном встряхивании (≈250 об / мин), затем переносили в 100 мл предварительно нагретого бульона LB при 37 ° C. Его инкубировали при 37 ° C при энергичном встряхивании (250 об / мин) до оптической плотности 0,6 при 600 нм (проверено спектрофотометром). Клетки охлаждали на льду в течение 15 минут и переносили в стерильные центрифужные пробирки объемом 50 мл, которые затем центрифугировали при 2000 x g в течение 10 минут с предварительно установленной температурой 0 ° C. Затем осадки суспендировали в 15 мл стерильного ледяного 0,1 М CaCl ₂ осторожным пипетированием, охлаждали на льду в течение 15 минут и снова центрифугировали в течение 10 минут. Их снова суспендировали в 4 мл 0,1 М CaCl ₂ в 15% глицерине и аликвоты по 200 мкл хранили при -80 ° C до использования.

Экстракция плазмиды

Ночные культуры бактериальных клеток, содержащих желаемую плазмиду, выращивали в среде LB, содержащей селективные антибиотики, подходящие для каждой плазмиды, в орбитальном инкубаторе Стюарта S1500 при 37 ° C в течение 16 часов при встряхивании (180 об / мин).Плазмиды экстрагировали с помощью набора QIAgene Miniprep (QIAGEN # 27104) в соответствии с протоколом производителя.

Трансформация бактерий плазмидами

Замороженным компетентным бактериям позволяли осторожно оттаивать на льду. Затем 5 мкл плазмиды (≈5 нг) добавляли к 50 мкл компетентных клеток в 1,5 мл микроцентрифужных пробирках, осторожно перемешивали и инкубировали на льду в течение 30 минут. Клетки подвергали электрошоку, помещая пробирку в водяную баню при 42 ° C на 20–30 секунд. Клетки выделяли путем инкубации с 500 мкл среды SOC в течение 1-2 часов, а затем 50 мкл высевали на чашки с агаром LB, содержащим соответствующие антибиотики.После инкубации в течение ночи одну колонию наносили штрихами на чашку с агаром, содержащую селективный антибиотик для дальнейшего роста. Для дальнейшей проверки успешности трансформации проводили экстракцию плазмиды с трансформантами с использованием набора QIAprep miniprep, и полученную полосу плазмиды проверяли по размеру исходной плазмиды с помощью электрофореза в 1% агарозном геле. Запасы глицерина трансформантов хранили при -80 ° C.

Анализы роста и чувствительности к антибиотикам

Ночные бактериальные культуры разводили примерно до 1 × 10 ⁶ КОЕ (примерно 1 разведение из 1000) в 96-луночных планшетах и ​​выращивали, как уже описано [16]. Анализы чувствительности к антибиотикам проводились как методом дисковой диффузии антибиотиков, так и методом разбавления бульона. Значения МПК оценивали как самую низкую концентрацию лекарственного средства, при которой не наблюдалось наблюдаемого роста бактериальной культуры после 18 часов инкубации.

Фазово-контрастная микроскопия

Образцы (200 мкл) были собраны из бактериальных культур, обработанных субингибиторной концентрацией доксициклина (0,5 мкМ) и обработаны, как описано ранее [27]. Количество клеток, показывающих морфологию клеток-призраков, подсчитывали на поле зрения, и среднее значение выражали в процентах по отношению к нормальной морфологии клеток.

Анализ данных

Данные были проанализированы с использованием Microsoft Office Excel 2017 и IBM SPSS Statistics версии 21. Данные о росте и морфологии культур были проанализированы с использованием описательной статистики, в то время как среднее время удвоения и средние темпы роста hok / sok ⁺ и hok / sok ^– культур сравнивали с использованием непараметрического теста парных выборок (критерий знаковых рангов Вилкоксона). Частоту встречаемости клеток-призраков в культурах hok / sok ⁺ и hok / sok ^— сравнивали с использованием критерия хи-квадрат при 1 степени свободы.Статистическую значимость считали при P -значение ≤ 0,05.

