Архив категорий Разное

Также представляло интерес оценить, играют ли белки Pht роль (и) за пределами облегчения приобретения Zn ²⁺ через AdcAII. Для достижения этого был проведен конкурентный эксперимент с использованием штаммов Δ adcAII и Δ phtABDE Δ adcAII .Результаты соревновательного эксперимента представлены в. Мутант Δ adcAII был значительно более конкурентоспособным через 24 часа в легких, жидкости плеврального лаважа и крови, что указывает на то, что белки Pht действительно вносят вклад в патогенез независимо от AdcAII в этот момент времени. Однако через 48 часов этого не произошло. Интересно, что штамм, лишенный генов pht , был значительно более конкурентоспособным в жидкости для промывания носа в этот момент времени. Для справки, абсолютные числа КОЕ, извлеченные из всех экспериментов на животных моделях (в отличие от конкурентных индексов), показаны в.

In vivo конкуренция между мутантами Δ phtABDE Δ adcAII и Δ adcAII . На каждый момент времени использовали восемь мышей. Результаты представлены в виде средних (± SEM) показателей конкурентоспособности (отношение бактерий Δ phtABDE Δ adcAII к бактериям Δ adcAII с поправкой на входное соотношение). Средний индекс конкурентоспособности сравнивался со средним теоретическим значением 1 (пунктирная линия) с помощью тестов t для одной выборки, и статистическая значимость указывалась следующим образом: *, P <0.05; **, P <0,01; ***, P <0,001; нс, не имеет значения.

Количество КОЕ, выделенных в экспериментах на животных моделях. Значения показаны как средние плюс SEM.

ОБСУЖДЕНИЕ

Белки Pht представляют собой важное семейство поверхностно-ассоциированных факторов вирулентности, которые могут быть использованы в новых вакцинах на основе пневмококковых белков (13, –16). В этой работе мы исследовали, действуют ли четыре белка Pht избыточно, способствуя гомеостазу Zn ²⁺ .В условиях низкой доступности Zn ²⁺ присутствие любого из четырех белков обеспечивало лучший рост и увеличивало внутриклеточное накопление Zn ²⁺ по сравнению с тем, когда все четыре отсутствовали. Эти данные демонстрируют, что все четыре белка Pht способствуют усвоению пневмококком Zn ²⁺ с помощью AdcAII. Примечательно, что они также проясняют дебаты по поводу вклада PhtE, наиболее расходящегося члена семейства с точки зрения первичной структуры (32% идентичности с другими членами семьи по сравнению с более чем 60% идентичности, разделяемой между PhtA, PhtB и PhtD [ 2]), к гомеостазу Zn ²⁺ .Действительно, штамм Δ phtABD Δ adcA показал наибольшее накопление Zn ²⁺ в цельных клетках среди штаммов, продуцирующих только один белок Pht. Однако, несмотря на это наблюдение, эксперименты по выращиванию не выявили каких-либо устойчивых различий между четырьмя мутантными штаммами с одним геном pht . Таким образом, эти данные показывают, что каждый белок Pht обладает сходной способностью облегчать импорт Zn ²⁺ через AdcAII. Мы также наблюдали, что поверхностное прикрепление необходимо для белков, чтобы играть эту роль, тем самым исключая возможность подобного сидерофору механизма рекрутирования Zn ²⁺ .Кроме того, наши данные также показывают, что белки Pht не способствуют защите от внеклеточного стресса Zn ²⁺ .

Недавнее исследование пришло к выводу, что передача Zn ²⁺ от PhtD к AdcAII включает прямое взаимодействие (12). Поскольку сайт связывания с металлом AdcAII скрыт на ~ 10-15 Å под поверхностью белка (23), свободные ионы Zn ²⁺ не могут быть легко захвачены этим сайтом. Прямое взаимодействие с загруженным Zn ²⁺ белком Pht может сделать возможным связывание иона металла за счет индукции конформационного изменения в AdcAII, чтобы представить Zn ²⁺ на сайте связывания металла.Это взаимодействие может играть роль, аналогичную предполагаемому захвату Zn ²⁺ в AdcA его ZinT-подобным доменом и областью петли, богатой гистидином (9). Хотя возможность прямого взаимодействия AdcAII с PhtA, PhtB и PhtE не исследовалась, мы можем предположить, что они также будут действовать для доставки Zn ²⁺ в AdcAII таким прямым образом. Предположительно, это будет преимущественно задействовать высококонсервативные N-концы белков Pht, которые также находятся ближе к клеточной мембране (и, следовательно, к AdcAII), чем более открытые на поверхности С-концевые области.Однако эксперименты по иммунопреципитации, описанные Bersch et al. (12) использовали очищенные клеточные мембраны, которые могут неточно отражать условия, обнаруженные в интактных клетках; кроме того, стабильный комплекс между PhtD и AdcAII не может быть обнаружен с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) в их исследовании (12). Предыдущие доказательства перекрестного связывания, якобы показывающие, что два очищенных белка взаимодействуют друг с другом in vitro , также были несколько слабыми, поскольку только небольшая часть очищенного PhtD стала ассоциироваться с AdcAII, несмотря на то, что последний присутствовал в 8-кратном размере. молярный избыток (6).Следовательно, нельзя сбрасывать со счетов возможность того, что перенос Zn ²⁺ в AdcAII белками Pht может происходить в отсутствие физического взаимодействия. Перенос Zn ²⁺ в AdcAII может вместо этого просто зависеть от белков Pht, увеличивающих локальную концентрацию металла около клеточной мембраны, тем самым увеличивая частоту встречи металла с AdcAII. Потребуются дальнейшие экспериментальные исследования, чтобы различать прямые и непрямые модели доставки Zn ²⁺ к AdcAII белками Pht.

Предыдущие исследования либо указывали на полную избыточность среди белков Pht (3, 17), либо наблюдали фенотипическое влияние, когда был удален только один ген pht , что согласуется с отсутствием избыточности белков (4). В этом исследовании мы наблюдали частичную избыточность, при которой штаммы, продуцирующие только один белок Pht, демонстрировали фенотип роста и уровни накопления Zn ²⁺ , промежуточные между уровнями штаммов, продуцирующих все четыре белка Pht или не продуцирующих белок Pht. Проще говоря, с точки зрения приобретения Zn ²⁺ , производство одного белка Pht было лучше, чем его отсутствия, но не так эффективно, как получение всех четырех.Таким образом, белки Pht имеют перекрывающуюся функциональность, и хотя данные отражают, что все они помогают в приобретении Zn ²⁺ через AdcAII, они не являются избыточными в том смысле, что их можно обойтись, поскольку удаление трех из четырех генов привело к к фитнесу стоили как in vitro , так и in vivo .

Это также отражалось в наблюдаемых уровнях экспрессии каждого из белков Pht, которые в целом увеличивались пропорционально серьезности проблемы получения достаточного количества Zn ²⁺ , испытываемой конкретным исследуемым штаммом. .Таким образом, штаммы, в которых отсутствовали три из четырех генов pht (а также adcA ), показали самые высокие уровни экспрессии pht при выращивании в CDM-TPEN. Однако наблюдались различия между белками Pht в отношении того, когда их экспрессия становилась максимально дерепрессированной. Экспрессия белков PhtB и PhtE, по-видимому, полностью дерепрессирована при ограничении Zn ²⁺ , независимо от того, присутствовали ли другие гены pht . Напротив, экспрессия PhtA и PhtD демонстрировала дальнейшую дерепрессию в отсутствие других белков Pht.Таким образом, существуют различия в степени регуляции генов pht в ответ на ограничение Zn ²⁺ и в способности пневмококка приобретать его. Это может указывать на то, что наличие четырех генов pht может быть полезным для приобретения пневмококком Zn ²⁺ , позволяя несколько «слоистых» повышений экспрессии белков, необходимых для этого процесса, в зависимости от точной степени сложности, с которой сталкиваются бактерии. в приобретении достаточного количества металла.Это наблюдение также отражает наши предыдущие данные о том, что кратное изменение экспрессии AdcAII больше, чем у AdcA, когда сравниваются условия с ограничением Zn ²⁺ и полным Zn ²⁺ . Это открытие привело к выводу, что роль AdcA заключается в обеспечении базового уровня рекрутирования Zn ²⁺ , а AdcAII обеспечивает большее усиление захвата Zn ²⁺ , когда иона особенно мало (9). Интересно отметить, что PhtE показал более сильное изменение уровней белка, чем другие белки Pht, и это может быть связано с несколько повышенным накоплением Zn ²⁺ в «только PhtE» Δ phtABD Δ adcA Мутант по сравнению с другими мутантами, лишенными трех из четырех генов pht .Присутствие шести мотивов гистидиновой триады в PhtE, что на один больше, чем обнаружено в трех других пневмококковых белках Pht, также может способствовать увеличению накопления Zn ²⁺ у этого мутанта. Кроме того, эти результаты дополнительно подтверждают представление о перекрывающейся функциональности белков Pht, поскольку они предполагают, что нарушение роста штаммов, лишенных трех генов pht , происходит из-за более низкого общего количества белка Pht, экспрессируемого в каждом штамме. Интересно, что степень перекрестной реактивности наблюдалась в Вестерн-блоттинге между различными членами семейства Pht для каждой антисыворотки (антисыворотки были созданы против отдельных белков Pht [16]), как наблюдалось ранее (13).Поэтому иммунизации только одним белком Pht может быть достаточно для индукции защитного иммунитета, нацеленного на нескольких членов семейства белков.

Результаты экспериментов на животных согласуются с выводом из работы in vitro о том, что все Pht-белки способны выполнять одну и ту же роль в поглощении Zn ²⁺ , но они не являются незаменимыми без нарушения приспособленности. Стоимость. Явное ослабление пригодности in vivo наблюдалось для штаммов, продуцирующих только PhtA или PhtD, по сравнению с контрольным штаммом Δ adcA (), что согласуется с продуцированием более чем одного белка Pht, благоприятного для пневмококкового патогенеза.Мы также наблюдали, что в отсутствие AdcAII белки Pht все еще вносят вклад в патогенез через 24 часа после инфицирования. Наши эксперименты до сих пор ясно продемонстрировали роль белков Pht в содействии приобретению Zn ²⁺ с помощью AdcAII, но окончательно не определили, вносят ли они также вклад в функциональность AdcA; такая роль могла бы объяснить наблюдаемые здесь результаты. Альтернативно, предполагаемая адгезия и свойства связывания фактора H белков Pht или комбинация всех этих ролей могут объяснять этот независимый от AdcAII вклад в патогенез (3, –5).Обнаружение того факта, что мутант Δ phtABDE Δ adcAII был более конкурентоспособным при смывании носа через 48 часов, также может быть объяснено тем, что белки Pht играют роль в прикреплении к поверхностям хозяина, поскольку можно ожидать, что этот штамм будет прикрепляться более слабо. чем мутант Δ adcAII и, таким образом, будет чрезмерно представлен в образце смывки для носа.