Результаты

Влияние локуса

Для оценки эффектов локуса hok / sok на стабильном фоне мы использовали E . coli Top 10 штамм, в котором как hok / sok ⁺ , так и контрольные плазмиды, pCCB1 и pUC19, очень стабильны без отбора антибиотиков.Дисковые диффузионные тесты на чувствительность к антибиотикам проводили с дисками с доксициклином на чашках с агаром LB. Результаты показали, что зона ингибирования увеличена в клетках, содержащих локус hok / sok , по сравнению с клетками hok / sok ^— (рис. 2), что указывает на то, что hok / Клетки sok ⁺ более чувствительны к доксициклину. Чтобы подтвердить наблюдаемое повышение чувствительности клеток hok / sok ⁺ и определить степень, в которой локус hok / sok влияет на чувствительность к доксициклину, также был проведен анализ чувствительности к антибиотикам в бульонной среде с использованием 96-луночные планшеты.Результаты также показали, что клетки hok / sok ⁺ были более чувствительны к доксициклину, чем клетки hok / sok ^—. Для подавления роста клеток, содержащих локус hok / sok , потребовались более низкие концентрации доксициклина, чем в клетках, лишенных локуса (рис. 2). В то время как 0,6 мкМ доксициклин полностью подавлял рост клеток hok / sok ⁺ , hok / sok ^— все еще демонстрировал измеримый рост выше 0. Концентрация доксициклина 7 мкМ. Хотя локус hok / sok придает устойчивость к определенным антибиотикам, наши результаты показывают противоположные эффекты для доксициклина, где локус придает повышенную чувствительность к доксициклину.

Рис. 2. Влияние локуса hok / sok на E . coli штамм К-12 (Топ 10) чувствительность к доксициклину.

Изображение дисковой диффузионной восприимчивости E . coli Топ-10 штаммов.На диски наносили возрастающие количества доксициклина (1, 2, 3 = 0,1, 0,2, 0,3 мкг доксициклина). Стрелки указывают на более широкие зоны ингибирования в клетках hok / sok ⁺ по сравнению с контрольным штаммом. На графиках показаны кривые роста клеток при увеличении концентрации доксициклина, при этом клетки hok / sok ⁺ демонстрируют более высокое ингибирование роста. Данные представляют шесть повторных экспериментов.

https://doi. org/10.1371/journal.pone.0235633.g002

Влияние локуса

Установлено, что локус hok / sok действует как элемент стрессовой реакции у бактерий и может функционально дополнять дефектный SOS-ответ [16]. Здесь мы исследовали влияние локуса hok / sok на чувствительность к доксициклину E . coli , который является SOS-дефектным (SS996).Этот штамм обычно неспособен противостоять стрессовым условиям роста, таким как высокая температура и лечение антибиотиками, с очень ограниченным ростом в таких условиях. Однако с локусом hok / sok он неограниченно растет в таких стрессовых условиях роста. Тесты на чувствительность к доксициклину показали, что клетки hok / sok ⁺ не только более восприимчивы, но и повышение чувствительности клеток hok / sok ⁺ к доксициклину у этого штамма гораздо более выражено, чем у этого штамма. Десятка лучших штаммов (рис. 3).В то время как 1 мкМ доксициклин полностью подавлял рост клеток hok / sok ⁺ , клетки hok / sok ^— не подавлялись даже до половины нормального уровня при той же концентрации лекарственного средства. Это противоположно предыдущим наблюдениям, сделанным при использовании других антибиотиков, таких как ампициллин и амоксициллин, где клетки hok / sok ^— были более восприимчивыми [16]. Это предполагает, что эффекты усиления роста локуса hok / sok также увеличивают его чувствительность к доксициклину.Другими словами, чем больше локус hok / sok усиливает бактериальную стрессовую реакцию (и выживаемость в отсутствие доксициклина), тем больше он увеличивает чувствительность клетки-хозяина к доксициклину.

Рис. 3. Влияние локуса hok / sok на восприимчивость SOS-дефицитного E . coli (SS996) в доксициклин.

Восприимчивость к E . coli SOS-дефицитный штамм (SS996) с увеличивающимися концентрациями доксициклина, нанесенного на диски (1, 2, 3 = 0.1, 0,2, 0,3 мкг доксициклина). Стрелки указывают на более широкие зоны ингибирования в клетках hok / sok ⁺ по сравнению с контрольным штаммом. На графиках показаны кривые роста культур, содержащих увеличивающиеся концентрации доксициклина, при этом клетки hok / sok ⁺ демонстрируют более высокое ингибирование роста. Данные представляют шесть повторных экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g003

Влияние доксициклина на характеристики кривой роста хозяина hok / sok

Сообщалось, что локус hok / sok значительно увеличивает время задержки и скорость экспоненциальной фазы роста клеток бактерий-хозяев [16]. Когда эти клетки-хозяева hok / sok обрабатывали возрастающими дозами доксициклина, наблюдалось дозозависимое снижение средней скорости роста hok / sok ^— Top 10 клеток (как и следовало ожидать от любого антибиотика). ). Однако это снижение произошло в клетках hok / sok ⁺ , несмотря на увеличение скорости роста, вызванное hok / sok (таблица 2), со значительно более низкими темпами роста для клеток hok / sok ⁺ . чем ячеек hok / sok ^— ( p = 0.001). Это указывает на то, что доксициклин подавляет рост культуры в hok / sok ⁺ через , что является дополнительным механизмом к его нормальному тормозному механизму в контрольных клетках. Кроме того, локус hok / sok увеличивал время удвоения клеток-хозяев (как и ожидалось). Разница между временем удвоения клеток hok / sok ⁺ и hok / sok ^— также была значительно увеличена при лечении доксициклином ( p = 0.011). Это говорит о том, что доксициклин может ингибировать рост культур через эффекты роста, индуцированные hok / sok . В штамме SS996 доксициклин не снижал среднюю скорость роста контрольных клеток при более низких дозах (скорость роста скорее увеличивалась при дозах ≤0,6 мкМ), что указывает на то, что рост клеток SS996 не ингибируется антибактериальной активностью доксициклин в этих дозах. Напротив, доксициклин индуцировал значительное снижение скорости роста клеток hok / sok ⁺ SS996 ( p = 0.001) дозозависимым образом, несмотря на более высокую скорость роста необработанных клеток hok / sok ⁺ по сравнению с контрольными клетками. Это указывает на то, что локус hok / sok может противодействовать механизму, с помощью которого SS996 сохраняется при более низких концентрациях доксициклина, что делает клетки чувствительными к доксициклину при всех дозах.

Влияние резистентности к β-лактамам, ассоциированной с

Было показано, что локус hok / sok увеличивает толерантность / устойчивость клетки-хозяина к β-лактамным антибиотикам (особенно ампициллину и амоксициллину), и это более очевидно в SOS-дефицитном штамме SS996 [16].Таким образом, мы также исследовали влияние резистентности к β-лактамам, ассоциированной с hok / sok , на чувствительность клеток к доксициклину. В штамме Top 10 результаты показали, что клетки hok / sok ⁺ были все еще более чувствительны к доксициклину, чем клетки hok / sok ^— даже в присутствии ампициллина (рис. 4). Когда рост клеток сравнивали в среде LB с ампициллином и без него, не было различий в характере роста и чувствительности клеток к доксициклину (D).Это указывает на то, что на чувствительность клеток к доксициклину не влияет присутствие ампициллина в среде (и связанная с ним устойчивость), что позволяет предположить, что увеличение чувствительности к доксициклину в клетках hok / sok ⁺ происходит по механизму, который не является антагонистичен механизму устойчивости к ампициллину.