В обеих сериях экспериментов на животных можно видеть, что в большинстве случаев мутанты, лишенные генов pht , были значительно аттенуированы в различных нишах через 24 часа после заражения, но они выздоравливали через 48 часов.Это означает, что проблема получения достаточного количества Zn ²⁺ является более серьезной для пневмококка на ранних стадиях инфекции. Действительно, это подтверждается нашим предыдущим наблюдением, что одиночные мутанты, лишенные adcA или adcAII , ослаблены по сравнению с диким типом в носоглотке через 24, но не через 48 часов после инфицирования (9). Мы можем предположить, что массив Zn ²⁺ -связывающих белков, используемый S. pneumoniae , отражает серьезность этой проблемы.Пневмококк необычен среди патогенных бактерий, поражающих носоглотку, поскольку он обладает двумя специфическими для Zn ²⁺ SBP. Они, в сочетании с белками Pht, могут обеспечить преимущество перед другими микроорганизмами, с которыми пневмококку приходится конкурировать за колонизацию носоглотки, поскольку они могут обеспечить более эффективное получение ограниченных количеств доступного Zn ²⁺ . Ранее мы показали, что через 48 часов после инфицирования уровни Zn ²⁺ в организме хозяина повышаются и что это может быть иммунный механизм, используемый для воздействия на пневмококк токсичного избытка Zn ²⁺ (20).Высвобождение Zn ²⁺ согласуется с восстановлением (с точки зрения конкурентных индексов) штаммов с дефицитом поглощения Zn ²⁺ в этот момент времени, наблюдаемого в этом исследовании, поскольку увеличение количества металла означает его приобретение больше не будет представлять серьезной проблемы. Кроме того, такое восстановление для штаммов, лишенных генов pht , также согласуется с белками Pht, не способствующими защите от токсичности Zn ²⁺ , как мы обнаружили в случае in vitro .

У других стрептококков гомологи adcAII часто обнаруживаются только с одним геном pht в геноме (24). Учитывая, что мы показали, что все четыре белка Pht из S. pneumoniae имеют перекрывающиеся функциональные возможности в отношении помощи в доставке Zn ²⁺ в AdcAII, неясно, каково преимущество получения четырех таких белков по сравнению с возможно, просто производя большее количество одного белка Pht. Потребуются дальнейшие исследования, чтобы изучить, действительно ли каждый белок Pht вносит определенный вклад в приспособленность к пневмококкам, либо с точки зрения поглощения Zn ²⁺ , либо с точки зрения альтернативной роли вирулентности.Такое понимание будет иметь решающее значение для руководства будущей разработкой вакцины, нацеленной на это интригующее семейство поверхностных белков.

БЛАГОДАРНОСТИ

Эта работа была поддержана Национальным советом по здравоохранению и медицинским исследованиям (NHMRC) (программный грант 565526; JCP и проектный грант 1022240 для CAM) и Австралийским исследовательским советом (гранты на открытие проекта DP120101432; и DP120103957 для JCP и САМ соответственно). J.C.P. является старшим научным сотрудником NHMRC.

Сноски

Опубликованы досрочно 28 июля 2014 г.

ССЫЛКИ

Реферат

Цель

Беременности, осложненные ЛГТ, являются серьезной проблемой для акушеров из-за высокого риска осложнений у матери и плода. Целью исследования было представить наши материнско-фетальные исходы у беременных с легочной гипертензией.

Материалы и методы

Это исследование было выполнено с использованием данных, извлеченных из медицинских карт 23 беременностей 18 пациенток с ПГТ, находившихся под наблюдением в отделении акушерства и гинекологии.

Результаты

Средний возраст составил 27,09 ± 6,97 (диапазон: 14–38) лет. Наиболее частыми патологиями сердца у матери были пороки клапанов сердца (митральная или аортальная недостаточность) (n = 4), дефект межпредсердной перегородки (n = 3), митральный стеноз (n = 3), дефект межжелудочковой перегородки (n = 2) и аритмия ( п = 2). Кесарево сечение и нормальные вагинальные роды были выполнены при 13 и 7 родах соответственно. Лечебная дилатация и выскабливание выполнены 3 пациентам. Преждевременные роды произошли при 4 беременностях, 2 случая задержки внутриутробного развития, 1 преэклампсия и 2 отека легких у матери.Одной пациентке через 5 дней после родов была проведена повторная лапаротомия из-за гематомы матки. Всего родилось 20 новорожденных (14 девочек, 6 мальчиков). Большинство осложнений было замечено в продвинутых классах PHT.

Заключение

Уход за беременными с ПГТ требует хорошо спланированного, мультидисциплинарного подхода с упором на тщательный мониторинг до, во время и после родов. Такой подход может способствовать снижению неблагоприятных исходов для матери и плода.

Ключевые слова

Кардиология

Задержка внутриутробного развития

Материнская смертность

Легочная гипертензия

Беременность

Перинатальная смертность

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

© 2017 Тайваньская ассоциация акушерства.Издательские услуги Elsevier BV

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Получение ежемесячного и межгодового общего уровня pH (pHT) на шельфе Восточно-Китайского моря с помощью искусственной нейронной сети: ANN-pHT-v1

Alin, SR, Feely , Р. А., Диксон, А. Г., Эрнандес-Айон, Дж. М., Джуранек, Л. В., Оман, М. Д., Герике, Р.: Надежный эмпирический анализ соотношения для оценки карбонатной системы в южной Калифорнии Текущая система и приложение к гидрографическим круизным данным CalCOFI (2005–2011), Дж.Geophys. Res., 117, C05033, https://doi.org/10.1029/2011JC007511, 2012.

Bai, Y., Cai, WJ, He, XQ, Zhai, WD, Pan, D., Dai, MH, и Ага. С .: Механистический полуаналитический метод дистанционного зондирования морской поверхности. p CO ₂ в прибрежных океанах с преобладанием рек: тематическое исследование с Востока Китайское море, J. Geophys. Res.-Ocean., 120, 2331–2349, https://doi.org/10.1002/2014JC010632, 2015.

Бейтс, Н. Р., Астор, Ю. М., Черч, М. Дж., Карри, К., Дор, Дж.E., Гонсалес-Давила, М., Лоренцони, Л., Мюллер-Каргер, Ф., Олафссон, Дж., и Сантана-Касиано, Дж. М .: Взгляд временного ряда на изменение химического состава океана. из-за поглощения океаном антропогенного CO ₂ и закисления океана, Oceanography, 27, 126–141, https://doi.org/10.5670/oceanog.2014.16, 2014.

Bostock, H.C., Mikaloff Fletcher, S.E., и Williams, M.J.M .: Оценка карбонатные параметры по гидрографическим данным для среднего и глубинного воды океанов Южного полушария, Biogeosciences, 10, 6199–6213, https: // doi.org / 10.5194 / bg-10-6199-2013, 2013.

Cai, W. J., Hu, X. P., Huang W. J., Murrell, M. C., Lehrter, J. C., Lohrenz, С. Е., Чжоу, В. К., Чжай, В. Д., Холлибо, Дж. Т., Ван, Ю. К., Чжао, П. С., Го, X. Х., Гундерсен, К., Дай, М. Х. и Гонг, Г. С. Подкисление подземные прибрежные воды, усиленные эвтрофикацией, Nat. Геоши., 4, 766–770, https://doi.org/10.1038/NGEO1297, 2011.

Цао, З.М., Дай, М.Х., Чжэн, Н., Ван, Д., Ли, К., Чжай, В.Д., Мэн, Ф . Ф. и Ган Дж.П .: Динамика карбонатной системы на крупном континенте. шельфовая система под воздействием как речного шлейфа, так и прибрежных апвеллинг, J. Geophys. Res., 116, G02010, https://doi.org/10.1029/2010JG001596, 2011.

Картер, Б. Р., Уильямс, Н. Л., Грей, А. Р. и Фили, Р. А .: Локально. интерполированная регрессия щелочности для оценки общей щелочности, Лимнол. Oceanogr.-Meth., 14, 268–277, https://doi.org/10.1002/lom3.10087, 2016.

Картер, Б. Р., Фили, Р. А., Уильямс, Н.Л., Диксон, А. Г., Фонг, М. Б., и Такешита, Ю.: Обновленные методы для глобальных локально интерполированных оценка щелочности, pH и нитратов, Лимнол. Океаногр-мет., 16, 119–131, https://doi.org/10.1002/lom3.10232, 2018.

Chen, C. S., Xue, P. F., Ding, P. X., Beardsley, R. C., Xu, Q. C., Mao, X. М., Гао, Г. П., Ци, Дж. Х., Ли, Ч. Ю., Линь, Х. К., Коулз, Г., и Ши, М. К .: Физические механизмы для морского отряда Чанцзян Разбавленная вода Восточно-Китайского моря, J. Geophys.Res., 113, C02002, https://doi.org/10.1029/2006JC003994, 2008.

Чен С.Л. и Ху К.М .: Оценка солености морской поверхности в северной Мексиканский залив по данным спутниковых измерений цвета океана, Remote Sens. Environ., 201, 115–132, https://doi.org/10.1016/j.rse.2017.09.004, 2017.

Chou, WC, Gong, GC, Sheu, DD, Hung, CC и Tseng, TF: Распределение параметров химического состава углерода на поверхности Восточно-Китайского моря летом 2007 г. J. Geophys. Res., 114, C07026, https: // doi.org / 10.1029 / 2008JC005128, 2009.

Chou, W. C., Gong, G. C., Tseng, C. M., Sheu, D. D., Hung, C. C., Chang, L. П., Ван Л. В .: Карбонатная система в Восточно-Китайском море зимой, март. Chem., 123, 44–55, https://doi.org/10.1016/j.marchem.2010.09.004, 2011.

Чжоу, В. К., Гонг, Г. К., Хунг, К. С., и Ву, Ю. Х .: Карбонатный минерал. состояния насыщения в Восточно-Китайском море: настоящее и будущее сценарии, Биогеонаука, 10, 6453–6467, https://doi.org/10.5194/bg-10-6453-2013, 2013.

Чиа, П., Сабин, К., Бала, Г., Бопп, Л., Бровкин, В., Канаделл, Дж., Чхабра, А., ДеФрис, Р., Галлоуэй, Дж., Хейманн, М., Джонс, К., Ле Quéré, C., Myneni, R. B., Piao, S., and Thornton, P .: Carbon and Другие биогеохимические циклы, в: Изменение климата 2013: Физическая наука Основа. Вклад Рабочей группы I в Пятый отчет об оценке Межправительственная группа экспертов по изменению климата, под редакцией: Stocker, T. F., Qin, D., Платтнер, Г. К., Тиньор, М., Аллен, С. К., Бошунг, Дж., Науэльс, А., Ся, Й., Бекс, В., и Мидгли, П. М., Cambridge University Press, Кембридж, Соединенное Королевство и Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 465–570, 2014.

Дай, А. и Тренберт, К. Э .: Оценки расхода пресной воды из континенты: широтные и сезонные вариации, J. Hydrometeorol., 3, 660–687, 2002.

Дор, Дж., Лукас, Р., Сэдлер, Д., Черч, М., и Карл, Д.: Физические и биогеохимическая модуляция закисления океана в центральной части Севера Pacific, P. Natl. Акад. Sci. США, 106, 12235–12240, 2009.

Фридрих, Т. и Ошлис, А .: Оценки севера на основе нейронных сетей. Поверхность Атлантики p CO ₂ по спутниковым данным: методологическое исследование, J. Geophys. Res., 114, C03020, https://doi.org/10.1029/2007JC004646, 2009.

Ge, JZ, Ding, PX, Chen, CS, Hu, S., Fu, G., and Wu, LY: An интегрированная модельная система Восточно-Китайского моря и Чанцзянского лимана с целью разрешение многомасштабной динамики региона – шельф – эстуарий, Ocean Dynam., 63, 881–900, https: // doi.org / 10.1007 / s10236-013-0631-3, 2013.

Gong, G. C., Liu, K. K., Chiang, K. P., Hsiung, T. M., Chang, J., Chen, C. Ч., Хунг, Ч. К., Чжоу, В. Ч., Чанг, Ч. Ч., Чен, Х. Й., Шиа, Ф. К., Цай, A. Y., Hsieh, C. H., Shiao, J. C., Tseng, C. M., Hsu, S. C., Lee, H. J., Ли М.А., Линь И.И. и Цай Ф.: наводнения на реке Янцзы усиливают прибрежные биомасса фитопланктона океана и потенциальное производство рыбы, Geophys. Res. Lett., 38, L13603, https://doi.org/10.1029/2011GL047519, 2011.