Рис. 4. Влияние резистентности к β-лактамам, ассоциированной с hok / sok, на чувствительность к доксициклину.

На графиках показаны кривые роста клеток Top 10 при возрастающих концентрациях доксициклина в среде LB amp (содержащей 100 мкг / мл ампициллина), при этом клетки hok / sok ⁺ демонстрируют более высокое ингибирование роста (C). Чувствительность к доксициклину клеток hok / sok ⁺ остается одинаковой в средах LB и LB amp (D). Данные представляют шесть повторных экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g004

В штамме SS996 также не было различий в характере роста и чувствительности к доксициклину клеток hok / sok ⁺ при сравнении в LB и LB amp media (рис. 5). Это также указывает на то, что на чувствительность к доксициклину клеток hok / sok ⁺ не влияет ассоциированная устойчивость к β-лактаму (ампициллину).Однако контрольные ( hok / sok ^— ) клетки показали большее ингибирование роста и улучшенную чувствительность к доксициклину в среде LB amp, из-за его повышенной чувствительности к ампициллину [16]. Эти результаты показывают, что доксициклин может преодолевать устойчивость к ампициллину, придаваемую локусом hok / sok клеткам-хозяевам, и что как доксициклин, так и ампициллин могут работать синергетически, усиливая уничтожение бактерий / ингибирование роста.

Рис. 5. Влияние резистентности к β-лактамам, связанной с hok / sok, на чувствительность к доксициклину.

На графиках показаны кривые роста клеток SS996 при возрастающих концентрациях доксициклина в среде LB amp (содержащей 100 мкг / мл ампициллина). Чувствительность к доксициклину клеток hok / sok ⁺ остается одинаковой как в среде LB, так и в среде LB amp (D), но клетки hok / sok ^— также демонстрируют повышенную чувствительность в среде LB amp. Данные представляют шесть повторных экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g005

МИК доксициклина в

для доксициклина также показало, что для полного подавления роста клеток, содержащих hok / sok , требуются более низкие количества доксициклина, чем тех, которые не содержат локус hok / sok (таблица 3).

Влияние доксициклина на рост

Чтобы дополнительно проверить, что наблюдаемое увеличение чувствительности к доксициклину опосредуется локусом hok / sok , мы также проверили чувствительность клеток, содержащих две другие плазмиды hok / sok (pCCB2 и pCCB3) и их контроль. клетки (plAU80 и pHNZ) до доксициклина.Результаты по-прежнему показывают повышенную чувствительность клеток hok / sok ⁺ к доксициклину (фиг. 6 и 7). Это дополнительно утверждает, что локус hok / sok увеличивает чувствительность клетки-хозяина к доксициклину.

Рис. 6. Влияние локуса hok / sok на чувствительность к доксициклину.

Кривые роста клеток Top 10 и SS996, содержащих плазмиды pCCB2 hok / sok , и контролей, обработанных 1 мкМ доксициклином, при этом клетки hok / sok ⁺ показали повышенную чувствительность.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g006

Рис. 7. Влияние локуса hok / sok на чувствительность к доксициклину.

Кривые роста клеток Top 10 и SS996, содержащих плазмиды pCCB3 hok / sok , и контролей, обработанных 1 мкМ доксициклина, при этом клетки hok / sok ⁺ показали повышенную чувствительность.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g007

Влияние доксициклина на морфологию

hok / sok система токсин / антитоксин индуцирует гибель клеток-хозяев через пост-сегрегационный механизм уничтожения, который связан с характерной морфологией клеток, известной как «клетки-призраки», которые возникают из-за активности Hok токсин. Чтобы установить, связано ли наблюдаемое увеличение чувствительности к доксициклину у клеток-хозяев hok / sok с системой токсин / антитоксин, мы исследовали морфологию клеток, обработанных субингибиторной концентрацией доксициклина (0.5 мкМ ≈0,2 мкг / мл) с помощью фазово-контрастной микроскопии, чтобы увидеть, демонстрируют ли клетки типичную морфологию активности токсина Hok / гибели клеток у бактерий (клетки-призраки). Полученные изображения показывают значительно увеличенное количество ( p = 0,000) клеток hok / sok ⁺ с морфологическими изменениями, указывающими на активность токсина Hok (клетки-призраки). Эти клетки кажутся более плотными на полюсах клеток, указывая на нарушение проницаемости мембран, связанное с убийством Hok (Рис. 8).Около 70% клеток hok / sok ⁺ показали морфологию клеток-призраков, тогда как менее 10% клеток hok / sok ^— показали аналогичную морфологию (аналогично необработанным клеткам) . Это предполагает, что токсин Hok активируется в клетках бактерий, содержащих локус hok / sok , после обработки доксициклином.

Рис. 8. Фазово-контрастные микроскопические изображения клеток Top 10 hok / sok ⁺ и hok / sok ^— , обработанных доксициклином (0.5 мкМ).

Двойные стрелки указывают на клетки, которые кажутся более плотными на полюсах, чем в середине («призрачные» клетки), которые представляют собой морфологические изменения, связанные с активностью токсина Hok, по сравнению с нормальными клетками (обозначены одной стрелкой). Масштабная линейка = 2 мкм. Гистограмма показывает процентное соотношение клеток-призраков к нормальным клеткам, рассчитанное из одинаковой площади изображений с фазово-контрастной микроскопией hok / sok ⁺ и hok / sok ^— образцов бактерий, примерно 70% клетки-призраки в образце hok / sok ⁺ и около 10% клеток-призраков в образце hok / sok ^—.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235633.g008

Обсуждение

Локус hok / sok может вносить вклад в бактериальные стрессовые реакции, тем самым помогая клеткам выжить в неблагоприятных условиях роста, таких как высокая температура и лечение антибиотиками [16]. Локус увеличивает как время задержки, так и экспоненциальную скорость роста культур бактерий-хозяев. В этом исследовании мы показываем, что в то время как hok / sok обычно увеличивает время удвоения и среднюю скорость роста культур бактерий-хозяев, он непреднамеренно повышает чувствительность к доксициклину для клеток-хозяев, особенно при очень низких дозах, которые в противном случае клетки не попали бы в организм. восприимчивый.Эта повышенная восприимчивость к доксициклину, по-видимому, опосредована дополнительным механизмом, который действует синергетически с установленным антибактериальным механизмом ингибирования синтеза белка. Это особенно интересно, учитывая тот факт, что локус hok / sok усиливает устойчивость к ампициллину (и β-лактамным антибиотикам) в клетках бактерий-хозяев [16].

Было обнаружено, что наблюдаемое повышение чувствительности к доксициклину в этом исследовании более заметно у SOS-дефицитного штамма (SS996), чем у нормального штамма (Top 10).Это согласуется с предыдущими сообщениями о том, что ростовые эффекты локуса hok / sok более заметны у штаммов, которые дефектны по SOS-ответу [16], и были связаны с изменениями в активности FtsZ [27]. Путь SOS-ответа был вовлечен в устойчивость бактерий к β-лактамным антибиотикам и фторхинолонам [28, 29], но, наоборот, в этом исследовании увеличивает чувствительность к доксициклину.