Гонсалес-Давила, М., Сантана-Касиано, Дж. М., Руэда, М. Дж., И Ллинас, О.: Распределение параметров карбонатной системы в водной толще на участке ESTOC с 1995 по 2004 г., Biogeosciences, 7, 3067–3081, https://doi.org/ 10.5194 / bg-7-3067-2010, 2010.

Гуо, XH, Zhai, WD, Dai, MH, Zhang, C., Bai, Y., Xu, Y., Li, Q., и Ван, Г. З .: Воздушно-морские потоки CO ₂ в Восточно-Китайском море на основе многолетние текущие наблюдения, Biogeosciences, 12, 5495–5514, https://doi.org/10.5194/bg-12-5495-2015, 2015.

Итикава, Х. и Бердсли, Р.К .: Современная система в Желтом и Восточном регионах Китайские моря, J. Oceanogr., 58, 77–92, https://doi.org/10.1023/A:1015876701363, 2002.

Исобе, А. и Мацуно, Т .: Процесс переноса питательных веществ на большие расстояния в Шлейф реки Чанцзян на шельфе Восточно-Китайского моря летом, J. Geophys. Res.-Ocean., 113, C04006, https://doi.org/10.1029/2007JC004248, 2008.

Juranek, L. W., Feely, R.A., Gilbert, D., Freeland, H., and Miller, L.A .: Оценка pH и насыщенности арагонита в реальном времени с Argo поплавки для профилирования: перспективы автономной стратегии наблюдения за углеродом, Geophys.Res. Lett., 38, L17603, https://doi.org/10.1029/2011GL048580, 2011.

Laruelle, G. G., Landschützer, P., Gruber, N., Tison, J. L., Delille, Б. и Ренье П.: Ежемесячно в глобальном масштабе с высоким разрешением стр. CO ₂ климатология для прибрежного океана, полученного с помощью интерполяции нейронной сети, Biogeosciences, 14, 4545–4561, https://doi.org/10.5194/bg-14-4545-2017, 2017.

Лаувсет, С.К., Грубер, Н., Ландшютцер, П., Ольсен, А. и Тджипутра, Дж .: Тенденции и движущие силы глобального pH поверхностного океана за последние 3 десятилетия, Биогеонауки, 12, 1285–1298, https: // doi.org / 10.5194 / bg-12-1285-2015, 2015.

Le Quéré, C., Andrew, RM, Friedlingstein, P., Sitch, S., Hauck, J., Pongratz, J., Pickers, PA, Корсбаккен, Дж. И., Питерс, Г. П., Канаделл, Дж. Г., Арнет, А., Арора, В. К., Барберо, Л., Бастос, А., Бопп, Л., Шевалье, Ф., Чини, Л. П., Киаис, П., Дони, С.К., Гкрицалис, Т., Голл, Д.С., Харрис, И., Хаверд, В., Хоффман, Ф.М., Хоппема, М., Хоутон, Р.А., Хертт, Г., Ильина, Т., Джайн, А.К., Йоханнесен, Т., Джонс, К.Д., Като, Э., Килинг, Р.Ф., Гольдевийк, К.К., Ландшютцер, П., Лефевр, Н., Линерт, С., Лю, З., Ломбардоцци, Д., Мецл, Н., Манро, Д.Р., Набель, JEMS, Накаока, С., Нил, К., Олсен, А., Оно, Т., Патра, П., Перегон, А., Петерс, В., Пейлин, П., Пфейл, Б., Пьеро, Д., Поултер, Б., Редер, Г., Респланди, Л., Робертсон, Э., Роше, М., Роденбек, К., Шустер, У., Швингер, Дж., Сефериан, Р., Скельван, И., Штайнхофф, Т., Саттон, А., Танс, П.П., Тиан, Х., Тилбрук, Б., Тубиелло, Ф.Н., ван дер Лаан-Луйкс, ИТ, ван дер Верф, Г.Р., Виови, Н., Уокер, А. П., Уилтшир, А. Дж., Райт, Р., Зейле, С., и Чжэн, Б.: Глобальный углеродный бюджет 2018, Earth Syst. Sci. Data, 10, 2141–2194, https://doi.org/10.5194/essd-10-2141-2018, 2018.

Li, X .: Исходный код модели ИНС для оценки pH, Zenodo, https: / /doi.org/10.5281/zenodo.3519219, последний доступ: 25 октября 2019 г.

Li, X .: Среднемесячные входные переменные (T, S, DO, N, P, Si) и полученный pH, Zenodo, https://doi.org/10.5281/zenodo.3519236, последний доступ: 25 Октябрь 2019 г.

Li, X .: Производительность приложения модели ИНС на полке ECS, Zenodo, https://doi.org/10.5281/zenodo.3491747, последний доступ: 16 октября 2019 г.c.

Li, X .: Ежемесячное распределение поверхностного pH на шельфе Восточно-Китайского моря с 2000 по 2016 год, Zenodo, https://doi.org/10.5281/zenodo.2672943, последний доступ: 7 мая 2019 г.d.

Li, X .: Распределение профиля pH на 31N на шельфе Восточно-Китайского моря с 2000 по 2016 год, Zenodo, https://doi.org/10.5281/zenodo.2672929, последний доступ: 7 мая 2019e.

Ли, Х. Дж. И Чо, К. Х .: Сезонные схемы циркуляции Желтых и Восточно-Китайские моря, полученные на основе спутниковых траекторий дрифтеров и гидрографические наблюдения, Прог. Океаногр., 146, 121–141, https://doi.org/10.1016/j.pocean.2016.06.004, 2016.

Люкер Т.Дж., Диксон А.Г. и Килинг К.Д .: Оушен стр. CO ₂ рассчитывается на основе растворенного неорганического углерода, щелочности и уравнений для K ₁ и K ₂ : Подтверждение на основе лабораторных измерений CO ₂ в газе и морской воде при равновесии, мар.Chem., 70, 105–119, https://doi.org/10.1016/S0304-4203(00)00022-0, 2000.

Мур-Мали, Б. Л., Аллен, С. Э., Иэнсон, Д.: Местные межгодовые изменчивость приповерхностного pH и Ω _A в проливе Джорджия, J. Geophys. Res.-Ocean., 121, 1600–1625, https://doi.org/10.1002/2015JC011118, 2016.

Олден, Дж. Д. и Джексон, Д. А. Освещение «черного ящика»: a рандомизационный подход для понимания вклада переменных в искусственные нейронные сети, Ecol.Модель, 154, 135–150, https://doi.org/10.1016/S0304-3800(02)00064-9, 2002.

Олден, Дж. Д., Джой, М. К., и Смерть, Р. Г.: точное сравнение методы количественной оценки важности переменных в искусственных нейронных сетях с использованием смоделированных данных, Ecol. Модель, 178, 389–397, https://doi.org/10.1016/j.ecolmodel.2004.03.013, 2004.

Палац, А. П., Джон, М. А. С., Брюин, Р. Дж. У., Хирата, Т., и Грегг, В. W .: Распределение функциональных типов фитопланктона в высоконитратовом, воды с низким содержанием хлорофилла в новой диагностической модели экологических индикаторов, Биогеонауки, 10, 8103–8157, https: // doi.org / 10.5194 / bgd-10-8103-2013, 2013.

Цюй, Б. X., Сун, Дж. М., Юань, Х. М., Ли, X. Г., Ли, Н., Дуань, Л. К., Чен, X., и Lu, X .: Летняя динамика химического состава карбонатов в южной части желтого цвета. Море и Восточно-Китайское море: региональные различия и меры контроля, продолжение. Полка Res, 111, 250–261, https://doi.org/10.1016/j.csr.2015.08.017, 2015.

Raitsos, D. E., Lavender, S. J., Maravelias, C. D., Haralabous, J., Ричардсон А. Дж. И Рид П. К. Идентификация четырех фитопланктонов. функциональные типы из космоса: экологический подход, Лимнол.Океаногр., 53, 605–613, https://doi.org/10.4319/lo.2008.53.2.0605, 2008.

Реджиани, Э. Р., Кинг, А. Л., Норли, М., Жаккар, П., Соренсен, К., и Беллерби, Р. Дж. Дж .: Мониторинг pH смешанного слоя с помощью FerryBox. Норвежское прибрежное течение, J. Mar. Syst., 162, 29–36, https://doi.org/10.1016/j.jmarsys.2016.03.017, 2016.

Сабин, К. Л., Фили, Р. А., Грубер, Н., Ки, Р. М., Ли, К., Буллистер, Дж. Л., Ваннинкхоф, Р., Вонг, К. С., Уоллес, Д. В. Р., Тилбрук, Б., Миллеро, Ф.Дж., Пэн, Т. Х., Козырь, А., Оно, Т., и Риос, А. Ф .: Океанический сток для антропогенный CO ₂ , Science, 305, 367–371, 2004.

Sasse, T. P., McNeil, B. I., and Abramowitz, G .: новый метод для диагностика сезонной и межгодовой динамики углерода поверхностного океана от данные о бутылках с использованием нейронных сетей, Biogeosciences, 10, 4319–4340, https://doi.org/10.5194/bg-10-4319-2013, 2013.

Sauzède, R., Claustre, H., Jamet, C., Uitz, J., Ras, J., Mignot, A ., а также Д’Ортенцио, Ф.: Получение вертикального распределения хлорофилла-а концентрация и состав сообщества фитопланктона in situ профили флуоресценции: метод, основанный на нейронной сети с потенциалом приложения глобального масштаба, J. ​​Geophys. Рес.-Океан., 120, 451–470, https://doi.org/10.1002/2014JC010355, 2015.

Sauzède, R., Claustre, H., Uitz, J., Jamet, C., Dall’Olmo, G., Д’Ортенцио Ф., Джентили Б., Пото А. и Шмехтиг К. сетевой метод объединения цвета океана и данных Арго для увеличения поверхности биооптические свойства до глубины: восстановление обратного рассеяния частиц коэффициент, Дж.Geophys. Res.-Ocean., 121, 2552–2571, https://doi.org/10.1002/2015JC011408, 2016.

Sauzède, R., Bittig, H.C., Claustre, H., de Fommervault, O.P., Гаттузо, Дж. П., Лежандр, Л., Джонсон, К. С .: Оценки водяного столба. Концентрации питательных веществ и параметры карбонатной системы в Мировом океане: Новый подход на основе нейронных сетей, Front. Мар. Наук, 4, 128, https://doi.org/10.3389/fmars.2017.00128, 2017.

Шим, Дж. Х., Ким, Д., Кан, Ю. К., Ли, Дж. Х., Янг, С.Т., и Ким, К. Х .: Сезонные колебания p CO ₂ и его контролирующие факторы на поверхности морская вода северной части Восточно-Китайского моря, конт. Полка Рес., 27, 2623–2636, г. https://doi.org/10.1016/j.csr.2007.07.005, 2007.

Тамура С. и Татейши М .: Возможности четырехуровневой прямой связи Нейронная сеть: четыре уровня против трех, транзакции IEEE на нейронной сети Сети, 8, 251–255, https://doi.org/10.1109/72.557662, 1997.

Ууситало, Л .: Преимущества и проблемы байесовских сетей в экологическое моделирование, Экол.Модель, 203, 312–318, https://doi.org/10.1016/j.ecolmodel.2006.11.033, 2007.

Вело, А., Перес, Ф. Ф., Танхуа, Т., Гилкото, М., Риос, А. Ф., и Ки, Р. М .: Оценка общей щелочности с использованием MLR и нейронной сети. методы, J. Mar. Syst., 111/112, 11–18, https://doi.org/10.1016/j.jmarsys.2012.09.002, 2013.