Локус hok / sok тесно связан с плазмидами, кодирующими ESBL, особенно с бета-лактамазами CTX-M [20] и многими другими генами устойчивости к антибиотикам [17-19]. Он вносит вклад в устойчивость к β-лактамам двумя способами: повышая толерантность клеток-хозяев к более высоким количествам препарата [16] и обеспечивая стабилизацию / поддержание и распространение генов устойчивости, обычно переносимых на hok /. sok [15, 30]. Функция стабилизации / поддержания плазмиды локуса hok / sok придает признаки, которые помогают бактериям уклоняться от многократного лечения антибиотиками, тем самым поддерживая и распространяя устойчивость к антибиотикам.Сочетание нескольких механизмов повышения устойчивости к антибиотикам делает понимание гена hok / sok критически важным в борьбе с устойчивостью к антибиотикам. Следовательно, наблюдения повышенной чувствительности клеток-хозяев hok / sok к доксициклину в этом исследовании могут открыть возможности для борьбы с множественными механизмами устойчивости к антибиотикам с использованием внутренних механизмов выживания бактерий. Также становится более интересным наблюдение, что доксициклин, член тетрациклиновой группы антибиотиков, клиническая применимость которых сильно ограничена из-за развития резистентности, может быть полезным в этом отношении.

Когда чувствительность к доксициклину клеток-хозяев hok / sok сравнивали в средах с ампициллином и без него, не было различий в характере роста клеток. Это указывает на то, что локус hok / sok делает бактерии более восприимчивыми к доксициклину независимо от устойчивости к другим антибиотикам, предполагая, что опосредованное hok / sok повышение чувствительности к доксициклину происходит по механизму, который не является антагонистическим по отношению к механизму устойчивости к ампициллину.Следовательно, доксициклин может обеспечить терапевтическое преимущество против инфекций, вызываемых патогенами, содержащими локус hok / sok , особенно в случаях подозрения на устойчивость к бета-лактамам. Опять же, синергетическое действие доксициклина с ампициллином может представлять лучшую терапевтическую комбинацию в случаях, когда генетический состав клеток не может быть определен.

Наблюдаемый морфологический внешний вид клеток-хозяев hok / sok , обработанных доксициклином, предполагает, что локус hok / sok увеличивает чувствительность к доксициклину, индуцируя экспрессию токсина Hok и убивая клетки. Поскольку доксициклин ингибирует расщепление РНКазой III и процессинг дцРНК [23, 24], он также может ингибировать деградацию РНКазой III комплекса мРНК : Sok-РНК hok: Sok РНК, что в конечном итоге приводит к распаду лабильной Sok-РНК и высвобождению мРНК hok . для трансляции и последующего уничтожения клеток. Активация активности / самоуничтожения Hok-токсина в бактериях, содержащих плазмиды hok / sok , также была описана Фаридани и др. (2006) с использованием пептидных нуклеиновых кислот (PNA), нацеленных на Sok-РНК [22].Это предполагает, что антимикробные агенты, которые могут ингибировать деградацию РНКазы комплекса дцРНК hok / sok (такие как лиганды РНК), могут поэтому использоваться в качестве контрольной и терапевтической стратегии для уменьшения распространения плазмид множественной лекарственной устойчивости и индукции самоуничтожения. в клетках, тем самым повышая эффективность антибиотиков, как это проиллюстрировано здесь доксициклином. В будущем будет интересно посмотреть, как эти стратегии работают с клиническими изолятами.

Список литературы

1. 1.Erdmann VA, Barciszewska MZ, Hochberg A, de Groot N, Barciszewski J. Регуляторные РНК. Клеточные и молекулярные науки о жизни. 2001. 58 (7): 960–77. pmid: 11497242
2. 2. Waters LS, Storz G. Регуляторные РНК в бактериях. Клетка. 2009. 136 (4): 615–28. pmid: 19239884
3. 3. Вагнер Э.Г., Саймонс РВ. Контроль антисмысловой РНК в бактериях, фагах и плазмидах. Ежегодный обзор микробиологии. 1994. 48 (1): 713–42.
4. 4. Гердес К., Вагнер EGH. РНК-антитоксины.Текущее мнение в микробиологии. 2007. 10 (2): 117–24. pmid: 17376733
5. 5. Fozo EM, Hemm MR, Storz G. Малые токсичные белки и антисмысловые РНК, которые их подавляют. Обзоры микробиологии и молекулярной биологии. 2008. 72 (4): 579–89. pmid: 1

   21

6. 6. Фозо Е.М., Макарова К.С., Шабалина С.А., Ютин Н., Кунин Е. В., Сторц Г. Обилие систем токсин-антитоксин типа I у бактерий: поиски новых кандидатов и открытие новых семейств. Исследования нуклеиновых кислот.38 (11): 3743–59. pmid: 20156992
7. 7. Тистед Т., Гердес К. Механизм пост-сегрегационного уничтожения системой hok / sok плазмиды R1. Антисмысловая РНК Sok регулирует экспрессию гена hok косвенно через перекрывающийся ген mok. J Mol Biol. 1992. 223 (1): 41–54. pmid: 1370544
8. 8. Гердес К., Нильсен А., Торстед П., Вагнер Э. Г. Х. Механизм активации киллерного гена. Антисмысловое РНК-зависимое расщепление РНКазой III обеспечивает быстрый оборот стабильных эффекторных матричных РНК Hok, SrnB и PndA.Журнал молекулярной биологии. 1992. 226 (3): 637–49. pmid: 1380562
9. 9. K G, K H, OW C, A Lb-O. Трансляционный контроль и дифференциальный распад РНК являются ключевыми элементами, регулирующими постсегрегационную экспрессию киллерного белка, кодируемого локусом parB плазмиды R1. J Mol Biol. 1988; 203: 119. pmid: 2460630
10. 10. Гердес К., Тистед Т., Мартинуссен Дж. Механизм пост-сегрегационного уничтожения системой hok / sok плазмиды R1: антисмысловая РНК sok регулирует образование видов мРНК hok, коррелирующих с уничтожением свободных от плазмид клеток.Mol Microbiol. 1990; 4 (11): 1807–18. pmid: 1707122
11. 11. Гердес К., Гультяев А.П., Франч Т., Педерсен К., Миккельсен Н.Д. Запрограммированная гибель клеток, регулируемая антисмысловой РНК. Анну Рев Жене. 1997; 31: 1–31. pmid: 9442888
12. 12. Франч Т., Гультяев А.П., Гердес К. Запрограммированная гибель клеток hok / sok плазмиды R1: процессинг на 3′-конце мРНК hok запускает структурные перестройки, которые делают возможной трансляцию и связывание антисмысловой РНК. J Mol Biol. 1997. 273 (1): 38–51. pmid: 9367744
13. 13.K G, PB R, S. M. Уникальный тип функции поддержания плазмиды: постсегрегационное уничтожение свободных от плазмиды клеток. Proc Natl Acad Sci USA. 1986; 83: 3116. pmid: 3517851
14. 14. K G, JEL L, S. M. Для стабильного наследования плазмиды R1 требуются два разных локуса. J Bacteriol. 1985; 161: 292. pmid: 2981804
15. 15. Гердес К., Якобсен Дж. С., Фрэнч Т. Стабилизация плазмиды путем пост-сегрегационного уничтожения. Genet Eng (N Y). 1997; 19: 49–61.
16. 16. Chukwudi CU, Good L.Роль локуса hok / sok в ответе бактерий на стрессовые условия роста. Microb Pathog. 2015; 79: 70–9. pmid: 25625568
17. 17. Кэмпбелл К.С., Маллинз Р.Д. Визуализация in vivo расщепления плазмиды типа II: бактериальные актиновые филаменты проталкивают плазмиды. Журнал клеточной биологии. 2007. 179 (5): 1059–66. pmid: 18039937
18. 18. Blohm D, Goebel W. Рестрикционная карта плазмиды устойчивости к антибиотикам R1drd-19 и ее производных pKN102 (R1drd-19B2) и R1drd-16 для ферментов BamHI, HindIII, EcoRI и SalI.Молекулярная и общая генетика MGG. 1978. 167 (2): 119–27. pmid: 366381
19. 19. Clerget M, Chandler M, Caro L. Структура R1 drd19 : исправленная физическая карта плазмиды. Молекулярная и общая генетика MGG. 1981; 181 (2): 183–91. pmid: 6268938