Уильямс, Н. Л., Джуранек, Л. В., Джонсон, К. С., Фили, Р. А., Райзер, С. К., Талли, Л. Д., Рассел, Дж. Л., Сармиенто, Дж. Л. и Ваннинкхоф, Р.: Эмпирические алгоритмы оценки pH водной толщи Южного океана, Geophys.Res. Lett., 43, 3415–3422, https://doi.org/10.1002/2016GL068539, 2016.

Вуттон, Дж. Т. и Пфистер, К. А.: Измерения углеродной системы и потенциал Климатические факторы в условиях быстро падающего pH океана, PLoS ONE, 7, e53396, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0053396, 2012.

Вуттон, Дж. Т., Пфистер, К. А., и Форестер, Дж. Д .: Динамические модели и экологические последствия снижения pH океана в многолетнем набор данных, P. Natl. Акад. Sci. США, 105, 18848–18853, https: // doi.org / 10.1073 / pnas.0810079105, 2008.

Чжай, В. Д. и Дай, М. Х .: О сезонных колебаниях CO между воздухом и морем ₂ потоки во внешнем устье Чанцзян (река Янцзы), Восточно-Китайское море, март. Chem., 117, 2–10, https://doi.org/10.1016/j.marchem.2009.02.008, 2009.

Zhai, WD, Zhao, HD, Zheng, N., and Xu, Y .: Подкисление берегов в летние донные бедные кислородом воды в северо-западной и северной части Бохайского моря от С июня по август 2011 г., Чин. Sci. Бюл., 57, 1062–1068, https: // doi.org / 10.1007 / s11434-011-4949-2, 2012.

Zhai, W. D., Zheng, N., Huo, C., Xu, Y., Zhao, H. D., Li, Y. W., Zang, K. П., Ван, Дж. Й. и Сюй, X. М.: Подземный pH и состояние карбонатной насыщенности арагонита на китайской стороне Северного Желтого моря: сезонные вариации и контроль, Биогеонаука, 11, 1103–1123, https://doi.org/10.5194/bg-11-1103-2014, 2014.

Чжан Г., Чжан Дж. и Лю С. М .: Характеристика питательных веществ в атмосферные влажные и сухие осаждения, наблюдаемые на двух участках мониторинга в течение Желтое море и Восточно-Китайское море, Дж.Атмос. Chem., 57, 41–57, https://doi.org/10.1007/s10874-007-9060-3, 2007.

Заболевание околощитовидной железы | Сидарс-Синай

Обзор

Паращитовидные железы отличаются от щитовидной железы, хотя названия похожи. Четыре паращитовидных железы обычно находятся на задней стороне щитовидной железы, но могут располагаться вокруг челюсти или шеи.

Паращитовидные железы выделяют гормон, называемый PHT.PHT регулирует обмен кальция между кровью и костями. Когда паращитовидная железа чрезмерно активна, из костей выводится слишком много кальция. Это называется гиперпаратиреозом или заболеванием паращитовидных желез.

Костям для прочности нужен кальций. Мозгу необходим кальций, чтобы думать, а мышцам — кальций, чтобы сокращаться. Недостаток кальция в костях вызывает серьезное заболевание, называемое остеопорозом (болезнь хрупкости костей). Избыток кальция в крови увеличивает риск инсульта и может вызвать тошноту.

Симптомы

Симптомы гиперпаратиреоза включают:

• Совсем нет симптомов
• Путаница, туманное мышление
• Мышечные судороги. Покалывание в руках и ногах.
• Потеря энергии, постоянная усталость
• Проблемы со сном, просыпаться ночью.
• Чувствую себя плохо, но не могу сказать причину
• Потеря интереса к деятельности, невозможность концентрироваться
• Изменения личности, более раздражительные или капризные
• Боль в костях, особенно в ногах
• Изжога (ГЭРБ)
• Снижение полового влечения
• Частые головные боли
• Истончение волос
• Учащенное сердцебиение (аритмия), высокое кровяное давление
• Депрессия
• Никогда не следует повышать уровень кальция в крови.Даже немного повышенный уровень кальция — это ненормально. Люди с немного повышенным уровнем кальция могут по-прежнему иметь пораженную паращитовидную железу.

Причина большинства аденом паращитовидных желез неизвестна. Чаще всего гиперпаратиреоз развивается в возрасте от 40 до 75 лет, но может возникнуть в любом возрасте. Средний возраст — 59 лет.

Эти факторы также могут увеличить риск:

• Наследственность. Если у других членов семьи был гиперпаратиреоз, вы подвергаетесь большему риску развития этого заболевания.
• Синдромы множественной эндокринной неоплазии (MEN1, MEN2a, MEN2b). Это условия, при которых опухоли могут расти в паращитовидных железах, гипофизе и поджелудочной железе. Это состояние также называют множественным эндокринным аденоматозом и синдромом Вермера. Обычно он передается по наследству (передается в семье).
• История применения радиоактивного йода для лечения рака щитовидной железы.
• Детский анамнез лучевого лечения прыщей или других состояний в области головы и шеи (обычное дело в 1940–1950-х годах).
• Радиационное облучение в результате аварий на атомных электростанциях или от других источников.

Гиперплазия паращитовидных желез — это заболевание, отличное от гиперпаратиреоза. При гиперплазии все четыре паращитовидные железы увеличиваются в размерах, но аденома не растет внутри желез. Причина неизвестна. Длительное употребление лития (психиатрического препарата) может увеличить риск развития гиперплазии.

Диагностика

Врачи измеряют уровни паратиреоидного гормона и кальциевого гормона для диагностики гиперпаратиреоидного заболевания.Если оба повышены, это указывает на рост опухоли (аденомы). Аденома может все еще расти, если уровень паратироидного гормона в норме.

Сканирование Sestamibi помогает определить, какая паращитовидная железа поражена. Ваш врач также может назначить МРТ паращитовидных желез.

Лечение

Паращитовидные железы редко заболевают раком, но увеличенную железу необходимо удалить, поскольку она увеличивает содержание кальция в крови. Лекарства не могут контролировать уровень кальция.Хирургия — единственное лечение.

Люди могут нормально функционировать, имея только ½ одной паращитовидной железы.

Для стандартной хирургии околощитовидной железы требуется разрез от 6 до 8 дюймов в нижней части шеи.

В малоинвазивной хирургии паращитовидных желез (MIRP) используется специальный зонд для определения местоположения пораженной железы. MIRP требует только разреза в 1 дюйм.

© 2000-2021 Компания StayWell, LLC. Все права защищены. Эта информация не предназначена для замены профессиональной медицинской помощи.Всегда следуйте инструкциям лечащего врача.

Поглощение и отток холестерина нарушены в клетках трофобласта человека от беременностей с супрафизиологической гиперхолестеринемией матери

Исследовательские группы

Человеческие плаценты были получены от 55 нормальных доношенных беременностей из больницы Clinico UC-CHRISTUS (HCUC 43), Чили, n = и Lindenhofgruppe (Швейцария, n = 12). Расследование соответствовало принципам, изложенным в Хельсинкской декларации.Утверждение этических норм было получено от медицинского факультета Папского католического университета Чили (PUC, ID 11–066) и от кантона Берн, Швейцария (Basec Nr. 2016-00250). Информированное согласие и клинические данные пациентов были получены, как описано ранее ⁹ . Общие материнские (т. Е. Возраст, рост, вес, артериальное давление и уровень глюкозы) и неонатальные (т. Е. Пол, гестационный возраст, вес и рост) переменные были получены из историй болезни. В материнской и пуповинной крови уровни TC; холестерин липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), ЛПНП и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП); и триглицериды (Tg) определялись при сроке беременности (третий триместр).

Беременные женщины с TC <280 мг / дл были включены в группу MPH, а женщины с TC ≥ 280 md / dL в группу MSPH. Пороговое значение для MSPH отражало значения, при которых ранее сообщалось о фетоплацентарной эндотелиальной и сосудистой дисфункции ^{1,2,4,5,7,8,9,24} . Критериями исключения были материнское ожирение на сроке беременности, прегестационный и гестационный диабет, преэклампсия, ограничение внутриутробного развития, пороки развития плода и другие материнские патологии, как описано ранее ⁹ .

Анализы оттока на HDL и ApoA-I были выполнены на образцах из Чили и Швейцарии. Все остальные определения проводились только на образцах от чилийских женщин.

Определение материнского холестерина и триглицеридов

Уровни TC, HDL, LDL, VLDL и Tg определяли в материнской крови, полученной из плечевой венозной крови, и в пуповинной крови во время родов, как описано ⁹ . Определение липидов проводили в клинической лаборатории HCUC с помощью стандартных ферментно-колориметрических анализов, как описано ранее ⁹ .Концентрации ТС в образцах, взятых у женщин из Швейцарии, измеряли с помощью наборов ферментов, приобретенных в Biomérieux.

Первичная культура трофобласта человека (PHT)

PHT была получена путем выделения термина цитотрофобласта из свежей ткани ворсинок плаценты. После выделения клетки культивировали до 72 ч для получения дифференцированного синцитиотрофобласта, как описано ^25,26 . Вкратце, после полоскания в физиологическом растворе (10 ммоль / л Hepes, pH 6,95 плюс 0,9% p / v NaCl) ткань плаценты тщательно измельчали ​​и 30 г трижды (30 мин, 37 ° C) переваривали в физиологическом растворе. Раствор Хенкса / HEPES (HBSS; ммоль / л 5.37 KCl; 0,44 KH ₂ PO ₄ ; 136,9 NaCl; 0,34 Na ₂ HPO ₄ ; 5,55 глюкозы; 100 HEPES; 1,26 CaCl ₂ ; 0,81 MgSO ₄ · 7H ₂ O; pH 7,4) плюс ДНКаза I (Worthington, США) (общая активность: 60,000, 40,000 и 30,000 килобайт соответственно для каждого расщепления) и трипсин (Thermo Fisher Scientific, США) (общая активность: 615,000, 410,000 и 315,000 единиц BAEE соответственно. , для каждого переваривания). После каждой стадии переваривания раствор фильтровали.Переваривание останавливали сывороткой новорожденного теленка (конечная концентрация: 20%) и центрифугировали (975 RCF, 20 ° C, 10 мин). Осадки клеток ресуспендировали в DMEM и разделяли центрифугированием (RCF 1500, 20 ° C, 20 мин) в градиенте Перколла (10–70%) (GE Healthcare, США). Клетки цитотрофобласта получали из фракций градиента от 35 до 55%. Клетки высевали при плотности 100000 клеток / см ² в культуральную среду DMEM / F12 с добавлением фетальной бычьей сыворотки (FBS, 10%) и 100 Ед / мл пенициллин-стрептомицин в стандартных условиях (37 ° C, 5% CO. ₂ ) на 72 ч.Все запасы питательной среды были от Thermo Fisher Scientific (США). Чистоту культуры PHT (93–99%) определяли путем окрашивания клеток специфическими маркерами антицитокератина 7 (CK7), анти-виментина, анти-E-кадгерина и / или фактора фон Виллебранда (vWF). ) (Novus Biologicals, США) с последующим анализом проточной цитометрии в FACSDiva (BD Biosciences, США), как описано ²⁷ . Синциализацию подтверждали визуализацией под микроскопом и определением хорионического гонадотропина человека в культуральных средах с помощью ELISA (R&D Systems, США).Все эксперименты начинали после 72 ч культивирования.

Вестерн-блоттинг

Срезы плаценты гомогенизировали для получения белковых экстрактов. Образцы лизировали в растворе 1 (ммоль / л 10 EDTA, 50 трис-HCl, pH 8,3), смешанном с равным объемом раствора 2 (4% SDS, 20% глицерин, 125 ммоль / л Tris / HCl, pH 6,8). , нагревают (50 ° C, 10 мин), обрабатывают ультразвуком (6 циклов, 10 с, 100 Вт, 4 ° C) и замедляют вращение (15000 RCF, 20 мин), как описано ^9,28 . PHT лизировали в буфере для экстракции белков (100 ммоль / л NaCl, 0.5% Triton X-100, 1% SDS, 50 ммоль / л Tris / HCl, pH 7,4), содержащий смесь ингибиторов протеаз. Экстракты обрабатывали ультразвуком и определяли содержание белка с помощью набора для анализа белков бицинхониновой кислоты (микро BCA) (Thermo Fisher Scientific, США), как описано ²⁸ .

Белки разделяли, как описано ⁹ , электрофорезом в полиакриламидном геле в денатурирующих и восстанавливающих условиях, переносили на поливинилидендифторидные мембраны и позже зондировали первичными кроличьими поликлональными анти-LDLR, анти-аполипопротеином B 100 (ApoB), анти-аполипопротеином AI ( ApoA-I) (Abcam, Великобритания), анти-SR-BI, анти-ABCA1 и анти-ABCG1 (Novus Biological, США), (1: 1000, 18 ч, 4 ° C) и мышиные моноклональные анти-3-гидрокси -3-метилглутарил-КоА редуктаза (HMGCR, 1: 500, 18 часов, 4 ° C) (Santa Cruz Biotechnology, США) и анти-β-актин (1: 5000, 1 час, комнатная температура) (Sigma-Aldrich, США) антитела.После промывки мембраны инкубировали (1 ч, комнатная температура) со вторичными козьими антикроличьими или антимышиными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (Thermo Fisher Scientific, США), как описано ⁹ . Белки детектировали по усиленной хемилюминесценции и количественно определяли денситометрией. Необрезанные кляксы находятся в дополнительных данных.

Иммунофлуоресценция

Фиксированные формалином биоптаты плаценты (10% забуференный раствор формалина, 24 часа, 4 ° C) обрабатывали для рутинной заливки парафином и деления срезов (5 мкм) для гистологического анализа, как описано ^9,28 .Для иммунолокализации срезы депарафинизировали и регидратировали серийными инкубациями в этаноле (100, 98, 75, 50%, 5 мин). Затем срезы кипятили в цитратном буфере (10 ммоль / л, 20 мин, pH 6,0), промывали в растворе фосфатного буфера (PBS, ммоль / л: 130 NaCl, 2,7 KCl, 0,8 Na ₂ HPO ₄ , 1,4 KH ₂ PO ₄ , pH 7,4) и инкубировали (1 ч, комнатная температура) в блокирующем буфере (100 ммоль / л NaCl, 0,05% Triton X-100, 5% бычий сывороточный альбумин (BSA), 50 ммоль / L Трис / HCl, pH 7.5). Срезы плаценты инкубировали (18 ч, 4 ° C) с первичными антителами к ферропортину-1 (FPN-1, маркер базальной мембраны синцитиотрофобласта), щелочной фосфатазой плаценты (PLAP, маркер апикальной мембраны синцитиотрофобласта), CD31 (маркер эндотелия), LDLR. , SR-BI, ApoB, ApoA-I, ABCA1 и ABCG1 и / или мышиные моноклональные анти-CK7 (Sigma-Aldrich, США) в блокирующем буфере (1:30). После двукратной промывки блокирующим буфером вторичные антитела козы против кролика, конъюгированные с Alexa Fluor 488 (H + L, λexc / λem: 495/568 нм, разведение 1: 1000), и конъюгированные с Alexa Fluor 568 козьи антимышиные IgG ( H + L, λexc / λem: 578/603 нм, разведение 1: 1000) (Thermo Fisher Scientific, США) в блокирующем буфере, содержащем 0.Добавляли 1 мкг / мл DAPI (4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол, дигидрохлорид) (Invitrogen, США), как описано ²⁸ . Срезы тканей закрывали и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. После двукратного промывания PBS (комнатная температура) покровные стекла исследовали в конфокальном микроскопе Nikon Eclipse C2. Изображения обрабатывались программой ImageJ версии 1.48 (NIH, США).

Выделение и маркировка липопротеинов

Для анализов поглощения и оттока липопротеины от небеременных доноров выделяли ультрацентрифугированием, как описано ²⁹ .Вкратце, получали сыворотку и добавляли сахарозу (конечная концентрация: 10%), EDTA (10 ммоль / л, pH 7,4), апротинин (2 мкг / мл) и фенилметилсульфонилфторид (PMSF, 1 ммоль / л). Плотность сыворотки доводили с помощью KBr до 1,24 г / мл. К образцам (1,7 мл) добавляли PBS (3,3 мл, плотность: 1,006 г / мл) для создания градиента плотности путем ультрацентрифугирования (ротор SW55Ti, 287000 RCF, 15 ° C, 4 ч). Полосы, соответствующие LDL, HDL и сыворотке с обедненными липопротеинами (LPDS), выделяли из градиента.После диализа в физиологическом растворе (ммоль / л 150 NaCl, 0,34 EDTA, pH 7,4, 4 ° C, 48 ч), LDL и HDL хранили при 4 ° C в герметичной пробирке, насыщенной азотом. Концентрацию белка определяли, как описано в разделе вестерн-блоттинга. Правильное выделение липопротеинов определяли разделением SDS-PAGE с последующим окрашиванием Кумасси R-250 и вестерн-блоттингом для ApoB и ApoA-I.

Для анализов поглощения ЛПНП и ЛПВП метили липофильным флуоресцентным красителем 1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианина перхлорат (DiI, Invitrogen, США), как описано ^30,31 .ЛПНП или ЛПВП (1 мг) смешивали с LPDS (2,5 мг / мл) и инкубировали с DiI (3 мг / мл в ДМСО, 15 ч, 37 ° C). Затем реакционную смесь центрифугировали (400 RCF, 20 ° C, 5 мин), и плотность супернатанта доводили до 1,24 г / мл с помощью KBr. LDL-DiI и HDL-DiI ультрацентрифугировали, выделяли, диализовали и хранили, как описано в предыдущем абзаце.

Анализы поглощения

Измеряли поглощение повышенных концентраций LDL-DiI (0–200 мкг / мл, 2 часа, 37 ° C) и HDL-DiI (0–50 мкг / мл, 4 часа, 37 ° C). в PHT, культивированных в течение 72 часов, которые предварительно инкубировали (в течение ночи) в DMEM / F12, содержащем 5% FBS, путем модификации ранее описанных протоколов ^31,32,33,34 .После инкубации клетки промывали жирной кислотой, свободной от PBS-BSA (FFA) (2 мг / мл), и количественно определяли флуоресценцию (λexc / λem: 550/595) (Infinite M200Pro, Tecan, Австрия). Затем клетки лизировали 0,5 н. КОН, и концентрацию белков в каждом образце определяли с помощью набора реагентов Брэдфорда (Bio-Rad, США). Кроме того, была подготовлена ​​стандартная кривая LDL-DiI и HDL-DiI (0–200 мкг / мл) и измерена флуоресценция. Поглощение выражали как нг липопротеина / мг клеточного белка (нг HDL-DiI или LDL-DiI / мг белка).Значения были скорректированы по гиперболе Михаэлиса-Ментен, и максимальная скорость (V _max ) и кажущаяся константа Михаэлиса-Ментен (K _m ) были рассчитаны, как описано ранее ⁷ .

Анализы оттока

Отток [ ³ H] -холестерина из PHT в ApoA-I или HDL определяли с небольшими модификациями, как описано ^35,36 . Вкратце, PHT культивировали в течение 72 часов, которые предварительно инкубировали в течение 24 часов с DMEM / F12, содержащим 10% FBS с добавлением [ ³ H] -холестерина (0.5 мкКи / мл). После инкубации культуральную среду удаляли, и клетки промывали PBS с добавлением BSA-FFA (2 мг / мл). Затем клетки инкубировали с небеременными изолированными HDL (0–50 мкг / мл, 6 часов, 37 ° C) или ApoA-I (10 мкг / мл, 6 часов, 37 ° C) (Sigma-Aldrich, USA ). Впоследствии культуральную среду восстанавливали, и клетки лизировали КОН. Радиоактивность определяли как в культуральной среде, так и в клеточных лизатах, а отток оценивали как долю радиоактивного сигнала в среде по сравнению с общим сигналом в среде и клетках.Значения были скорректированы по гиперболе Михаэлиса-Ментен, и V _max и K _m были рассчитаны, как описано ранее ⁷ .

Чтобы определить относительный вклад SR-BI в отток холестерина, был проведен анализ путем ингибирования функции рецептора с помощью указанного ингибитора BLT-1 (0-50 мкмоль / л, 6,5 ч, 37 ° C) за 30 мин до инкубации ЛПВП ^19,37 . В качестве контроля были выполнены параллельные анализы для определения сообщаемого эффекта BLT-1 как ингибитора SR-BI-опосредованного поглощения HDL.Поглощение HDL-DiI (50 мкг / мл, 6 часов, 37 ° C) определяли, как описано в предыдущем разделе, в присутствии или в отсутствие BLT-1 (10 мкмоль / л, за 1 час до анализа поглощения, 37 ° C). ) ³⁷ .

Содержание холестерина в клетках

Экстракцию Фолча проводили на 70 мкг белка из лизата PHT, как описано ³⁸ . Лизаты инкубировали с метанолом / хлороформом (1: 2 об. / Об., 30 мин, 50 ° C). Затем добавляли 1 объем воды (18 ч, 4 ° C) и реакционную смесь центрифугировали (750 RCF, 20 мин, 4 ° C).Фазу метанол / вода удаляли, а фазу хлороформа, содержащую клеточный холестерин, выделяли и полностью упаривали в атмосфере азота. Холестерин, экстрагированный из PHT, определяли с помощью анализа Amplex Red Cholesterol (Invitrogen, США) в присутствии или в отсутствие фермента холестеринэстеразы для определения общего (TC) и свободного холестерина (FC) соответственно. Сложные эфиры холестерина определяли как разницу между TC и FC. FC также определяли окрашиванием на филиппин (Sigma-Aldrich, США), как описано ³⁹ .Клетки PHT фиксировали 4% параформальдегидом, их автофлуоресценцию гасили глицином в PBS (1,5 мг / мл, 20 мин, 20 ° C), а затем инкубировали с филиппином (25 мкг / мл, 30 мин, 20 ° C). ). Изображения получали в системе визуализации EVOS FL (Life Technologies, США), а флуоресценцию количественно оценивали с помощью ImageJ версии 1.48 (NIH, США).

Статистический анализ

Значения материнских и неонатальных характеристик представлены как среднее ± стандартное отклонение, как описано ⁹ .Для анализов in vitro значения представлены в виде среднего значения ± S.E.M., где n указывает количество использованных плаценты или клеточных культур (MPH = 3–9 и MSPH = 3–9). Сравнение между двумя или более группами было выполнено с помощью t-критерия Стьюдента или ANOVA (ANOVA используется только на рис. 1E). Статистически значимым считалось р <0,05. Для анализа данных использовалось программное обеспечение GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc., США).

Синцитиотрофобласт и эндотелиальные маркеры в плаценте.

В прошлом посте я описал монетизацию wap-трафика с помощью рекламных систем .

Сегодня я расскажу про эксперименты с партнеркой от всем известного Дугласа . В декабре прошлого года он анонсировал свою Wap-партнерку ( DugWap.ru ), специализирующуюся на технологии Wap-click (когда мобильная подписка подтверждается не кодом из sms, а простым нажатием на кнопку на экране мобильного телефона).

Отличия этой партнерской программы от всех остальных.