20. 20. Mnif B, Vimont S, Boyd A, Bourit E, Picard B, Branger C и др. Молекулярная характеристика зависимых систем плазмид, кодирующих бета-лактамазы расширенного спектра в Escherichia coli. J Antimicrob Chemother.2010. 65 (8): 1599–603. pmid: 20507859
21. 21. Педерсен К., Гердес К. Множественные гены hok на хромосоме Escherichia coli. Молекулярная микробиология. 1999. 32 (5): 1090–102. pmid: 10361310
22. 22. Фаридани О.Р., Никравеш А., Пандей Д.П., Гердес К., Гуд Л. Конкурентное ингибирование естественных антисмысловых взаимодействий Sok-РНК активирует Hok-опосредованное уничтожение клеток в Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2006. 34 (20): 5915–22. pmid: 17065468
23. 23. Chukwudi CU, Good L.Взаимодействие тетрациклинов с двухцепочечными РНК случайной последовательности оснований: новые взгляды на мишень и механизм действия. J Antibiot (Токио). 2016; 69 (8): 622–30. pmid: 26786504
24. 24. Chukwudi CU, Good L. Доксициклин подавляет процессинг пре-рРНК и образование зрелой рРНК в E. coli. J Antibiot (Токио). 2019.
25. 25. Ebersbach G, Galli E, Moller-Jensen J, Lowe J, Gerdes K. Новый фактор деления клеток со спиральной спиралью ZapB стимулирует сборку Z-кольца и деление клеток.Mol Microbiol. 2008. 68 (3): 720–35. pmid: 18394147
26. 26. Goh S, Boberek JM, Nakashima N, Stach J, Good L. Анализ одновременных темпов роста и транскриптов выявил существенную строгость генов у Escherichia coli. PLoS ONE. 2009; 4 (6): e6061. pmid: 19557168
27. 27. Chukwudi CU, Good L. Фенотипические признаки ингибирования FtsZ при hok / sok-индуцированных изменениях роста бактерий и стрессовой реакции. Microb Pathog. 2018; 114: 393–401. pmid: 29233778
28. 28. Миллер С., Томсен Л. Э., Гаггеро С., Моссери Р., Ингмер Н., Коэн С. Н..Индукция SOS-ответа бета-лактамами и защита бактерий от летальности антибиотиков. Science, 2004. 305 (5690): с. 1629–31. pmid: 15308764
29. 29. Дорр Т., Льюис К. и Вулич М., SOS-ответ вызывает стойкость к фторхинолонам у Escherichia coli. PLoS Genet, 2009. 5 (12): с. e1000760. pmid: 20011100
30. 30. Гердес К. Локус parB (hok / sok) плазмиды R1: универсальная система стабилизации плазмиды. Nat Biotech. 1988. 6 (12): 1402–1405.

Растущее отчаяние в Камбодже на фоне изоляции от COVID | Новости пандемии коронавируса

Пномпень, Камбоджа — Ив Сованн находится в изоляции со своей семьей в столице Камбоджи Пномпене с 5 апреля, когда правительство ввело ряд строгих мер для сдерживания внезапной волны случаев коронавируса.

Семья 36-летнего мужчины из шести человек не имеет дохода.

Ее муж, учитель, потерял работу, когда год назад закрылась школа, в которой он работал.

Сованн поддерживает семью на плаву, работая помощником бухгалтера в местной транспортной компании.

«Мы не богаты. Живем впроголодь. Если бы мы были такими же богатыми, как другие, для нас было бы нормально провести год в карантине », — сказала она.

Отчаявшись поесть, на этой неделе она была среди группы людей в районе Пномпеня в Стуэнгмеанчи, которые взяли дело в свои руки.

«Мы видели, как некоторые люди получали что-то вроде рисовой лапши и рыбных консервов, но мы ничего не получили. Итак, мы вышли попросить нашу еду », — сказала она.