• В партнерку абы кого не берут, только через собеседование.
• В партнерке нет реферальной программы (чтобы не плодить пустые аккаунты для тех, кто «простопосмотреть»).
• Есть встроенная Мини-тдс и возможность сливать весь трафик по единой ссылке, а там он уже разойдется по лендингам для разных операторов.
• Подписки можно копить, или моментально продавать
  (Стандартные цены выкупа:
  mts: 26 руб
  megafon: 36 руб
  beeline: 27 руб
  tele2: 20 руб)
  Подозреваю, что для Vip вебмастеров условия лучше. Я не вип, поэтому однозначно утверждать не могу.
• Безопасная схема слива, которая не приводит к санкциям поисковых систем.

Колхозные новости

Я был бы не я если бы не наделал всех возможных ошибок при сливе. За что честно заработал звание «колхозник» от владельца партнерки, когда обратился к Дугласу за консультацией, благо он был у меня в контактах еще со времен покупки комплекса по созданию трафикодающих сайтов Happy Duglas 2. 0. (Да, да я один из тех, кто покупал чудо комплексы по генерации сайтов, которые кстати хорошо работали, но сейчас не об этом).

После непродолжительной беседы и тыкания носом в статью: 7 тонкостей в wap-click-е, которые повышают профит в разы (моей главной ошибкой было пренебрежение 5 пунктом) , стата из несущественно-пренебрежительно-мелкой преобразилась в более ли менее адекватную, которую уже не совсем стыдно показать.

Статистика доходов музыкального/видео сайта на вап клике от dugwap.ru

Естественно ни URL ни ни конкретную тематику палить не буду, скажу лишь, что это музыкальный и видео траф. Честно говоря сам был в шоке что с такого небольшого трафа с такого ГС можно что то толковое заработать.

Как дела с фильтрами поисковых систем.

Партнерка подойдет как для монетизации беленьких проектов, так и генерированных сайтов и дорвеев, которые по определению (как и все генерированные сайты) в потенциальном риске бана и санкций поисковых систем, поэтому лишний раз подвергать опасности такие сайты нельзя, и схема безопасного слива уже как пол года их не палит перед автоматическими фильтрами.

У меня есть доступ к форуму бигдугласа и там обсуждаются схемы слива и эта партнерка вообще.

И до сих пор каких-то фатальных или массовых банов не было. Однако никто не застрахован от стука, ручных санкций ассесоров, произвольных капризов поисковой системы и космических лучей с помощью которых нами управляют инопланетяне.

Как попасть в партнерку? (варианты)

1. Быть лично знакомым с владельцем
2. Пройти мини собеседование в скайпе «dugwap.ru» или «BigDuglas»

Ничего сложного в собеседовании нет и резюме в письменном виде в 3х экземплярах предоставлять не придется, это всего лишь фильтр от школоло и неадекватов. Любой адекватный адверт, вебмастер получит инвайт за пару минут.

Стоит ли игра свеч?

Однозначно стоит.

Лучшего способа заработать с мобильного Адалт, музыкального, видео и файлового трафика сейчас пожалуй нет. Главное помнить, что не стоит сливать трафик с сайтов, тематика которых запрещена в РФ. Если сомневаетесь, то лучше уточнить в тикетах или прямо в скайпе техподдержки.

Если играть по правилам, то все будут в выигрыше.

Всем профит.

Оцените этот пост!

Работал инженером-теплоэнергетиком, когда понял, что мое призвание интернет. После чего сразу уволился и завел этот блог (блогу уже 12 лет).

Прошел путь заработка в интернете от бонусхантинга до профессионального интернет-маркетолога.

Сейчас работаю исключительно в интернете, занимаюсь арбтражом трафика, путешествую, веду блог.

Мой телеграмм для связи @sergcv

Мошенничество в интернете: Wap-Click

 
Сегодня мне, как владельцу данного ресурса, пришло предложение от сервиса wap.click с предложением сотрудничества. Пройдя по ссылке и вникнув в суть предложения, я понял, что это обычное мошенничество в интернете. И хотя формально это скорее всего нельзя отнести к статье 159 УК РФ «Мошенничество», по факту пострадавших от этого меньше не становится.

Поскольку это касается не только меня и моего сайта, данной статьей я решил предостеречь читателей и возможно уберечь от финансовых потерь, о которых они даже могут не подозревать в течение длительного времени.
 

Описание схемы мошенничества данного сервиса

Описание данной схемы содержится на самом сервисе. Для этого вам надо пройти по ссылке: wap.click (наберите в адресной строке браузера), прокрутите страницу до конца вниз. Там увидите активную ссылку «Описание схемы работы WapClick». Нажмите на нее – вам откроется спойлер в котором владельцам интернет-площадок предлагают (не побоюсь этого слова) подельничество в мошенничестве.
 

Суть мошенничества в следующем:

Владельцу интернет-ресурса предлагают разместить скрипт в какой-нибудь кнопке, при нажатии на которую пользователь совершает платную подписку, совершенно не подозревая об этом.

Вот как цинично и непрекрыто сервис описывает схему мошенничества, когда предлагает в ней участвовать владельцам сайтов (цитата):

Wap-click — совершенно новая и инновационная технология мобильных подписок! Абоненту достаточно нажать одну кнопку для совершения подписки. При этом он получает качественный контент, а списания с его счета происходят незаметно и ежедневно!

Далее приводится пример:

1. Абонент решил посетить сайт по кинофильмам.
2. При заходе на сайт специальным скриптом он перенаправляется на лендинг, на котором будет кнопка «Play» или «Смотреть».
3. Нажимая на кнопку, абонент соглашается с условиями и подписывается на услугу.
4. Он получает контент, а с его счета будет ежедневно списываться определенная сумма. Средне статистический абонент оставляет подписку на значительный срок (мое примечание: совершенно не подозревая об этом), в течении которой вы получаете деньги ежедневно.
 

Скриншот описания схемы

Как быть, если вы узнали о незаконно подключенной услуге

Поискав в интернете информацию, я пришел к выводу, что сотрудничает с этим мошенническим сервисом только оператор связи Мегафон. Хорошую статью по отключению этой незаконной услуги можно прочитать здесь: http://www. nikitakiselev.ru/post/22 .
Комментарии пострадавших к статье по ссылке тоже очень интересны. Я бы даже сказал, что с них и нужно начинать читать, чтобы понять, насколько проблема данного вида мошенничества в интернете актуальна.
Также не помешает почаще проверять расходы на своем мобильном телефоне.

data-yashareQuickServices=»vkontakte,facebook,odnoklassniki»

еще СТАТЬИ >>>

FCC получила более 1000 жалоб на выступление Грэмми «WAP»

Еще в 2016 году Федеральная комиссия по связи получила около 47 страниц гневных жалоб на выступление Бейонсе в перерыве между перерывами на Суперкубке, на котором поп-звезда и ее танцоры вышли на сцену в одетых нарядах. напоминает Черных пантер. Но это ничто по сравнению с более 1000 электронных писем , которыми Федеральная комиссия по связи была засыпана после ночи 14 марта 2021 года, после того как Карди Би и Меган Ти Жеребец выступили с песней WAP на 63-й ежегодной премии Грэмми.

Учитывая, что «WAP» — это полное раскрытие женской сексуальности — и что и рэперы, и их дублирующая команда во время выступления маскировались под стриптизерш под гигантскими туфлями на шпильке — есть некоторые знакомые закономерности с жалобами FCC. «Грязь», «отвратительный» и общий стыд шлюх существуют в большом количестве. Возьмите этого человека из «Не ваше дело, Калифорния», который настроился на Грэмми, чтобы проверить, не производятся ли какие-либо «неприличные и / или политические шутки» (звучит как забавное хобби), и получил намного больше, чем рассчитывал. для:

«Я хочу подать официальную жалобу на телевизионную награду« Грэмми 2021 ».Хотя я не смотрел все мероприятие целиком, я просто случайно настроился, чтобы посмотреть, извергают ли МС, исполнители и т. Карди Б / Меган и т. Д. И т. Д. Дисплей. Это действительно то, к чему стремятся женщины (примечание: это Месяц женщин в истории) и девушки. Ты, должно быть, шутишь. Это была отвратительная демонстрация того, что шлюхи являются шлюхами. Это будет продолжаться? Если да, то я, конечно, хочу знать, к кому обратиться, чтобы подать иск против исполнителей, сети и всех без исключения лиц, корпораций и т. Д., Которые прямо или косвенно участвовали в демонстрации порнографии.Если вы ничего не сделаете с этим, мне нужно будет обратиться за юридической консультацией относительно любых действий, которые я могу предпринять против вас ». [SIC]

Есть также много обвинений в том, что Грэмми объективирует женское тело. Возьмите этот адрес электронной почты:

«Я чувствовал себя оскорбленным выступлением Меган Сталлион и Карди Би. Я за секс-позитивность и бодипозитива, но это выступление перешло черту порнографии. Многие дети в то время еще не спали, и даже взрослые, не дававшие согласия на это, неожиданно смотрели на чистую объективацию женщин во всей красе.Не говоря уже о том, что Тревор Ной истекал слюной, вспотел и кричал, как будто он был в стриптиз-клубе. Я массажист с глубоким уважением к человеческому телу, который обнаружил, что плачу до сна, недоумевая, как такое можно допустить по телевидению. И как далеко это зайдет в следующем году и в последующие годы. Искусство и объективация — противоположные стороны медали. Объективация увековечивает насилие в отношении женщин, поддерживая волновой эффект, вызывающий насилие в семье, торговлю людьми, поощряя потребление женщин, а затем избавляясь от них.Я смотрел Грэмми каждый год с 5 лет. Это дало мне, как музыканту, к чему стремиться. Как женщина, я больше никогда не буду смотреть эту программу из-за разрешения этого выступления. с 1980 ″ [SIC]

Неважно, что Карди Би и Меган Ти Жеребец имели влияние на собственное выступление. (Кроме того, да, во всех этих жалобах вы найдете Меган, написанную как «Меган».)

Знаете ли вы, что лицемерно по мнению зрителей? Доктора Сьюза и мистера Картофельная Голова «отменили», но Грэмми сняли с крючка из-за «WAP.По крайней мере, это согласно этому жителю Ричмонда, штат Вирджиния, и многим другим в файле FCC:

«Я не решался подавать эту жалобу, но в среде, где мистер Картофельная голова, доктор Сьюз, Питер Пэн и т. Д. Удаляются из поля зрения публики, трудно терпеть гораздо меньше желудка, чем выступление Cardi B. на Грэмми. Это было отвратительно, и мысль о маленьких детях, возможно, смотрящих на это, ужасает меня ». [SIC]

Эта жалоба из Данди, штат Мичиган, была странно конкретной:

«Я хотел бы официально пожаловаться на порнографическое содержание 63-й ежегодной премии GRAMMY Awards® 2021 года в прямом эфире в воскресенье, 14 марта, в 20:00 по восточному времени / 17:00 по тихоокеанскому времени на канале CBS & Paramount»

С ® и всем остальным! Люблю хороший копипаст.И, наконец, жалоба, предполагающая возможный ребрендинг Грэмми и CBS:

«Ваша краткая биография подразумевает (по крайней мере, для меня) семейные ценности. Итак, я надеюсь, что вы каким-то образом попытаетесь положить конец вульгарной, прискорбной ерунде, представленной по национальному телевидению под названием «Грэмми». Если у вас не получается, просто переименуйте его во что-нибудь более подходящее и соответствующее тому, чем оно было на самом деле… LivePorn ». [SIC]

Нет никакого реального смысла умиротворять толпу «подумай о детях», но разве эти люди не понимают, что на самом деле во время «WAP» не было наготы или что все непристойные тексты в песне подверглись цензуре? Cardi B не повторяла «мокрый мокрый мокрый» неоднократно, чтобы эта ерунда продолжалась.

Дополнительная отчетность Kory Grow

Fetty Wap — Эффект бабочки | Reviews

Взрывной взлет Фетти Вап на стал одним из самых мощных рэп-арок 2015 года. Его сингл «Trap Queen» сразу же произвел фурор, с его захватывающим рефреном, подкрепленным мгновенно запоминающимся видео. Дебютный альбом «Fetty Wap», подчеркивающий его статус рядом с десяткой лучших по версии Billboard, казалось, ознаменовал появление смелого голоса в хип-хопе, человека, который не боялся обозначить свои амбиции.

Но потом…

На создание нового альбома «The Butterfly Effect» ушло около шести лет, длительный перерыв, который включал в себя брак, развод, судебные дела и личное горе. Два микстейпа пытались восполнить пробел, но было ощущение, что пейзаж меняется, а Фетти — по причинам, которые фанаты пытались понять — стоял на месте.

«Эффект бабочки» пытается запустить этот творческий двигатель, и, хотя он действует периодически, Фетти Вап изо всех сил пытается вернуть себе начало своей карьеры.«Out The Hood» и «The Truth» были впечатляющим вступлением, но пластинка очень быстро теряет пар, а такие песни, как «That’s Facts» и «Talk My Shit», не зажигаются.

Действительно, акцент Фетти Вапа на восстановлении утраченных позиций просто подчеркивает, что он далеко позади. С такими названиями треков, как «Remember Me» и «They Know My Name», артист из Нью-Джерси, кажется, объясняет проблему — пантеон рэпа изменился, и целые жанры поднимались и падали с тех пор, как вышел его дебютный альбом.

Лучшие моменты последнего альбома, такие как «My Moment» и «Queen», заслуживают внимания, но «The Butterfly Effect» изо всех сил пытается удержать внимание слушателя. По иронии судьбы для проекта, название которого отсылает к теории хаоса, «Эффект бабочки» выглядит слишком предсказуемым, слишком безопасным и слишком простым — атрибуты, на которые мало кто обратил бы внимание Фетти Вап во время его восхождения, но он утверждает, что ему будет трудно отмахнуться. отсюда и далее.

5/10

Слова: Робин Мюррей

— — —

— — —

Обзоры сайтов WAP за 2020 и 2021 годы в Центре обзора

: WAP

Когда мы увидели эти два имени вместе, мы с самого начала знали, что это не будет полезной семейной песней, которую можно будет играть в машине с родителями по дороге в церковь.Так что, когда мы впервые его посмотрели, у нас были наушники.

No one gonna talk about how the fountain had water coming out the titties 😭 @iamcardib @theestallion pic.twitter.com/E1pmhIjUtL

— j | SAW TAYLOR IN CARDIFF 🩵 (@trueskhloe) August 7, 2020

Статуя женщины, сидящей на корточках у фонтана

Первая мысль : Я не думаю, что это видео будет отслеживаться YouTube.

Вода льется из двери

Первая мысль : Бейонсе вот-вот выскочит с битой!

После прослушивания всей песни хлынувшая вода обрела смысл.

непопулярное мнение, на самом деле очень важно, чтобы молодые женщины слышали сексуально «откровенные» тексты с агентством от женщин, а не от мужчин-рэперов

— Лорен Шанель Аллен (@MichelleHux) 7 августа 2020 года

Я бы не сказал, что я ханжа но этой песни было много.Это определенно было ДОПОЛНИТЕЛЬНО во всем! Волосы, наряды, визуальные эффекты, решетки, противное, хореография, снова противное. Это была сенсорная перегрузка. Но я понимаю почему.

Прошел год с тех пор, как Cardi B выпустила свою последнюю песню «Press». Сестре нужен был хит. Она выложилась на все сто ради этой песни. Меган Ти Жеребец сейчас восходящая артистка, и она была стратегическим выбором. Этот коллаб был взаимовыгодным. Cardi B запустила свой веб-сайт, который рухнул, когда на него устремились ее последователи.Она также вышла в прямом эфире в Instagram, чтобы подписать ограниченный выпуск товаров для своих поклонников. Сестра давилась, как будто сейчас 40 неделя, и вы не можете дождаться, когда выйдет ребенок.

Эй, ребята, да, мой сайт вылетел из-за ВСЕХ Я ЛЮБОВЬ! Я так потрясен и взволнован всей любовью. Пожалуйста, оставайтесь на сайте, над которым мы работаем !! Все винилы будут подписаны! pic.twitter.com/LyQbhvVB02

— iamcardib (@iamcardib) 4 августа 2020 г.

Они мариновали нас неделями! Все эти сплетни о том, что Кайли Дженнер отписалась от Меган Ти Жеребец после того, как Тори Лейнс якобы выстрелил в обе ноги Мэг.Только для того, чтобы в клипе снялась та же Кайли Дженнер! Уф, чили!

#MEFDiscussions Прошлой ночью Cardi B и Megan Thee Stallion выпустили видео для их ожидаемого коллаборации «WAP». Визуальные эффекты были ВСЕ с камеями от женщин-артисток. Поклонников не было на эпизодической роли Кайли Дженнер в видео. Кто должен был заменить Кайли в WAP? ✨ pic.twitter.com/GQgPqdODi5

— MEFeater Magazine (@mefeater) 7 августа 2020 г.

Я полностью за женщин, выражающих свою сексуальность, но это немного переборщило.Это было на грани безвкусицы. Думаю, это примета времени.

В конечном счете, результаты Cardi B были достигнуты, и ей заслуги.

ОБЗОР WAP TIPSTERS | [ОБНОВЛЕНИЕ 2021]

Добро пожаловать в отчет о продукте Wap Tipsters. Группа профессионального анализа продуктов My-Review.net проверила Wap Tipsters. На этой уникальной странице обзора Wap Tipsters. Прежде чем мы начнем, позвольте мне вкратце описать, как именно работает эта страница. Я надеюсь предоставить беспристрастный отчет о продукте.Я использую статистические показатели, чтобы писать обзоры продуктов, чтобы убедиться, что они на 100% нейтральны. Я дополнительно предоставляю информацию о том, где покупать, систему обратной связи с клиентами, которая позволяет просматривать только проверенные покупатели, и мой эксклюзивный бонус за покупку, который приносит пользу вам за использование my-review.net.

Обратите внимание, что у меня есть партнерская ассоциация с Wap Tipsters. Для получения дополнительной информации перейдите на официальный сайт ниже, чтобы получить Wap Tipsters. Это может быть маленький или большой.В любом случае вы счастливы. Никто не приказывает тебе. Вы сами решаете, когда работать и как работать. Кажется, хороший вариант? Если да, вы можете приступить к настройке Wap Tipsters. Это очень просто и интересно. Посмотри, как тебе это подходит.

Учитывая каждую мелочь, мы присвоили Wap Tipsters общий рейтинг 4,45. Мы полностью можем рекомендовать Wap Tipsters — у него отличный рейтинг, очень низкая скорость возврата и сотни довольных клиентов.

Щелкните здесь, чтобы открыть всю страницу

Реальные вопросы в реальном времени

• Малоизвестные способы определить тенденции на рынке и узнать, чего хотят люди и когда они хотят
• Как открыть Wap Tipsters в соответствии со всеми местными правилами и нормативами
• Как обнаружить t все время фавориты
• Простой способ добавить что-то новое в Wap Tipsters
• Раскрывает скрытую правду за установкой цен на Wap Tipsters

Самая большая особенность Wap Tipsters — это то, что вы можете чтобы получить доступ к зоне для участников в кратчайшие сроки после регистрации в Wap Tipsters, откуда вы можете скачать Wap Tipsters. При желании вы даже можете воспользоваться онлайн-версией Wap Tipsters.

Wap Tipsters в последнее время очень популярны на рынке цифровых продуктов. Большинство людей покупают товары, не зная, что именно они покупают.

Wap Tipsters — это идеальный вариант, который многие пользователи покупают для своих нужд. А клиенты Wap Tipsters присылают много положительных отзывов о Wap Tipsters.

Wap Tipsters — наиболее востребованный продукт, который покупают многие пользователи.И Wap Tipsters — идеальный цифровой продукт для вас и экспертов. В зоне для членов Wap Tipsters можно найти самую свежую информацию о Wap Tipsters.

Во-первых, мы можем сказать, что вы чувствуете, что это именно тот продукт, о котором вы давно мечтали. Несмотря на то, что я сомневался в ценности Wap Tipsters, если вы загружаете Wap Tipsters и не получаете от них удовольствия. Не беспокойтесь о Wap Tipsters.

Самая большая особенность Wap Tipsters заключается в том, что вы можете получить доступ к зоне для участников в кратчайшие сроки после регистрации в Wap Tipsters, откуда вы можете загрузить программное обеспечение. При желании вы можете даже купить его онлайн-версию.

Возможность прослушивания как аудио, так и видео версии музыки позволяет вам наслаждаться Wap Tipsters так, как вы хотите. Отличная цена и доступность — вот отличительные черты Wap Tipsters.

60-дневная гарантия возврата денег предоставляется через Clickbank. Дополнительно Wap Tipsters легко скачать. И Wap Tipsters не несет за вас никакого риска. Потому что Wap Tipsters под защитой Clickbank.

• Типстеры Wap очень доступны.На самом деле, его цена — мизерная сумма, если учесть облегчение, прибыль, советы и уверенность, которые он нам дает.
• Все, что объясняется простым английским языком и логически изложено в Wap Tipsters,
• Wap Tipsters помогает достичь его цель в ограниченное время,
• Wap Tipsters будут лучшими инвестициями, которые вы когда-либо делали,
• Wap Tipsters установят новую тенденцию,
• Люди будут обращаться к вам за новаторскими идеями о Wap Tipsters,
• Ваше финансовое положение улучшится повышение с помощью Wap Tipsters,
• Друзья и семья вас оценят,
• Прежде всего, Wap Tipsters безрисковый,
• И, конечно же, есть 100% гарантия возврата денег.

Wap Tipsters — проверенный продукт, у которого мало или нет отрицательных отзывов. Нас беспокоят только жалобы наших реальных клиентов на Wap Tipsters, если таковые имеются. Но до сих пор нет сообщений.

Типстеры Wap — замечательный продукт, и я уверен, что вы порекомендуете его своим друзьям. Цена на Wap Tipsters — ничто, если рассматривать услуги и бонусы. Скоро приобретите своих Wap-типстеров и станьте счастливым соперником! Просто нажмите кнопку ниже, чтобы стать владельцем Wap Tipsters, заказать со скидкой после оплаты и получить бонусы.

(Посещено 327 раз, сегодня 1 раз)

WAP BY CARDI B FT МЕГАНОВСКИЙ ЖЕРЕБЦ «ЖАНР РЭПА ПОЛНА ЭРОТИЧЕСКОГО ДЕРЬМА!» + ЗНАЧЕНИЕ КАЖДОЙ ЛИНИИ … — Фотоблог Ogefash

(+ ТЕКСТ + СМЫСЛ + ПЕРЕВОД) ОБЗОР МУЗЫКИ: WAP BY CARDI B FT MEGAN THEE STALLION «RAP GENRE FULL OF EROTIC SHIT!» + ЗДЕСЬ ЗНАЧЕНИЕ КАЖДОЙ СТРОКИ

Когда дело доходит до всех жанров музыки в мире; жанр рэпа имеет самое высокое содержание пошлости. Фактически, в целом музыкальный мир становится все более запутанным: 98% их текстов полностью связаны с сексом. Изначально; артисты использовали закодированные слова для обозначения всего, что связано с сексом в их песнях; но сейчас все это прекратилось, поскольку они бесчисленное количество раз свободно произносят сексуальные слова, и я действительно не знаю почему.

Достаточно взглянуть на песню «WAP» Карди Б и Меган Ти Жеребец, где они изображают женщин как сексуальный объект; как женщины, с которыми вы легко можете заняться сексом, когда у вас куча денег на земле, как женщины, которые обменивают свое тело на деньги.. Уф! Женщины действительно поддерживают женщин!

Да и чего еще ждать от разовой стриптизерши…

ЧТО ТАКОЕ ПЕСНЯ WAP ОТ CARDI B FT MEGAN THEE STALLION О ПРОБЛЕМЕ

Не знаю, есть ли у WAP другие значения, но в контексте этой песни WAP не имеет другого значения, кроме «Wet Ass Pussy».

Акцент на мокрой попке киски должен подчеркнуть сильную готовность женщины к сексу. Считается, что когда женщина сексуально возбуждена и у нее влажное влагалище, секс с ней становится приятным.

Следовательно, песня в основном говорит о сексе с женщиной и о том, как приятно, когда у женщины мокрая задница киски.

В песне также говорится о сексуальном удовольствии с каким-то мачо с хорошим соколом-самцом. В песне женщины также изображаются как сексуальные объекты. Он изображает женщин как проституток, с которыми мужчины могут легко заняться сексом, если у них с собой много денег. По сути, если женщина хороша в сексе, мужчины сделают для нее все, что угодно. Они платили ей за обучение, опустошали свои счета и так далее, просто чтобы заняться сексом с такой женщиной; особенно с мокрой киской (киска с мокрой задницей).

Лирически : Текст песни сексуален. Слова, используемые на протяжении всей песни, вульгарны. Тексты песен не следуют определенному шаблону. Трудно сказать, какой это припев, хук и как были аранжированы стихи. Артисты пели на стандартном английском.

ЗНАЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ЛИНИЙ

Сухой идет, а выходит мокрый

Это относится к состоянию мужчины после полового акта с женщиной.По сути, когда мужчина засовывает свой член во влажную киску женщины; его член, который изначально был сухим, становится мокрым, когда выходит из ее киски.

Если не зависнет то не грохнет

Речь идет об эрекции на стороне мужчины. Если его член не стоит вертикально или твердо, тогда он не будет достаточно твердым для секса, он не сможет хорошо трахаться; возможно, какая-то эректильная дисфункция.

Я сказал сертифицированный урод семь дней в неделю

Тот, кто может заниматься сексом без перерыва, без устали, изо дня в день

Принесите ведро и швабру для этой мокрой задницы киски

Женщины, которые сексуально возбуждены и выделяют много жидкости, которая смазывает влагалище во время секса.

Вокал : В их вокальном стиле была последовательность. Хотя в какой-то момент их вокал был недостаточно чистым.

Мелодия : Среднетемповый бит. Основными инструментами, использованными в композиции, являются барабан и фортепиано.

Ролик довольно красочный. На нем изображена Кайли Дженнер (сестра Ким Кардашьян), одетая в одежду с леопардовым принтом. Это была женщина, спускавшаяся по коридору. Нормани тоже был в видео.

Взгляните на тексты ниже

Есть лирика и перевод к этой песне? Пожалуйста, поделитесь с нами через поле для комментариев

ТЕКСТЫ ДЛЯ WAP BY CARDI B FT MEGAN THEE STALLION

ВВЕДЕНИЕ / КРЮК

Шлюхи в этом доме

В этом доме есть шлюхи

В этом доме есть шлюхи

В этом доме есть шлюхи (Постой)

ХОР

Я сказал сертифицированный урод семь дней в неделю

Мокрая задница, киска, сделай эту игру слабой (уоу)

Да (5x) ты работаешь с мокрой задницей киски

Принеси ведро и швабру для этой киски с мокрой задницей

отдай мне все, что у тебя есть для этой мокрой задницы киски

СТИХ 1

(CARDI B)

Бей его, детка, лови заряд

Очень большой; генитальный жесткий

Положи этот член прямо тебе в лицо

Проведите носом, как кредитную карту

Хоп сверху, я хочу покататься

делаю кегель; Я вроде вау

Посмотри на мой рот, посмотри на мои бедра

Вульва мокрая, дай нырнуть

Свяжи меня, как будто я удивлен

Давай поиграем в маскировку

Я хочу, чтобы вы припарковали этот большой грузовик Mack прямо в этом маленьком гараже

Обрежь меня, сделай ручей

На публике устроить сцену

Я не готовлю Я не убираю

Но позвольте мне сказать вам, что я получил это кольцо

(MEGAN THEE STALLON)

Поглоти меня, проглоти меня, стекай с меня сбоку

Быстрый прыжок, прежде чем ты позволишь себе попасть внутрь меня

Я говорю ему, куда его положить, никогда не говори ему, где я собираюсь быть

Я наехал на него, пока меня не преследовал ниггер.

Говори свое дерьмо, кусай губу

Попроси машину, пока ты катаешься на этом члене (Пока ты катаешься на этом члене)

Тебе на самом деле никогда не придется трахать его ни за что.

Он уже принял решение еще до того, как пришел

ХОР

Теперь возьми ботинки и пальто для этой мокрой задницы киски

Он купил телефон только для фоток этой мокрой задницы киски

Заплати за обучение, чтобы поцеловать меня в эту мокрую задницу киски

Теперь сделай дождь, если хочешь увидеть мокрую задницу киски

ИНТЕРЛЮД

СТИХ 2

(CARDI B)

Слушай, мне нужен сильный нападающий, нужен глубокий ххххх

Нужен любитель поилки Хенни, нужен курильщик травки

Не змея xxxxx Мне нужна королевская кобра

С крючком в надежде, что он наклонится над

У него есть деньги, вот куда я направляюсь

Петух А1 как и его кредит

У него хорошая борода, я пытаюсь ее намочить

Я позволил ему ххххх, теперь он диабетик

Я не хочу плевать Я хочу xxxxxxx

Я хочу xxxx Я хочу xxxxx

Я хочу, чтобы вы прикоснулись к этому, прикоснитесь к тому, что качается у меня в горле

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

Он идет сухой, а выходит мокрый

Я катаюсь на этой штуке, xxxxxxxxx позади меня

То, как я плюнул, и теперь он пытается подписать меня

MEGAN THEE STALLON

Я знаю, что я урод наручники поводки

Переключи мой парик, заставь его почувствовать, будто он обманывает

Поставьте его на колени, дайте ему поверить в

Никогда не проигрывал, но я ищу побои

В пищевой цепочке я съедаю тебя

Если он съел мою задницу, он пиздец

Подставка Big D для большого поведения

Я мог бы сделать тебе бюст, прежде чем я когда-либо встречу тебя

Если не зависнет, то не удастся

Ты не можешь обидеть меня, но я люблю боль

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

Когда я катаюсь на D, я пишу свое имя

КРЮК

Шлюхи в этом доме

В этом доме есть шлюхи

В этом доме есть шлюхи

В этом доме есть шлюхи

ХОР

Да (4 раза) ты работаешь с мокрой задницей киски

Принеси ведро и швабру для этой киски с мокрой задницей

отдай мне все, что у тебя есть для этой мокрой задницы киски

Теперь сверху пусть она падает, это какая-то мокрая задница киски

А теперь возьми ведро и швабру, то есть мокрую киску из задницы

Я говорю WAP WAP WAP, это какая-то мокрая задница киски

Макароны в горшочке с мокрой задницей киски

UH

КРЮК / OUTRO

Шлюхи в этом доме

В этом доме есть шлюхи (17 РАЗ)

ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ : 4 МИНУТЫ 12 СЕКУНД

НАПРАВЛЕННЫЙ КОЛЛИН ТИЛЛИ

СМОТРЕТЬ БОЛЬШЕ ИЗОБРАЖЕНИЙ ИЗ WAP-ПЕСНИ НИЖЕ

#ogefash

ПОСМОТРЕТЬ ВИДЕО ДЛЯ ПЕСНИ WAP ОТ CARDI B FT MEGAN THEE STALLION НИЖЕ

#ogefash

Нравится:

Нравится Загрузка…

Более 1000 жалоб на производительность WAP отправлено в FCC

• FCC получила более 1000 жалоб на выступление Карди Би и Меган Ти Жеребец на Грэмми.
• Некоторые зрители назвали исполнение «WAP» «порнографическим» и неуместным для детей.
• Эта песня вызвала споры с момента ее выпуска в августе.

Cardi B и Megan Thee Stallion исполнили свой хит №1 «WAP» в прошлом месяце на 63-й ежегодной церемонии вручения премии Грэмми — очевидно, к большому разочарованию некоторых зрителей.

По данным Rolling Stone, на этой неделе Федеральная комиссия по связи получила более 1000 жалоб относительно выступления дуэта на церемонии награждения.

Во время церемонии вручения премии «Грэмми», которая транслировалась 14 марта на канале CBS, Карди Би и Меган Ти Жеребец исполнили непристойное попурри из «Body», «Savage», «Up» и «WAP». Для финальной песни пара вызывающе танцевала вместе на массивной кровати. Некоторые зрители утверждали, что спектакль не подходит для детей и включал «порнографический контент».«

» Я чувствовал себя оскорбленным выступлением Меган Сталлион и Карди Би. Я выступаю за секс-позитив и бодипозитив, но это выступление перешло черту порнографии, — сказал один из зрителей по электронной почте, сообщает Rolling Stone. чистая объективация женщин в лучшем виде. Объективация увековечивает насилие в отношении женщин, поддерживая волновой эффект, вызывающий насилие в семье, торговлю людьми, поощряя потребление женщин, а затем избавляясь от них. «

Житель Вирджинии также выразил обеспокоенность по поводу того, что дети, возможно, видели представление, написав: «Трудно вынести гораздо меньше желудка, когда выступление Карди Би на Грэмми. Это было отвратительно, и мысль о маленьких детях, возможно, смотрящих это представление, ужасает меня. . »

Другие зрители атаковали CBS и призвали сеть прекратить «вульгарный» контент и провести ребрендинг.

«Я надеюсь, что вы каким-то образом попытаетесь положить конец вульгарной, прискорбной ерунде, представленной по национальному телевидению под названием« Грэмми »», — написал житель Мичигана. «Если вы не можете, просто переименуйте его во что-нибудь более подходящее и соответствующее тому, чем оно было на самом деле… LivePorn».

Житель Калифорнии далее пригрозил подать в суд, если CBS не прекратит показ «порнографии».

Жалобы не совсем удивительны, учитывая, что песня была в центре консервативной критики с момента ее выпуска в августе.

Когда был выпущен видеоклип на двоих, кандидат в Сенат США от республиканской партии Джеймс П. Брэдли написал в твите, что тексты его лично оскорбили, а ведущий Fox News Такер Карлсон назвал песню «мусором» и сказал, что рэперы » должно быть стыдно за себя.«

Коллеги-артисты также поддержали: CeeLo Green сказал, что есть« время и место для контента для взрослых », назвав современную музыку« лично и морально разочаровывающей ».

Скачать данный список организаций в Excel формате

ЗАО Банк «ВТБ 24» | Уральская Региональная Строительная компания

• Объект: «Реконструкция помещения банка ВТБ 24 (ЗАО) расположенного по адресу: г. Екатеринбург, Щорса, 35»

Общая площадь: 15 м2

Виды работ: Генподрядчик, Генпроектировщик.

Сроки выполнения работ: 3  квартал 2012 г.

• Объект: «Реконструкция помещения банка ВТБ 24 (ЗАО) расположенного по адресу: г. Екатеринбург, пр. Ленина, 27»

Общая площадь: 861,4 м2

Виды работ: Генподрядчик, Генпроектировщик, капитальный ремонт фасада, внутренних помещений и фальцевой кровли.

Сроки выполнения работ: 2-3  квартал 2012 г.